Диагностика и клинико-морфологическая характеристика вторичного гиперпаратиреоза у собак

На правах рукописи

Марюшина Татьяна Олеговна

ДИАГНОСТИКА И КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ

ХАРАКТЕРИСТИКА ВТОРИЧНОГО

ГИПЕРПАРАТИРЕОЗА У СОБАК

Специальность 06.02.01 - Диагностика болезней и терапия

животных, патология, онкология и

морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

МОСКВА 2012

Работа выполнена на кафедре «Незаразные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»,

Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель:	Луцай Владимир Иванович, кандидат ветеринарных наук, доцент (ФГБОУ ВПО «МГУПП»)
Официальные	Ватников Юрий Анатольевич,
оппоненты:	доктор ветеринарных наук, профессор
	(ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»),
	заведующий кафедрой анатомии,
	физиологии и хирургии животных
	Арсланян Григорий Геворгович,
	кандидат ветеринарных наук, доцент
	ФГБОУ ВПО «Московская государственная
	академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»),
	доцент кафедры биологии, патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Ведущая организация:	«Всероссийский ветеринарный научно-исследовательский институт патологии, фармакологии и терапии» ГСЦ Россельхозакадемии (г. Воронеж)

Защита диссертации состоится «_____» ________ 2012 в _____ часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д. 33, в конференц-зале.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «МГУПП»

Автореферат разослан « ______ « ______________ 2012 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ

http://vak.ed.ru/ «_____» _________ 2012

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент Нитяга И.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ветеринарная эндокринология – одна из молодых и наименее изученных областей ветеринарии. При этом актуальность проблем, связанных с патологией желез внутренней секреции, возрастает с каждым годом. Ветеринарные врачи в последнее время все чаще встречаются с такими заболеваниями у собак, как сахарный и несахарный диабет, гипо- и гипертиреоз, синдром Кушинга и адиссоновая болезнь. Неотъемлемым звеном эндокринной системы являются паращитовидные железы, которые продуцируют паратиреотропный гормон (паратгормон), участвующий совместно с витамином Д и кальцитонином в регуляции обмена кальция в организме. О физиологическом значении паращитовидных желез известно достаточно (Ежкова А.М., 1999;. Суслов В.П., 2000; Торранс Э., 2006; Фелдмен Э., 2008 и др.). Снижение уровня кальция в крови является основным стимулом к выбросу гормона в кровоток. Органами-мишенями для паратиреотропного гормона являются скелет и почки, он также оказывает влияние на кишечник, усиливая всасывание кальция. Известно и негативное влияние паратгормона на организм при его гиперсекреции, не зря его относят к универсальному уремическому токсину (Кузина Н.Ю., 2008; Волгина Г.В., 2009; Ильина А.Н., 2009 и др.).

Однако исследованиям патологии паращитовидных желез у собак в России до последних лет уделялось недостаточно внимания. Косвенно состояние и работу паращитовидных желез оценивали по концентрации кальция, связанного с белками, фосфора и щелочной фосфатазы в сыворотке крови (А.М. Ежова,1999; Н.В. Грищенко,2000; Ф. Каллфельц,2004; Л. Мартан, 2004).

Лишь в последние годы стали появляться работы отечественных ветеринарных специалистов, посвященные данной проблеме. Это обусловлено совершенствованием ветеринарных технологий, внедрением в ветеринарные лаборатории более точных диагностических методов, которые позволяют всесторонне изучать такие труднодоступные органы, которыми и являются паращитовидные железы, а также широким распространением скриннинговых биохимических исследований крови. Такие исследования динамично изменили процентные соотношения выявления различных форм гиперпаратиреоза.

К глубокому изучению проблем вторичного гиперпаратиреоза (ВГПТ) у собак нас побудило не только малое количество научных работ, посвященных данной патологии, но и множество противоречий в этих работах.

