Дерматофитозы собак в городах сибири (эпизоотология, иммунология)

На правах рукописи

ВАЖЕНИНА ЕВГЕНИЯ ГЕННАДЬЕВНА

ДЕРМАТОФИТОЗЫ СОБАК В ГОРОДАХ СИБИРИ

(ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ)

Специальность 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Барнаул – 2007

Работа выполнена на кафедре инфекционных и инвазионных болезней, в ветеринарной клинике института биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия», в лабораториях мелких домашних животных и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных» Сибирского отделения Россельхозакадемии

Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук

Гордиенко Л.Н.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Кашин А.С.

доктор ветеринарных наук

Разумовская В.В.

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный

университет»

Защита диссертации состоится 30 мая 2007 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220. 002. 02 при Алтайском государственном аграрном университете в институте ветеринарной медицины по адресу: 656922, г. Барнаул, ул. Попова, д. 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан 20 апреля 2007 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор ветеринарных наук,

профессор П.И. Барышников

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время дерматофитозы собак (микроспория, трихофития) широко распространены в Российской Федерации и других странах мира. Они занимают одно из ведущих мест (от 7 до 61%) в патологии кожи и ее производных (Головина и др., 1999; Грязин, 2001; Постников и др., 2001; Зубарева и др., 2003; Овчеренко и др., 2003, 2004; Бибина, 2005; Новикова, 2005; Muller, 1970; Hariramma et al., 1973; Jolivet, 1974; Abou-Gabal et al., 1976; Stenwig, 1985; Larry et al., 1997). Это связано с ростом численности бездомных животных, служащих основным источником возбудителя инфекции, высокой восприимчивостью собак к заражению, со способностью патогенных дерматофитов длительное время выдерживать неблагоприятные воздействия внешней среды, с отсутствием или несвоевременным проведением диагностических, лечебных и профилактических мероприятий.

В каждом регионе эти заболевания имеют свои особенности проявления эпизоотического процесса, зависящие от климатических условий, факторов внешней среды и системы ветеринарных мероприятий. В последние годы (1997-2005 гг.) отмечается широкое распространение дерматофитозов собак и на урбанизированных территориях городов Сибири, что вызывает необходимость изучения факторов, влияющих на эпизоотический и инфекционный процессы.

Отсутствие статистических данных о численности популяции собак (canis familiaris) в России не дает возможности иметь достоверные сведения об основных показателях эпизоотического процесса при дерматофитозах, так как около 75% собак являются бродячими, имеющие большое эпизоотологическое и эпидемиологическое значение как потенциальный источник инфекции (Спесивцева, 1964; Колодиев, 1999). Эпизоотологический анализ по дерматофитозам собак в большинстве случаев основан на материалах отчетности ветеринарных клиник, что позволяет на модели фиксированного поголовья определить факторы, влияющие на характер, проявление и течение заболевания.

Согласно данным исследователей, 50-70% грибковых кожных болезней собак, вызываются возбудителем Microsporum canis. Остальные дерматофитозы вызываются возбудителями Trichophyton mentagrophytes и Microsporum gypseum (Лукьяновский, 1988; Гаскелл и др., 2000; Зубарева и др., 2003).

Результаты клинических наблюдений и экспериментальных исследований многих авторов свидетельствуют о том, что в патогенезе грибковых заболеваний важную роль играют все звенья иммунной системы (Родионов, 2000; Грязин, 2001; Горячкина, 2003). Открытие ведущей роли Т- и В-лимфоцитов в иммунитете, их клеточной кооперации с макрофагами, разработка методов идентификации иммунокомпетентных клеток дает возможность более объективной оценки иммунного статуса животных.

Таким образом, изучение эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак в крупных городах Сибири, иммунологических реакций в организме больных и переболевших животных до сих пор является актуальной задачей, что и явилось обоснованием для выбора темы исследований.

Цель и задачи исследований. Цель работы - выяснить эпизоотическую ситуацию по дерматофитозам собак на территории Сибири (на примере городов Тюмени и Омска), изучить иммунный статус животных, экспериментально зараженных возбудителем трихофитии и выявить влияние разных схем терапии на иммунологические реакции собак.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- Изучить распространение и клиническое проявление дерматофитозов у собак на территории городов Сибири (на примере городов Тюмени и Омска).

- Установить выживаемость возбудителя трихофитии в различных объектах и разных температурных условиях внешней среды.

- Определить иммунный статус у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии, в период и после терапии.

Научная новизна работы. Впервые в условиях городов Тюмени и Омска установлено распространение дерматофитозов среди собак, определена сезонность и выявлена возрастная динамика заболеваний.

