Зоогигиеническая оценка безвредности монклавита-1 и его применение при выращивании телят

На правах рукописи

АФАНАСЬЕВА ОЛЬГА МИХАЙЛОВНА

ЗООГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БЕЗВРЕДНОСТИ МОНКЛАВИТА-1 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ ТЕЛЯТ

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена

и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург – 2011

Работа выполнена на кафедре ветеринарной гигиены и санитарии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ

Кузнецов Анатолий Федорович.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Зеленевский Николай Вячеславович;

доктор ветеринарных наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ,

Белкин Борис Леонидович

Ведущая организация - ГНУ «Всероссийский научно-

исследовательский институт ветеринарной

санитарии, гигиены и экологии»

Защита диссертации состоится 14 апреля 2011 г. в 13-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.02 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, дом 5, тел. / факс (812) 388-36-31.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат размещен на сайте СПбГАВМ: http://spbgavm.ru «11» марта 2011 г.

Автореферат разослан « 14 » марта 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.в.н. Урбан В.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Скотоводство – ведущая отрасль животноводства и одним из решающих факторов получения максимальной и качественной продукции является сохранение и выращивание здорового поголовья молодняка крупного рогатого скота. В ранний постнатальный период своего развития организм новорожденного теленка более подвержен постоянному воздействию различных факторов внешней среды: условиям содержания, особенностям технологии выращивания, кормления и т.д. (Г.К. Волков, 2003; Н.К. Кириллов,2004; А.Ф. Кузнецов, 2007; А.М. Смирнов, 2008 и др.).

Жизнеспособность новорожденного теленка определяется многими факторами: это, прежде всего, и состоянием здоровья коровы; физиологически обоснованные зоогигиенические условия ухода, кормления и содержания теленка в постнатальный период жизни.

Разработка и изыскание наиболее рациональных, инновационных приемов выращивания новорожденных телят, которые обеспечивают формирование жизнестойких, высокопродуктивных и высокорезистентных качеств их организма, крайне важны для современных интенсивных форм содержания крупного рогатого скота. Это усиливается и тем, что период хозяйственного использования крупного рогатого скота более продолжителен, чем свиней, овец и птицы (И.И. Барабанов, 2005; А.Ф. Трофимов, 2006; В.Г. Семёнов, 2008; А.А. Шуканов, 2008).

Для повышения естественной резистентности организма новорожденных телят используют различные препараты специфического (вакцины, сыворотка) и неспецифического действия (химиопрепараты и т.д.). Универсальным представителем этого класса средств является новый отечественный препарат Монклавит-1, который как йодсодержащий полимер обладает выраженными антимикробными и физиологически-активными (как микроэлемент) воздействиями на организм животного.

Поэтому, применение телятам Монклавита-1, который содержит в своем составе йод в форме водного раствора поливинил-N-амидоциклосульфойодида, для неспецифической профилактики диспепсии у телят – актуально.

Цель и задачи исследований. Целью данного исследования было изучение безвредности Монклавита-1 и его применения для повышения естественной резистентности организма новорожденных телят.

Достижение поставленной цели включало в себя решение следующих задач:

1. Выяснить безвредность различных серий Монклавита (1,2,3,4) на лабораторных белых мышах.

2. Изучить влияние Монклавита-1 на состояние организма лабораторных крыс при его введении per os.

3. Определить раздражающее действие Монклавита-1 на кожу кролика.

4. Провести ветеринарно-гигиеническую оценку Монклавита-1 при длительном скармливании его лабораторным крысам.

5. Изучить влияние Монклавита-1 при скармливании его новорожденным телятам на их организм.

6. Выяснить влияние Монклавита-1 при скармливании его сборному откормочному поголовью телят.

Научная новизна работы. Впервые комплексными исследованиями установлена безвредность препарата Монклавит-1 и изучены острая и хроническая токсичность при его алиментарном применении, а так же кожно-резорбтивное действие на лабораторных животных - мыши, крысы, кролики. Определено влияние этого препарата на клинико-гематологический и иммунобиологический статус этих животных. Изучены закономерности накопления ЙСБ в организме крыс и цыплят (кровь, печень, селезёнка, почки, мышцы конечностей и грудные, щитовидная железа) при алиментарном введении Монклавита-1.