В доступной нам отечественной научной литературе мы не нашли статистических данных по выявлению вторичного гиперпаратиреоза у собак с хронической почечной недостаточностью и синдромом мальабсорбции, совокупных результатов биохимических и гормональных исследований, а также описания морфологических изменений в паращитовидных железах и костной ткани, при том что ссылки на эту патологию встречаются практически в каждой работе по метаболическим болезням костей у собак и кошек.

Цель работы. Выявление и изучение особенностей течения вторичного гиперпаратиреоза у собак с хронической почечной недостаточностью и мальабсорбцией, морфологических изменений в паращитовидных железах и костной ткани, оптимизация методов коррекции данного заболевания.

Задачи исследования.

1. Изучить распространенность вторичного гиперпаратиреоза среди собак разных пород, возрастных групп и выявить особенности клинического течения различных форм вторичного гиперпаратиреоза.

2. Исследовать морфологические изменения паращитовидных желез и костной ткани у собак с вторичным гиперпаратиреозом, провести лабораторный биохимический и гормональный скрининг у собак, страдающих хронической почечной недостаточностью, собак с синдромом мальабсорбции, с нарушениями кальций-фосфорного равновесия и здоровых.

3. Определить эффективность применения препаратов кальция и витамина Д при лечении собак с вторичным гиперпаратиреозом с учетом индивидуальных особенностей и тяжести патологического процесса.

Научная новизна. Впервые получена объективная картина заболеваемости и изучены особенности клинического течения кишечной и почечной форм вторичного гиперпаратиреоза у собак. Проведена дифференциальная диагностика от других заболеваний, сопровождающихся нарушением минерального обмена. Проведены и систематизированы исследования крови по показателям: ПТГ, костной щелочной фосфатазы, ионизированного кальция, витамина Д у собак с разными формами вторичного гиперпаратиреоза. Установлена зависимость между повышением уровня паратгормона в крови и морфологическими изменениями в паращитовидных железах у собак.

Практическая значимость. Полученные данные по исследованию ВГПТ у собак позволяют дифференцировать и выявлять заболевания паращитовидных желез на ранних стадиях, комплексно подходить к проблемам лечения и профилактики. Представленные в работе лабораторные данные, рентгеновские снимки и гистологические препараты являются наглядным пособием для студентов ветеринарных вузов, изучающих эндокринологию.

Апробация работы и внедрение результатов исследования. Основные результаты исследований по диссертационной работе доложены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых ученых высших научных заведений МСХ РФ по секции «Ветеринария» (Москва, 2007), 1й Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (Москва, 2010) (доклад); Международной научной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии» (Ульяновск, 2011) (доклад), результаты работы внедрены в учебный процесс ФГБОУ ВПО МГУПП, ФГБОУ ВПО ХГУ им. Катанова.

Публикации. По теме диссертационной работы было опубликовано 6 научных работ, 2 из которых – в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Данные мониторинга ВГПТ у собак с ХПН и мальабсорбции.

2. Результаты исследований биохимических показателей у собак с ВГПТ.

3. Результаты исследований гормональных показателей у собак со ВГПТ.

4. Морфологические изменения паращитовидных желез и костной ткани у собак с вторичным парагипертиреозом.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора научной литературы, собственных исследований, включающих разделы: материалы и методы, результаты собственных исследований, их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 152 источника, из них 112 отечественных и 40 зарубежных авторов. Работа содержит 24 таблицы и иллюстрирована 33 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования. Настоящая работа проводилась в период 2008- 2011 г.г. на кафедре «Незаразные болезни» и ветеринарной клинике «На Талалихина» при ФГБОУ ВПО МГУПП, в ветеринарной лаборатории «Шанс», лаборатории «Инвитро», в паталогоанатомическом отделении городской клинической больницы № 33. Объектом исследования стали 208 собак (исследуемая группа) разных возрастных групп, пород и разного пола, из них 138 - животные в возрасте 5-11 лет с хроническими болезнями почек, 70 – щенки в возрасте 3-7 месяцев с синдромом мальабсорбции. Контрольная группа составила 35 здоровых собак разных пород и пола, из них 20 собак возрастной группы 5-11 лет и 15 - щенки возраста 3-7 месяцев. Все животные были доставлены в клинику для амбулаторного приема и наблюдались в течение всего периода исследований. Основными критериями включения животных в опытную группу было наличие в анамнезе хронической почечной недостаточности (для взрослых собак) и синдрома амальабсорбции в сочетании с нарушениями работы опорно-двигательного аппарата (для щенков). Общее количество обследованных животных составило 243.