Изучена устойчивость возбудителя трихофитии Trichophyton mentagrophytes в разных объектах к колебаниям температуры воздуха и установлено, что дерматофит наиболее длительное время сохраняется во влажной среде при среднесуточной температуре от +34,0±0,7 (в летнее время) до -30,5±1,3°С (в зимнее время) – 360-560 суток (срок наблюдения).

Определен уровень розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови экспериментально зараженных возбудителем трихофитии собак. Выявлено, что в организме экспериментально зараженных собак возбудитель трихофитии вызывает клеточные реакции, проявляющиеся в увеличении числа Т- и В-лимфоцитов и уменьшении антигенсвязывающих лимфоцитов.

Установлено, что применение вакцины «Вакдерм» в терапии трихофитии вызывает иммунологические реакции, характеризующиеся повышенным содержанием иммунокомпетентных клеток.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований были получены данные о распространении дерматофитозов среди собак в крупных городах Сибири (Тюмень, Омск). Определены сроки выживаемости возбудителя трихофитии в разных условиях внешней среды на различных объектах (почва, вода, комбикорм, опил).

Иммунологически и клинически обоснована схема терапии дерматофитозов собак с использованием инактивированной вакцины «Вакдерм».

Разработаны рекомендации «Эпизоотология, диагностика, профилактика и лечение дерматомикозов мелких домашних животных», рассмотрены и утверждены на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №1 от 17.01.2006 г., Новосибирск).

Результаты комплексных эпизоотологических, клинических и лабораторных исследований предложены для применения в практической работе специалистами ветеринарных клиник: лаборатории мелких домашних животных ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии (протокол №8 от 24.08.2006 г.); «ДокторВет» (г. Новосибирск); лаборатории экспериментальной вертебрологии и нейрохирургии ФГУН «РНЦ «ВТО» имени академика Г.А. Илизарова Росздрава» (протокол №2 от 11.09.2006 г.); кинологических подразделений УВД Омской области (протокол №27 от 07.09.2006 г.); а также в учебном процессе и в научных исследованиях на кафедрах: инфекционных и инвазионных болезней ИБиВМ ФГОУ ВПО «Тюменская ГСХА»; микробиологии, вирусологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова» (протокол №1 от 01.09.2006 г.); эпизоотологии, паразитологии и микробиологии Дальневосточного ГАУ (протокол №1 от 18.09.2006 г.); микробиологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «Алтайский ГАУ» (протокол №1 от 31.08.2006 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Материалы по изучению эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак на урбанизированной территории городов Сибири. Результаты по изучению сохранения жизнеспособности возбудителя трихофитии на различных объектах при разных температурных режимах внешней среды.

2. Оценка иммунного статуса у собак при экспериментальном заражении возбудителем трихофитии.

Апробация работы. Основные результаты научно-исследовательской работы доложены: на 3-5-й межрегиональных научно-практических конференциях по проблемам ветеринарной медицины (Омск, 2004-2006 гг.); на Сибирском международном ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005г.); на XIII-XIV международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва, 2005-2006 гг.), на Ученых советах ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН; на подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2006г.); на межлабораторном совещании ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН (Омск, 2006г.) и на межкафедральном заседании ФГОУ ВПО ТГСХА (Тюмень, 2006г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных статей и одни методические рекомендации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного набора, включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения. Список использованной литературы включает 251 источник, в том числе 213 отечественных и 38 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 24 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2002 по 2005 гг. на кафедре инфекционных и инвазионных болезней, ветеринарной клинике института биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия», в лабораториях мелких домашних животных и иммунологии государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных» Сибирского отделения Россельхозакадемии.

При проведении исследований применяли эпизоотологические, клинические, гематологические, иммунологические, микроскопические и культуральные методы (Бажин и др., 1989; Костенко и др., 1989; Бакулов и др., 1997; Урбан и др., 2002).

Анализ эпизоотической ситуации по дерматофитозам собак проводили на основании первичной ветеринарной документации и непосредственного наблюдения за животными с учетом клинико-анамнестических данных и результатов лабораторных исследований. Для определения эпизоотического процесса дерматофитозов у собак в условиях городов Сибири изучали ряд факторов: породный и половозрастной состав больных животных, сезонность проявления заболеваний, способность возбудителя трихофитии к выживанию в различных объектах внешней среды, их роль и место в инфекционной патологии.

Изучение клинических признаков дерматофитозов собак в городах Тюмени и Омске проводили по анализу материалов диагностических исследований и методом клинического обследования животных, поступавших в ветеринарные клиники.

В момент поступления на каждого животного была заведена карта индивидуального учета, в которой были зафиксированы данные о породе, возрасте, половой принадлежности, условиях кормления и содержания, подробный анамнез обо всех случаях каких-либо болезненных проявлений у животного, результаты клинического обследования и лабораторных исследований.