Впервые проведен скрининг и дана оценка профилактической эффективности алиментарного применения Монклавита-1 при выращивании новорожденных телят (возраст 1-14 суток) и при комплектовании сборного поголовья телят в возрасте 14-28 суток. Проведена ветеринарно-гигиеническая оценка влияния алиментарного применения Монклавита-1 на клинико-биохимические, иммунобиологические показатели крови телят, а так же на содержание йодсодержащих веществ в ней, в т.ч. на тетрайод-тиронина и трийодтиранина.

Практическая значимость работы. Результаты исследований использованы для составления нормативно-технических документов: «Инструкции по применению Монклавита-1 для лечения животных, обработки инкубационных яиц, инкубационных и выводных шкафов, санации воздушной среды животноводческих помещений», утвержденных 21.04.2008 г. Россельхознадзором, а так же вошли в «Методические рекомендации по применению препарата Монклавит-1 в ветеринарии», одобрены и рекомендованы к изданию Методическим советом ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» протокол №5 от 06.05.2009 г.

Для профилактики желудочно-кишечных расстройств, рекомендуемая доза при алиментарном использовании Монклавита-1 телятам в возрасте 1-14 суток ежедневно с молозивом или молоком составляет 1-1,5 мл/кг живой массы; а для сборного откормочного поголовья телят в возрасте 14-28 суток в дозе 1-2 мл/кг живой массы, но с ЗЦМ за 1-3 приема в сутки в первые 3-5 дней комплектования. Показана экономическая эффективность применения Монклавита-1 при диспепсии у телят.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Экспериментальная оценка безвредности внутреннего и наружного применения Монклавита-1 на лабораторных животных - белых мышах, крысах и кроликах.

- Алиментарное применение Монклавита-1 новорожденным телятам способствует повышению естественной резистентности организма и профилактирует заболевания желудочно-кишечного тракта.

Апробация работы.

Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены:

- на международных научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПб ГАВМ (Санкт-Петербург, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011);

- на научных конференциях молодых ученых и студентов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2009, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано десять научных работ, в том числе, три статьи в изданиях рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринария», «Ветеринарная практика», «Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии».

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 197 страницах компьютерного текста и состоят из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, приложения. Работа содержит 35 таблиц и 16 рисунков, список использованной литературы включает 212 библиографических источников, в том числе 49 зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на основании плана научно-исследовательской работы кафедры ветеринарной гигиены и санитарии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургский Государственной академии ветеринарной медицины» №16 за период 2003-2010 гг.

Препарат Монклавит-1 представляет собой лекарственное средство для лечения животных и для обработки инкубационных яиц, инкубационных и выводных шкафов, санации воздушной среды животноводческих помещений, содержит йод в форме полимерного комплекса поли-N-виниламидоцикло сульфойодида. Имеет свидетельство государственной регистрации ПВР-2-4.6/02766 от 21.04.2008, утверждена инструкция по его применению Россельхознадзором. Это отечественный препарат, выпускается, в соответствии с ТУ №9337-007-46270704-08, ООО «Оргполимерсинтез СПб» в Санкт-Петербурге.

В помещениях, где содержали животных, определяли показатели микроклимата: температуру, относительную влажность, скорость движения воздуха, наличие вреднодействующих газов (аммиак, сероводород, диоксид углерода) по общепринятым зоогигиеническим методикам.

В наших исследованиях были использованы общепринятые в ветеринарии методы оценки безвредности Монклавита: острая и хроническая алиментарная токсичность, с учетом следующих показателей: клиническое состояние животных, копрологический анализ; кожно-резорбтивное действие с учетом ранозаживляющего эффекта; патоморфология и гистология внутренних органов убитых животных; анализ крови ( морфологический, биохимический, иммунобиологический).

Для определения состояния естественной резистентности организма животных были использованы методики клинических, морфологических, биохимических и иммунобиологических исследований крови и сыворотки крови. Клиническое состояние животных, копрологические исследования проводили по общепринятым методикам.

Иммунологические исследования сыворотки крови осуществляли с использованием традиционных методик: постановка реакции торможения лейкоцитов (РТМЛ); определение уровня циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови (ЦИК); лизосомально-катионный тест (ЛКТ) и тест восстановления нитросинего тетразоля (НСТ);а так же в лимфоцитах определяли активность дегидрогеназ (ферментов лимфоцитов):сукцинат дегидрогеназы (СДГ), лактат дегидрогеназы (ЛДГ), глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (Г-6-фДГ), альфа-глицерофосфат дегидрогеназы (альфа-Г- фДГ), малат дегидрогеназы (МДГ), НАД- и НАДФ-оксидазы.

