Диагностика и морфо-функциональная характеристика хеликобактериоза у норок

На правах рукописи

ПЕТРОВА Ирина Владимировна

ДИАГНОСТИКА И МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА У НОРОК

Специальность 06.02.01 - Диагностика болезней и терапия

животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Москва, 2012

Работа выполнена на кафедре «Незаразные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» Министерства образования и науки РФ.

Научный руководитель: Уша Борис Вениаминович,

доктор ветеринарных наук, профессор,

академик РАСХН

(ФГБОУ ВПО «МГУПП»)

Официальные оппоненты: Брагин Геннадий Иванович,

доктор ветеринарных наук, профессор

(ФГБОУ ВПО «МГУПП»)

Геллер Вера Иосифовна,

кандидат ветеринарных наук,

ведущий научный сотрудник

ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Российский университет

дружбы народов»

Защита диссертации состоится «7» декабря 2012 г. в 14:00 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» по адресу: 109316, г. Москва, ул.Талалихина, д.33, в конференц-зале.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГБОУ ВПО «МГУПП».

Автореферат разослан «3» ноября 2012 г.

Автореферат размещен на сайте Министерства образования и науки РФ http://vak.ed.ru/ «1» ноября 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор Андрианова Т.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Пушное звероводство – одна из ведущих отраслей сельского хозяйства. В настоящее время существует сложная ситуация с кормовой базой. Пушное звероводство является биологическим утилизатором отходов сельскохозяйственного производства, в корм зверям нередко поступают низкокачественные продукты, а рационы зачастую плохо сбалансированы, что приводит к значительному снижению иммунного статуса у зверей (Рютова В.П., 1970; Сергеев Н.С., 1980; Милованов Л.В., 1997; Нюхалов А.П., 2005).

После присуждения в 2005 году Б. Маршаллу и Р.Уоррену Нобелевской премии в области физиологии и медицины за открытие влияния бактерии H.pylori на возникновение гастрита и язвы желудка у человека повысилось внимание к изучению роли бактерий в возникновении патологии желудка. Одной из актуальных проблем является широкое распространение хеликобактериоза как среди животных, так и среди людей. Современную эпизоотическую ситуацию по хеликобактериозу нельзя считать благополучной (Семикрасова А.Н., Литвинов О.Б., 2007). Ущерб от этого заболевания значителен. Хеликобактериоз поражает как взрослых норок основного стада, так и молодняк после отсадки.

На настоящий момент диагностика хеликобактериоза в звероводческих хозяйствах не проводится. В большинстве случаев хеликобактериоз остается неустановленным, а больные звери и падеж регистрируются под диагнозом других заболеваний. Не разработаны также методы профилактики и лечения хеликобактериоза норок. Решение этих проблем актуально для звероводства и поможет в значительной степени снизить смертность среди молодняка норок, а, следовательно, существенно уменьшить экономический ущерб.

Изучение эпизоотической обстановки, разработка средств профилактики и лечения хеликобактериоза норок невозможно без надежного и применимого в различных условиях способа диагностики. Таковым, согласно данным литературы, является гистологический способ диагностики хеликобактериоза у человека. В доступной нам литературе сведений о методах диагностики, разработанных для выявления хеликобактериоза у норок, мы не обнаружили. Исследования в данном направлении являются актуальными.

Цель и задачи исследований. Целью работы является: разработка патолого-морфологического способа диагностики хеликобактериоза у норок, изучение морфо-функциональных изменений в органах и тканях норок при хеликобактериозе.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать патолого-морфологический метод диагностики хеликобактериоза норок;

- изучить клинико-функциональные и морфологические изменения у норок при хеликобактериозе;

- изучить взаимосвязь морфо-функциональных изменений в желудке у норок с обсемененностью слизистой оболочки желудка хеликобактерами;

- установить характерные патолого-морфологических изменения при хеликобактериозе норок;

- разработать дифференциальную диагностику хеликобактериоза норок с основными инфекционными заболеваниями и токсикозами норок.

Научная новизна. Впервые изучены патолого-морфологические изменения при хеликобактериозе норок. Установлен и изучен комплекс взаимосвязанных между собой гистологических изменений в организме норок при хеликобактериозе. Установлена взаимосвязь патолого-морфологических изменений при хеликобактериозе у норок и обсемененность слизистой оболочки желудка бактериями рода Helicobacter.

Изучены патолого-морфологические изменения при хеликобактериозе норок. Предложена схема дифференциальной диагностики хеликобактериоза от сходных заболеваний норок.

Практическая значимость работы. Предложен способ диагностики хеликобактериоза норок.

Апробация. Основные положения диссертации доложены на конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины» (Покров, 2009), Международной научно-практической конференции «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства» (Респ. Беларусь, Жодино, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства» (Новочеркасск, 2011); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы клеточного пушного звероводства и кролиководства России» (ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, Москва, 2012), курсах повышения квалификации специалистов-звероводов (ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, Москва, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, входящих в список работ, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Научное обоснование патолого-морфологического способа диагностики хеликобактериоза норок.