Окончательный диагноз - хроническая почечная недостаточность устанавливался в соответствии с классификацией, предложенной Международным обществом, занимающимся изучением заболеваний почек (International Renal Interest Society), основанной на величине показателя креатинина в плазме крови.

В процессе выполнения работы использовали следующие методы.

Клиническое обследование животных проводили по общепринятой методике. Особое внимание уделялось обследованию опорно-двигательного аппарата.

Биохимическими исследованиями сыворотки крови определяли уровень креатинина, мочевины, общего и ионизированного кальция, неорганического фосфора, щелочной фосфатазы по стандартным методикам на автоматическом биохимическом анализаторе «Марс». Забор крови для исследования ионизированного кальция осуществляли в вакуумную систему с гелевым наполнителем в анаэробных условиях.

У 138 собак с почечной недостаточностью определяли: креатинин кинетическим методом по Яффе (набор фирмы DiaSys); мочевину - «уреазным – глутаматдегидрогеназным»: ферментативным УФ-тестом (набор фирмы «DiaSys»); общий кальций - унифицированным колориметрическим методом при длине волны 570 нм (набор фирмы «Vital Diagnostics»); неорганический фосфор определяли спекторофотометрическим (UV) методом (набор фирмы «Ольвекс Диагностикум»). Метод основан на способности фосфат-ионов образовывать в кислой среде с молибдатом аммония в присутствии детергента фосфорномолибденовый комплекс, оптическая плотность которого при длине волны 340 нм пропорциональна концентрации неорганического фосфора в исследуемом образце.

Щелочную фосфатазу определяли оптимизированным кинетическим методом (набор фирмы «Vital Diagnostics»). Принцип метода:

п-Нитрофенилфосфат + вода щелочная фосфатаза п-нитрофенол +

+ фосфат.

Количество образовавшегося в единицу времени п-нитрофенола, пропорциональное активности фермента, определяется по изменению оптической плотности образца в единицу времени при длине волны 405 нм.

Ионизированный кальций определяли методом ионселективных электродов на автоматическом ионселективном анализаторе ЭЛИТ-041. Метод основан на измерении межэлектродного потенциала, образующегося при контакте с исследуемым раствором кальций- селективного электрода и электрода сравнения.

Костный изофермент щелочной фосфатазы (остазу) определяли методом радиоиммунного анализа (РИА) на счетчике «Wizard 1470» с меткой йод 125.

Витамин Д определяли методом ВЭЖХ-МС, ААС (высокоэффективная жидкостная хроматография) на системе ВЭЖХ/МС/МС АРI 2000 (AB SCIEX).

О состоянии костного метаболизма судили по активности костного изофермента щелочной фосфатазы. О наличии в организме кальция судили по концентрации общего и ионизированного кальция в крови.

С целью выявления вторичного гиперпаратиреоза проводили гормональное исследование. Для этого у собак производили забор венозной крови с предварительной 12-часовой голодной выдержкой. Исследование паратиреотропного гормона проводили методом твердофазного хемилюминисцентного иммуноанализа с помощью реактивов и системы Immulite.

У 70 щенков проводили макроскопическое и микроскопическое исследование фекалий. Наличие крахмала определяли с помощью раствора Люголя, мыла - по образованию кристаллов после смешивания с уксусной кислотой и с последующим нагреванием. Дополнительно выявляли присутствие простейших (лямблий, изоспор, саркоцист), а также проводили биохимические исследования фекалий, рН определяли с помощью экспресс-теста фирмы НЕРТА РНАN. Микроскопию мазков фекалий проводили на фазово-контрастном световом микроскопе фирмы Zeiiss. Увеличение х120, х400, х900.