Анализ активности пищеварительных ферментов в хронических опытах на крысах проводили по следующим показателям: активность сахаразы (сах.), мальтазы (мальт.), щелочной фосфатазы (щф), аланин-амино-пептидазы (ААП), глицил-глицин-дипептидаза (ГГД), белок. Активность ферментов определяли общепринятыми методами в гомогенатах слизистой оболочки желудка, двенадцатиперстной, тощей, подвздошной и толстой кишки, а также в гомогенатах печени и почек Данные обрабатывали статистически с использованием критерия Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты изучения безвредности Монклавита на лабораторных животных в острых опытах

Для первой серии опытов были изготовлены 4 вида Монклавита: Монклавит-1 (М-1) с содержанием йода -0,1%; Монклавит-2 (М-2) с содержанием йода-0,5%; Монклавит-3 (М-3) с содержанием йода-1,0% и Монклавит 4 (М-4) с содержанием йода 2,0%.

В опытах использовали белых мышей: 4 опытных и одна контрольная группы (живая масса одной мыши 24,75±3,42 г), по 12 особей в группе.

Мышам первой опытной группе вводили в желудок М-1, второй - М-2, третьей - М-3, четвертой - М-4 и контрольной - питьевую воду - по 0,5 мл на каждое животное один раз в сутки, 3 дня подряд. Эти дозы в пересчете на кг живой массы мышей составляли - 20,20 мл/кг живой массы. После последнего введения - в течение 5 дней вели клинические наблюдения за животными. Все животные в течение этого срока были живы, изменений в клиническом состоянии и поведении, в приеме корма и воды - не отмечалось. По истечению сроков наблюдения все мыши были убиты и проведены патологоанатомические вскрытия.

Результаты патологоанатомического вскрытия тушек убитых мышей, показали, что состояние внутренних органов были одинаковыми в контрольной, 1-ой и 2-ой опытных групп. Однако, у некоторых мышей 3-й и особенно 4-ой опытных групп отмечали дистрофические изменения в печени и повышенное содержание желчи.

Исследования крови показали, что количество эритроцитов у мышей, которым вводили М-1 незначительно повысилось (Р>0,05), во второй опытной группе, наоборот, понизилось (Р>0,05), а в третьей и четвертой группах - понизилось достоверно (Р[8]

Количество лейкоцитов в крови у мышей контрольной группы составляло 9,5±0,7 10 9/л, тогда как в 1-ой опытной группе было ниже на 3,1%, во второй - на 4,2%, в третьей - на 7,4%, а в четвертой - на 10,5% по сравнению с контролем.

Наличие йода в крови у мышей, которым вводили М-1 и М-2 было больше на 20%, а в группах, где использовали М-3 и М-4, было больше, соответственно - на 100% и 80%, по сравнению с контрольной группой.

Проведенные исследования показали, что при введении в желудок белым мышам по 0,5 мл Монклавита с различным содержанием йода- 3 дня подряд, 1 раз в сутки, М-3 и М-4 оказывал заметное патоморфологическое действие на печень, которое выражалось в дистрофических изменениях; М-2 с содержанием йода 0,5% - не вызывал подобных признаков, как это было зафиксировано в 3-ей и 4-ой группах. Однако, в группе мышей, которым вводили М-2, было ниже: количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина в крови - по сравнению с контрольной группой и первой опытной группой, которой вводили М-1. Хотя эти изменения и недостоверны по сравнению с контрольной группой и первой опытной группой мышей, за основу безопасного (безвредного) препарата был взят М-1, который использовали для первой опытной группы белых мышей.

Следовательно, расчетная безопасная доза М-1 для белых мышей составляла -0,5 мл на мышку с живой массой - 24,75 г, или это состовляет 20,20 мл на 1 кг живой массы белых мышей (в сутки), а за 3-ое суток - 60,60 мл на 1 кг живой массы подопытных белых мышей.

