Морфофункциональные изменения при патологии печени у норок и их коррекция с помощью энтеросорбента

На правах рукописи

ХАРЛАМОВ ВЛАДИМИР КОНСТАНТИНОВИЧ

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ

ПРИ ПАТОЛОГИИ ПЕЧЕНИ У НОРОК И ИХ КОРРЕКЦИЯ С ПОМОЩЬЮ

ЭНТЕРОСОРБЕНТА

06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных, патология,

онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Москва, 2012 г.

Работа выполнена на кафедре «Незаразные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств».

Научный руководитель: Уша Борис Вениаминович,

академик РАСХН,

доктор ветеринарных наук, профессор,

(ФГБОУ ВПО «Московский государственный

университет пищевых производств»)

Официальные

оппоненты: Брагин Геннадий Иванович,

доктор ветеринарных наук, профессор

(ФГБОУ ВПО «Московский государственный

университет пищевых производств»)

Геллер Вера Иосифовна,

кандидат ветеринарных наук,

ведущий научный сотрудник

(ГНУ «Научно-исследовательский институт

пушного звероводства и кролиководства

им. В.А. Афанасьева» Россельхозакадемии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Российский университет

дружбы народов»

Защита диссертации состоится «_21__»_декабря____2012 г. в __12____часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д. 33, в конференц-зале.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств».

Автореферат разослан «___»____________2012 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ http://vak.ed.ru/ «___»____________2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор ветеринарных наук, профессор Андрианова Т.Г.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Большое внимание в Российской Федерации уделяется развитию пушного звероводства, в том числе и разведению норок. Численность норки в Российской Федерации составляет приблизительно 90 % от общей численности пушных зверей. Норки относятся к плотоядным животным (хищникам), в рационе которых преобладают мясные и рыбные корма.

Незаразные болезни являются наиболее острой проблемой пушного звероводства. К числу этих болезней относятся болезни печени, в том числе гепатоз, который, являясь полиэтиологичным заболеванием, наиболее часто регистрируется у норок и является одной из самых распространенных патологий в звероводстве всех стран. В России до 90 % падежа зверей происходит от болезни печени (Квартникова Е.Г., 2001; Шкуратова И.А. и др., 2005).

В настоящее время проблема гепатоза у норок является весьма актуальной, так как в последние годы это заболевание получило широкое распространение в звероводческих хозяйствах нашей страны и за рубежом. По данным многих авторов, заболевания печени и желудочно-кишечного тракта у норок в хозяйствах регистрируют в среднем в 38,4-47,3 % и 15,9-29,1 % случаев соответственно. Высокая заболеваемость норок негативно отражается на продуктивности, качестве меха (73,5% выбракованных шкурок), жизнеспособности потомства, что выражается в большом отходе щенков – 21,8-31,1 % и взрослых самок 15,9-4-7,3 % от общего убоя. Поэтому изыскание новых путей нормализации обмена веществ пушных зверей, особенно в условиях недостаточности и несбалансированности кормовой базы, является актуальным (Ежков В.О., 2000; Илюха В.А., 2001; Берестов В.А., 2002; Дашукаева К.Т., Зибров, 2003; Слугин В.С., 2004).

С целью нормализации обмена веществ у пушных зверей применяются различные препараты, однако проблема еще полностью не решена. В медицине широко и успешно применяется метод детоксикации организма с помощью энтеросорбентов, который дает положительный эффект при токсикоинфекциях и кишечных инфекциях, хронических образованиях, аллергических заболеваниях, печеночной и почечной недостаточности. В настоящее время положительные результаты применения энтеросорбентов для лечения животных получены также и в ветеринарной практике (Бгатов В.И., 1997; Лудынов Ц., Старовойтова Т., 1997; Бабкина Т.Н., Таран Г.Г., 2002; Гайдулина М.К.; 2004, Равилов А.З., 2010 и др.).

В ветеринарии энтеросоробенты широко применяют при заболеваниях органов пищеварения молодняка (Даминов В.В., 2002). Однако их применение и влияние на морфофункциональные показатели организма норок при гепатозе норок изучены недостаточно, что и определило цель нашей работы.