- Результаты исследований клинико-функциональных и морфологических изменений в органах и тканях норок при хеликобактериозе.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка цитируемой литературы, включающего 213 источников, из них 110 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 11 таблицами и 56 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследования

Научно-практические эксперименты проводились в период с ноября 2009 по апрель 2012 гг. на кафедре «Незаразные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП», в отделе ветеринарной медицины и на экспериментальной ферме «Наука» ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии, а также в звероводческих хозяйствах ОАО «Племзавод «Пушкинский» и ЗАО «Малоярославецкое зверохозяйство».

Объектами исследования послужили самки и самцы норок, спонтанно заболевшие хеликобактериозом, подобранные по принципу аналогов. У подопытных норок были исключены сходные заболевания, протекающие с признаками поражения ЖКТ. По результатам проведенных исследований норки были разделены на 3 группы: 1-я группа – контроль, здоровые норки, без видимых клинических признаков отклонений в состоянии здоровья, убитые в возрасте 6-7 месяцев (10 голов); 2-я группа – норки, больные хеликобактериозом, убитые в возрасте 6-7 месяцев (100 голов); 3-я группа – норки, павшие от хеликобактериоза (50 голов). Всего для исследования использовали 160 голов норок.

Подопытных животных содержали в отдельных клетках, согласно принятым в хозяйстве технологиям и нормам.

С целью изучения клинических проявлений хеликобактериоза определяли клинико-физиологические показатели у норок: состояние шерстного и кожного покрова, адекватность поведенческих реакций, двигательную активность, сохранность аппетита, проводили пальпацию области желудка, определяли наличие характерных клинических признаков (рвота, нарушение акта дефекации).

Кровь для лабораторного исследования брали из кончика пальца с соблюдением правил асептики по общепринятой методике (Берестов В.А., 1981).

В цельной крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, уровень гемоглобина унифицированным колориметрическим методом, СОЭ – по методу Панченкова.

Биохимическими исследованиями сыворотки крови определяли содержание общего белка, глюкозы, билирубина, АсАТ, АлАТ по стандартным методикам на биохимическом анализаторе «Торус 1200».

Для изучения патологоанатомических изменений при хеликобактериозе у норок производили вскрытие и описание изменений в органах.

Для оценки местной уреазной активности желудка был проведен быстрый уреазный тест. Сразу же после убоя и вскрытия трупов норки брался биопсийный материал из желудка, из мест с максимально выраженной гиперемией и отеком, который помещали в пробирку типа эппендорф, в ту же пробирку добавляли 2 капли 6%-й мочевины по Кристенсену с феноловым красным. Пробирку плотно закрывали и через 15 мин. производили учет результата. Положительный результат – изменение окраски раствора мочевины с ярко-желтой на малиновую, отрицательный результат – цвет оставался ярко-желтым.

Для гистологического исследования отбирали материал из различных отделов желудка, двенадцатиперстной кишки, печени и поджелудочной железы. Патологический материал фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине в течение 10-30 дней при комнатной температуре. Из одной части материала готовили гистосрезы на замораживающем микротоме, другую часть подвергали целлоидиновой и парафиновой проводке, по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969; Жаров А.В., Белоусов В.И., Барабанов И.И. и др., 2005). Гистологические срезы готовили на системе для микротомирования микротом KD-3358.

Замороженные, целлоидиновые, депарафинированные срезы проводили по стандартным методикам, окрашивали гематоксилином и эозином, 0,1%-м метиленовым голубым на 0,1%-м растворе натрия тетрабората, Суданом III. Препараты заключали под покровные стекла в полистирол. Морфологическое исследование гистологических срезов проводили на световом микроскопе Nicon eclipse E200 с фотокамерой с помощью объектива х10, детализацию и уточнение морфологии структур х40, х100 (последнее с использованием иммерсионной системы).

Для определения степени обсемененности слизистой оболочки желудка хеликобактериями готовили мазки-отпечатки со слизистой антрального отдела желудка в первые 10 мин. после убоя путем «прокатывания» кусочка по стеклу с соблюдением общепринятых правил. Мазок фиксировали спирт-эфиром, затем окрашивали метиленовым синим по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969).

Хеликобактерии детализировали в слизи при увеличении х1000 с применением иммерсионной системы (Аруин Л.И., Исаков В.А., 1995).

Для проведения дифференциальной диагностики хеликобактериоза от других заболеваний норок, протекающих с признаками поражения желудочно-кишечного тракта, были использованы рекомендации по диагностике чумы плотоядных, пастереллеза, вирусного энтерита норок, сальмонеллеза, алеутской болезни норок и токсикозов различного происхождения.

Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с использованием методов биометрического анализа в программе Microsoft Office Exel. По всем количественным данным определяли критерий достоверности по Стьюденту.

2.2 Результаты собственных исследований

Клиническое проявление хеликобактериоза у норок

Во звероводческих хозяйствах ОАО «Племзавод «Пушкинский» и ЗАО «Малоярославецкое зверохозяйство» наблюдается заболевание норок, проявляющееся отказом от корма, рвотой, метеоризмом кишечника, поносом и сопровождающееся хроническим гастритом, язвами желудка и перитонитом.