Для проведения второй серии опытов использовали лабораторных крыс, массой 110±20 г, возраст 2 месяца, из которых были сформированы три опытных и контрольная группы (по 5 крыс в каждой группе). Препарат М-1 вводили опытным группам per os через зонд в дозах: 0,5 мл - первой группе, 1 мл - второй группе, 1,5 мл - третьей группе на одно животное 1 раз в сутки, 5 дней подряд. Для сравнения - контрольной группе вводили аналогичное количество дистиллированной воды.[1]

После последнего введения в течение одной недели вели клинические наблюдения за ними. Все животные были живы, изменений во внешнем виде, клиническом состоянии, и в поведении - не отмечали. По истечении срока опыта и наблюдения животные были убиты. Проведённая массометрия внутренних органов и патологоанатомическое вскрытие тушек крыс показали, что у опытных животных они были такими же, что и у контрольных.

Следовательно, безопасным суточное введение М-1 по группам в пересчете на 1 кг их живой массы было следующее: в первой группе - 4,54 мл/кг живой массы, во второй группе - 9,09 мл/кг живой массы, в третьей группе - 13,64 мл/кг живой массы. А за 5 суток введения М-1 – безопасное количество введенного препарата, соответственно по группам крыс, составило: в первой - 22,7 мл, во-второй -45,45 мл и в третьей - 68,2 мл.

Для проведения третьей серии опытов были использованы взрослые лабораторные крысы с живой массой 183±21 г., в возрасте 3,5 мес. Из них сформированы две опытные и одна контрольная группы по 5 крыс в каждой группе. Первой опытной группе через зонд вводили в желудок 2 мл М-1 на одно животное, один раз в сутки, 5 дней подряд; второй опытной группе - вводили тем же способом М-1 в дозе 1,5 мл на животное, два раза в сутки, 5 дней; контрольной группе крыс вводили аналогичное количество питьевой воды.

Во время проведения опыта визуальных различий в состоянии животных, поведении, приеме корма и воды между опытными и контрольными группами не замечено. Результаты патолого-анатомического вскрытия и результаты массометрии внутренних органов у убитых крыс показали, что по этим показателям не выявлено различий между опытными и контрольной группами. Таким образом, безопасными дозами были: по первой группе - 10,93 мл М-1 на 1 кг живой массы - в сутки, а за 5 суток - 54,65 мл/кг живой массы; а по второй группе - 16,39 мл/кг или за 5 суток - 81,95 мл/кг. [2]

Заключение. Проведённые исследования на белых мышах по выявлению безвредности Монклавита с различным содержанием йода, показали, что М-1 является безопасным при введении его per os белым мышам в дозе 0,5 мл на животное с живой массой 24,75 г. Это составляет 20,20 мл М-1 на 1 кг живой массы белых мышей.

Исследования на крысах показали, что пероральные дозы: 0,5-1,0-1,5 мл М-1 1 раз в сутки, 5 дней подряд безопасны для молодых крыс с живой массой 110±20 г,что составляет соответственно по группам 22,7 мл; 45,45 мл и 68,2 мл М-1 на 1 кг их живой массы.

Исследования на взрослых крысах с живой массой 183±21 г, при однократном введении М-1 по 2 мл ежедневно, в течение 5 суток не выявили патологических изменений, как по показателям клинического состояния, так и по патологоанатомическим исследованиям. Эти безопасные дозы, соответственно по группам, в расчете на 1 кг живой массы крыс составляли: по первой группе - 10,93 мл/кг живой массы и по второй - 16,3 мл/кг живой массы за 1 сутки, а за 5 суток, соответственно 54,65 мл/кг живой массы и 81,95 мл/кг живой массы.

3.2 Изучение кожно-резорбтивного действия Монклавита-1 на кроликах

Кожно-резорбтивное действие или оценку местно-раздражающего действия М-1 проводили на кроликах методом аппликации препарата на здоровую или травмированную кожу кролика.

При определении местного раздражающего действия препарата М-1 у серых кроликов с непигментированной кожей с обеих сторон выстригали волосяной покров в 2-х местах размером 66 см. Препарат М-1 наносили в виде аппликации с одной стороны 2 раза в день в течение 15 суток. Другая сторона (2 участка) были контрольными, препарат М-1 не наносили. Затем ежедневно учитывали степень воспаления – изменения цвета кожи и толщину кожной складки кутиметром, в мм.

Исследования показали, что покраснений или других показателей указывающих на раздражение, воспаление - не было.