Цель и задачи исследования. Цель исследования – изыскание эффективного средства коррекции морфофункциональных показателей обмена веществ у норок при гепатозе. Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- изучить распространение жирового гепатоза у норок в зависимости от возраста животных;

- изучить характер морфофункциональных изменений в крови больных гепатозом норок в зависимости от возраста;

- изучить характер морфофункциональных изменений к крови норок после применения энтеросорбентов;

- изучить возможность применения энтеросорбентов для коррекции гепатоза норок.

Научная новизна. Предложен новый метод профилактики гепатоза норок на основе применения энтеросорбентов. В условиях зверохозяйства «Мелковский» испытан препарат Полифепан для нормализации обмена веществ и профилактики гепатоза молодняка норок. Впервые на основании комплексных исследований крови определена оптимальная доза применения энтеросорбента Полифепан для норок. Экспериментально доказана способность препарата Полифепан регулировать метоболизм и нормализовать морфологические показатели крови как у клинически здоровых, так и у больных гепатозом норок.

Практическая значимость работы. Доказана эффективность применения энтеросорбента Полифепана с терапевтической и профилактической целью у клинически здоровых и больных гепатозом норок.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Степень распространения гепатоза норок во взаимосвязи с типом кормления на примере ОАО «Зверохозяйство Мелковское» Тверской области.

2. Морфо-биохимический статус клинически здоровых и больных гепатозом норок различного возраста.

3. Влияние энтеросорбента Полифепана на морфологические, биохимические показатели крови и морфологические показатели печени при гепатозе норок.

4. Определение оптимальной дозы энтеросорбента Полифепана для норок.

5. Влияние применения энтеросорбента Полифепана на сохранность молодняка норок.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены: на Ученых советах Института ветеринарной экспертизы, санитарии и экологии ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств»; Международной научно-практической конференции «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства» (Минск, 2011); Всероссийской научно-практической конференции ГНУ СКЗНИВИ РАСХН «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства» (Новочеркасск, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 129 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, предложения для производства, список использованной литературы. Список литературы включает 168 источника, в том числе 43 иностранных, работа иллюстрирована 34 таблицами и 37 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре «Незаразные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств».

Экспериментальная часть выполнена в 2010-2012 гг. в ОАО «Зверохозяйство Мелковское» и в лабораториях ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии на норках «стандартного» коричневого окраса как клинически здоровых, так и с признаками гепатоза.

Распространенность гепатоза в зверохозяйстве в сравнении с другими незаразными болезнями норок изучали по ветеринарной документации зверохозяйства «Мелковское» за 2009-2011 гг. и результатам собственных исследований.

Исследования проводили на самках норок в возрасте 1,5-2 года, массой 1,8-2,2 кг и щенков норок в возрасте 8-10 месяцев, массой 0,800- 1,00 кг. Все звери находились в одинаковых условиях содержания и кормления, подвергались одинаковым ветеринарным обработкам, принятым в хозяйстве. Инфекционные и инвазионные болезни были исключены.

В первой серии опытов проводили клиническое обследование норок по общепринятым методикам (Берестов В.А., 2003). Изучали гематологические, биохимические и ферментативные показатели крови здоровых и больных гепатозом щенков и взрослых норок. Больных норок отбирали в опытные группы по клиническим признакам и формировали по принципам аналогов (возрасту, массе). Было задействовано 2 группы больных гепатозом и 2 группы здоровых норок разного возраста по 40 голов в каждой. Пробы крови брали утром до кормления животных. В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, скорость оседания эритроцитов по общепринятым методикам. Определение биохимических и ферментативных показателей проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BioChem SA (USA).

Морфологию печени больных гепатозом норок изучали после убоя. Проводили патологоанатомический осмотр органов и тканей. Печень отбирали сразу после убоя, пробы фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина и заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы готовили на санном микроскопе МС-2 толщиной 5-=10 мкм. Окраску проводили по общепринятой методике гематоксилином-эозином. Из полученных образцов тканей печени дополнительно готовили срезы и окрашивали их Суданом черным III «B» для выявления липидов.

Во второй серии опытов изучали влияние энтеросорбента Полипефан на морфофункциональные показатели крови и печени норок. Содержание и кормление норок соответствовало зоотехническим нормам и возрастным особенностям.