Оценка внешнесекреторной функции поджелудочной железы (протеолитическая активность) проводили при помощи желатинового теста.

С целью выявления тяжести течения ВГПТ проводили морфологические исследования. Для этого от 13 павших животных были отобраны фрагменты паращитовидных желез и костной ткани. Гистопрепараты паращитовидных желез приготовлены путем заливки в парафиновые блоки и окрашиванием гематоксилин эозином. Костная ткань из проксимального отдела лучевой и локтевой костей была первично декальцинирована, залита в парафиновые блоки и окрашена гематоксилинэозином. Парафиновые срезы приготовлены на микротоме «Микром», толщина среза 5-10 микрон. Исследования проводились методом световой микроскопии на микроскопе «Никон Эклипс» Е-200 с цифровой видеокамерой.

Исследования мочи проводили у группы собак с почечной недостаточностью. Исследования проводили на основные физические и химические показатели по общепринятым методикам.

Рентгенологическое исследование проводилось в группе щенков с мальабсорбцией и у собак с выраженной костной патологией в группе с хроническими болезнями почек.

Ультразвуковую диагностику проводила в группе собак с хроническими болезнями почек для подтверждения диагноза на ультразвуковом диагностическом приборе - эхотомоскопе «РАСКАН» ЭТС-Д-05.

За полный период исследований нами не было подвергнуто эвтаназии с экспериментальной целью ни одно животное. Патологический материал для гистологических исследований отбирали у животных, умерших естественным путем или после эвтаназии по просьбе владельцев.

Результаты собственных исследований

Проведение биохимического скриннинга у собак с хроническими болезнями почек. Нами было обследовано 138 собак (опытная группа) разных пород в возрасте от 5 до 11 лет с нарушениями почечной функции. Критерий включения в опытную группу – установленный диагноз хроническая почечная недостаточность. Основными симптомами для отбора животных служили клинические проявления; полиурия, полидипсия, снижение аппетита, прогрессирующая кахексия. В сыворотке крови этих животных отмечались повышение содержания уровней мочевины, креатинина, щелочной фосфатазы, неорганического фосфора; концентрация общего кальция находилась на нижней границе нормы или была снижена.

У этих собак дополнительно определяли уровень паратиреотропного гормона, кальция, фосфатов, ионизированного кальция, костной фракции щелочной фосфатазы и витамина Д в сыворотке крови. Контрольная группа включала 20 клинически здоровых животных такой же возрастной категории с показателями крови, находящимися в пределах референтных значений, характерных для данного вида.

Для определения динамики развития вторичного гиперпаратиреоза с прогрессированием почечной недостаточности, обследуемых собак мы разделили на 4 группы, соответствующие стадиям заболевания (почечной недостаточности) в зависимости от уровня креатинина в сыворотке крови. К первой группе относятся собаки с уровнем креатинина 149-192, ко второй группе – 193-250, к третьей – 250-340, к четвертой – более 341мкмоль/л.

У собак с разными стадиями ХПН не наблюдалось одинаковой клинической картины уремических проявлений, зависящих от стадии заболевания. Тем не менее, тенденция к ухудшению общего состояния на более поздних стадиях почечной недостаточности была очевидна. Кроме того мы наблюдали нарушения со стороны опорно-двигательного аппарата.

Клинические проявления, связанные с патологическими процессами в опорно-двигательном аппарате собак с хроническими болезнями почек, вызваны развитием вторичного почечного гиперпаратиреоза. Примером таких проявлений служит фиброзно-кистозный остеит в костях, не несущих нагрузки. У собак встречается достаточно редко, тем не менее в наших исследованиях описаны два случая остеодистрофии костей черепа у собак.

Для оценки нарушения кальций-фосфорного обмена и метаболических изменений в костной ткани определяли следующие лабораторные показатели: уровни кальция, фосфора, общей щелочной фосфатазы и ее костного изофермента в сыворотке крови.