Болезнь поражает, в основном, щенков и проявляется при отъеме от самок, т.е. при переводе на самостоятельный тип кормления. По нашим наблюдениям наивысший отход у щенков происходит в июле-августе. Он может быть очень значительным, достигая 200-300 голов в день при поголовье около 60000 молодняка (15000 основного стада). Начиная с сентября, количество летальных случаев снижается и к моменту убоя зверей, отход составлял единицы.

При хеликобактериозе у норок снижается аппетит, появляется отрыжка, язык несколько увеличен, с отпечатками зубов, обложен белесым налетом. В дальнейшем происходит нарастание симптомов: в течение часа после приема пищи наблюдается рвота, рвотные массы слизистые, нередко с примесью крови. Рвота является одним из патогномичных, а иногда и единственным симптомом язвенного процесса. При пальпации в области желудка выявляется боль, которая может вызвать рвоту. Нередко у норок возникает метеоризм, понос. Увеличивается жажда. Шерстный покров становится тусклым и сухим. Больной зверь взлохмачен, сгорблен. Отмечается слабость, зверь лежит, забившись в угол.

У норок, перенесших острую форму хеликобактериоза, заболевание переходит в хроническую форму, протекающую с обострениями.

Гематологическое и биохимическое исследование крови у норок при хеликобактериозе

Гематологические и биохимические показатели у 10-ти контрольных норок находились в пределах физиологической нормы для данного вида животных (табл. 1, 2).

У больных хеликобактериозом норок показатели изменились в пропорциональной зависимости от тяжести хеликобактер-ассоциированного гастрита, хронического гепатита и панкреатита. Показатели крови определяли у 100 голов убойного молодняка норок 2-й группы. У 23 норок показатели оставались близкими к показателям контрольной группы. При гистологическом исследовании желудка и печени морфологическая картина у этих зверей соответствовала неактивному и малоактивному гастриту и, соответственно, начальной форме гепатита. У 53-х норок гематологические показатели значительно изменились по сравнению с контролем: количество гемоглобина понизилось в среднем на 16,3 %, эритроцитов – на 7,5 %, количество лейкоцитов повысилось на 20 %, СОЭ увеличилось на 7,4 %. Результаты биохимического анализа крови показывают, что содержание общего белка понизилось на 18,1 %, глюкозы на 7,9 %, содержание билирубина в крови повысилось на 10,4 %, коэффициент Де-Ритиса понизился до 1,68 (табл. 1, 2). У этих норок, соответственно, при гистологическом исследовании были установлены умеренно-активный гастрит и хронический перипортальный, портальный и паренхиматозный гепатит средней тяжести.

Таблица 1 - Морфологические показатели крови норок (М

+ m)

Показатели	Контроль	Опыт (группа 2)
	10 голов	23 головы	53 головы	24 головы
Гемоглобин, г/л	153,0 +4,0	151,0+2,0*	128,0+5,0***	118,1+2,5***
Эритроциты, 1012 г/л	8,02+0,09	8,00+0,07*	7,42+0,05*	6,72+0,34***
Лейкоциты, 109 г/л	7,90+0,08	8,01+0,06**	9,48+0,03***	10,15+0,07***
СОЭ, мм/ч	2,50+0,12	2,70+0,10**	2,70+0,11***	2,90+0,10***

Примечание: * р

У 24 норок установлено снижение уровня гемоглобина на 22,8 %, количество эритроцитов на 16,2 %, повышение количества лейкоцитов на 28,5 %, СОЭ на 16 %. Биохимические показатели крови изменились следующим образом: уровень общего белка в сыворотке крови понизился на 25,8 %, глюкозы на 32,7 %, содержание билирубина повысилось на 55,4 %, повысилась активность АсАТ на 50 %, АлАТ на 9 %, коэффициент Де-Ритиса составил 1,2. При гистологическом исследовании материала от этих норок был установлен выраженный активный хеликобактер-ассоциированный гастрит, который сопровождался выраженным хроническим перипортальным, портальным и паренхиматозным гепатитом.

Таблица 2 - Биохимические показатели крови норок 1 и 2-ой группы (М

+ m)

Показатели	Контроль	Опыт (группа 2)
	10 голов	23 головы	53 головы	24 головы
Общий белок, г/л	49,68 + 0,89	49,00 + 0,75*	40,69 + 0,35***	36,86 + 0,24***
Глюкоза, ммоль/л	6,30 + 0,90	6,25 + 0,80*	5,80 + 0,75*	4,24 + 0,65**
Билирубин, мкмоль/л	26,20 + 1,39	26,5 + 1,7*	28,92 + 1,25***	40,71+ 1,12***
АсАТ, мккат/л	0,98 + 0,01	0,95 + 0,05*	0,69 + 0,02***	0,49 + 0,05***
АлАТ, мккат/л	0,38 + 0,01	0,40+ 0,02*	0,41 + 0,03*	0,41 + 0,02*
Коэффициент Де-Ритиса	2,60+0,03	2,39+0,02***	1,68+0,01***	1,2+0,02***