Применяли следующую схему введения препарата. Энтеросорбент вводили животным с кормом, двукратно в течение 10 дней с интервалом 7 дней. Были сформированы 2 опытные группы щенков и взрослых норок, больных гепатозом, по 10 голов в каждой. Препарат задавали в дозах 2,0; 3,0 и 4,0 г/кг живой массы для щенков и 4,0; 6,0 и 8,0 г/кг живой массы для взрослых норок. По результатам исследований отбирали оптимальную дозу для дальнейших исследований.

Кровь для исследований брали дважды: до и после применения препарата. Взятие материала проводили с соблюдением правил асептики и антисептики по общепринятой методике (БерестовВ.А., 1981). В цельной крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина и скорость оседания эритроцитов (СОЭ). В сыворотке крови определяли содержание общего белка, глюкозы, билирубина, холестерина и мочевины, активность аминотрансфераз (АсАТ, АлАТ), щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы. Контролем служили интактные животные, не получавшие препарат.

Морфофункциональные изменения в печени после применения препарата оценивали по гистологическим изменениям органа.

В третьей серии опытов изучали возможность использования энтеросорбента для профилактики гепатоза пушного молодняка норок. Были сформированы 2 опытные группы (самцы и самки) по 50 голов в каждой. Препарат задавали в дозе 3,0 мг/кг живой массы двукратно в течение 10 дней с интервалом 7 дней. Оценивали прирост живой массы. Во время планового убоя норок изучали патологоморфологические изменения печени.

В четвертой серии опытов изучали влияние энтеросорбента Полисорб ВП на организм норок, больных гепатозом, по вышеприведенной схеме. Полисорб задавали в дозе 0,15 г/кг живой массы курсом по 10 дней, двукратно, с интервалом 7 дней.

Статистическая обработка результатов исследования проведена общепринятыми методами. Результаты исследований обрабатывали на IBM PC с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel и Winstat 577, коэффициента достоверности Р с учетом критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Краткая характеристика ОАО «Зверохозяйство Мелковское»

ОАО «Зверохозяйство Мелковское» Тверской области Конаковского района – предприятие полного технологического цикла. Здесь выращивают норку и песца, осуществляют первичную обработку пушнины, а затем выделывают мех на фабриках. «Мелковское» является одним из ведущих звероводческих хозяйств Тверской области и имеет статус племенного хозяйства. Среднегодовой объем производства – более 65 тыс. шкур норки пород СТК, пастель, сапфир, белая хедлунд, скан-блэк и около 2,5 тысяч шкур песца вуалевого и серебристого.

Хозяйство благополучно по инфекционным и паразитарным болезням. Норки содержатся в 5- или 7-местных шедах.

Основными видами кормов для норки является рыба и продукты ее переработки, мясные субпродукты. Хозяйство располагает холодильниками, что позволяет принимать крупными партиями кормовую рыбу, замороженные мясные субпродукты в сезон их поступления и иметь постоянный резерв этих кормов.

В зависимости от их удельного веса в рационе преобладают три типа кормления: рыбный, мясной и промежуточный, при котором удельный вес рыбы и мясных субпродуктов примерно одинаковый.

Как показали результаты исследования, в хозяйстве в 2009-2010 гг. преобладал рыбный тип кормления, при котором удельный вес рыбных продуктов в рационе норок составил 51,01±1,95 и 50,30±2,15 % соответственно. В 2011 г. удельный вес рыбных продуктов в рационе составил всего 33,01±1,37 %. Удельный вес мясных субпродуктов в рационе норок колебался в 2009-2010 гг. в пределах 30,21±1,15 %, в 2011–достигал 39,41±1,67 %.

Высокий удельный вес рыбных продуктов в рационе норок, в основном голов трески, приводит к нарушению обмена веществ и изменению функционального состояния печени, что способствует повышению количества случаев заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе и гепатозом.

Анализ ветеринарной отчетности позволил установить, что в 2009-2011 гг. в хозяйстве у норок преобладали заболевания органов пищеварения незаразной этиологии (36,5 и 35,1 % от общего числа заболеваний), а в 2011 - отмечали снижение уровня заболеваний до 27,7 %, при этом уровень гепатопатологий оставался примерно на одном уровне – 20,5; 19,3 и 18,5 %.

Изучение распространения гепатоза норок в хозяйстве в возрастном

аспекте

Проведенное в эти сроки обследование 400 голов норок в возрасте 1,8-2,3 года показало, что у 34,25 % (137 голов) выявлены клинические признаки гепатоза. Отмечали угнетение, малоподвижность, отсутствие аппетита, потерю в весе, иногда истощение норок, диарею. Волосяной покров на брюшке, в области ануса и промежности был влажным и «свалявшимся». Видимые слизистые оболочки - желтушные.

При патологоанатомическом вскрытии трупов отмечали вздутие живота, асцит. Сердце округло-овальной формы, наполнено кровью, миокард дряблый, цвета вареного мяса. На слизистой желудка и кишечника наличие густой слизи. Печень увеличена в размере, дряблой консистенции, легко рвется, рисунок печеночных долек на разрезе сглажен, цвет от темно-вишневого до охряно-желтого. Желчный пузырь переполнен желчью темно-зеленого цвета. Селезенка увеличена в размере, темно-вишневого цвета, почки увеличены, бледно-серого цвета.

При гистологическом исследовании срезов печени наблюдали жировую дистрофию гепатоцитов, с наличием мелких, чаще крупных капель жира, очаговое нарушение балочного строения органа. В отдельных участках отмечали дистонию синусоидальных капилляров с явлением агрегации эритроцитов. Междольковая соединительная ткань отечна, содержание лимфодиогистоцитарных клеток в ней незначительно. Выявляли гепатоциты перстневидной формы в результате смещения ядра клетки к периферии.

При клиническом обследовании 380 голов щенков норок в возрасте 8-10 месяцев у 67 голов (17,63 %) были выявлены признаки заболевания желудочно-кишечного тракта. Отмечали угнетение, кратковременные эпилептические припадки, жажду.

У 13 голов (3,42 %) отмечали диспептические расстройства, признаки общей интоксикации. В брюшной полости наблюдали скопление желтоватой прозрачной жидкости. Слизистая оболочка желудка и кишечника отечна, гиперемирована, с полосчатыми и мелкоточечными кровоизлияниями. Печень при пальпации несколько увеличена, уплотненная, болезненна, что характеризует острую форму гепатоза. Селезенка увеличена в размере, полнокровна, темного цвета. Почки увеличены в объеме, упругой консистенции, граница коркового и мозгового вещества на разрезе сглажена, мозговой слой темно-красного цвета. Легкие розового цвета, тестообразной консистенции, на разрезе бронхов выделяется пенистая жидкость. Температура, пульс, частота дыхания в пределах физиологической нормы.

При микроскопии гистологических препаратов печени щенков норок выявляли неравномерно увеличенные в объеме гепатоциты, ядра которых неправильной формы, уменьшены в объеме. Балочная структура слегка различима, что соответствует мелкокапельной жировой дистрофии.

Кроме того, отмечали явления острого катарального воспаления тонкого отдела кишечника, застойную гиперемию сосудов слизистой оболочки тонкого отдела кишечника.

Таким образом, в результате наших исследований установлено, что в зверохозяйстве «Мелковское» гепатоз регистрируется у взрослых норок в пределах 34,25 %, и, как правило, в хронической форме, у щенков норок – в пределах 17,63 %, при этом в 3,42 % у них отмечали гепатоз в острой форме.

Гематологические и биохимические показатели крови норок

Основным индикатором метаболизма в организме животных, является кровь, поэтому гематологические и биохимические показатели крови позволяют выявлять скрыто протекающие патологические процессы (Громыко Е.В., 2005). Кроме того, исследование биохимических показателей крови является неотъемлемой частью мониторинга заболеваний желудочно-кишечного тракта, с помощью которого можно оценить обмен веществ в организме и состояние внутренних органов животных (Уша Б.В., 2003 и др.).

Гематологическое исследование крови здоровых норок в возрасте 1,5-2,0 года и щенков в возрасте 8-10 месяцев позволило установить, что количество эритроцитов и лейкоцитов сохранялось в пределах физиологической нормы для данного вида и возраста животных. При этом в лейкограмме взрослых норок отмечали эозинофилию с повышенным количеством эозинофилов до 5,1-5,7 %, количество лимфоцитов достигало верхних границ нормы, а нейтрофилов – нижних границ нормы, что свидетельствует о низком защитном статусе организма.