Биоматериалом для микроскопических и культуральных (микологических) исследований служили волосы и чешуйки кожи с пораженных участков животных, не подвергавшихся лечению.

Биоматериал для микроскопического исследования отбирали с периферии очага путем глубокого соскоба скальпелем. Для более четкого выявления элементов гриба проводили просветление материала с помощью добавления 1-3 капли 10%-ного водного раствора гидроксида натрия. Исследуемый материал покрывали покровным стеклом, осторожно подогревали над пламенем спиртовки до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли и подвергали микроскопии с использованием светового микроскопа «Биолам» сначала под малым увеличением объектива (объектив х8, окуляр х15), а потом под средним (объектив х40, окуляр х15).

Пораженные волосы для культурального исследования аккуратно выщипывали по краю очага и помещали в стерильные пакеты из пергаментной бумаги. В боксе стригли корневые части волос на мелкие кусочки (1-2 мм), 2-3 из них наносили на поверхность скошенного агара Сабуро и располагали на расстоянии 1-2 см друг от друга. Материалом одной пробы засевали не менее 3-4 пробирок, одновременно осуществляли контроль воздуха. Посевы проводили над пламенем спиртовой горелки по общепринятой методике (Костенко и др., 1989). Затем посевы инкубировали в двух термостатах при температурах +27 и +30°С в течение 30 суток. Состояние роста культур контролировали с интервалом 3-4 суток.

У изолированных культур изучали морфологические и культуральные свойства. Грибы исследовали в неокрашенном состоянии по общей методике (Костенко и др., 1989) с использованием светового микроскопа «Биолам» под средним увеличением объектива (объектив х40, окуляр х15).

Для определения жизнеспособности дерматофитов был использован эпизоотический штамм Trichophyton mentagrophytes var. gypseum. С этой целью исследовали 112 тест-объектов с биоматериалом в разные сроки: через 30, 60, 90, 120, 180, 360 и 560 суток после закладки.

В течение всего периода опыта вели учет температуры воздуха окружающей среды. Измерение температуры проводили с помощью спиртового термометра. Среднесуточную температуру высчитывали по методу Н.В. Садовского (1975).

Сравнительную оценку методов диагностики дерматофитозов проводили на 48 клинически больных дерматофитозами собаках разных пород и половозрастных групп.

Экспериментальное заражение собак эпизоотическим штаммом Trichophyton mentagrophytes и исследования по изучению клинических признаков и иммунологических реакций экспериментальных животных проводили на базе лабораторий мелких домашних животных и иммунологии ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии.

Для проведения опытов по принципу аналогов были подобраны 11 щенков четырехмесячного возраста, средней массой 3-5 кг, из которых сформировали 3 группы, в 1-ой и 2-ой группах было по 4 щенков, в 3-й - 3 щенков. Группы содержались в аналогичных условиях, отвечающих зооветеринарным и санитарно-гигиеническим требованиям, в вольерах, в отдельных будках, снабженных подстилкой из соломы. Собаки получали полноценный рацион, содержащий мясные продукты (до 30% от общего объема) в отварном и сыром виде, каши на мясном бульоне, овощи. В качестве минеральной добавки получали кальций фосфат в дозе 0,8 г/кг массы тела.

Все животные были одновременно экстрадермально заражены культурой эпизоотического штамма Trichophyton mentagrophytes var. gypseum, выделенной от больного трихофитией животного. Для этого культуру вместе с агаром растирали между двумя стерильными листочками наждачной бумаги и осторожно (без крови) втирали в предварительно выбритый участок кожи (диаметром около 6 см) в области правой лопатки (месте недоступном для облизывания).

Через 30 суток после экспериментального заражения было проведено лечение каждой группы собак разными методами: 1-я группа - с кормом получали витаминизированную добавку «дрожжи кормовые», содержащую натуральный комплекс витаминов группы В, в дозе, согласно инструкции по применению (10-20 г/кг корма), индивидуально; 2-я группа - подвергались терапии с применением инактивированной вакцины «Вакдерм» в дозе 1 мл, трехкратно с интервалом 14 суток; 3-я группа щенков - получали «дрожжи кормовые» (аналогично первой группе) и подвергались трехкратной терапии вакциной «Вакдерм» (аналогично второй группе).

Для изучения иммунного статуса собак проводили исследования по определению розеткообразующих лимфоцитов крови, соответственно рекомендаций М.А. Бажина и др. (1989) и лейкограммы: до заражения (контроль) и после заражения возбудителем трихофитии (на 26-е, 46-е и 75-е сутки).

Материалом для иммунологических исследований являлась свежая периферическая кровь, полученная из подкожной вены предплечья собак.

Количество Т-лимфоцитов в крови определяли в реакции спонтанного розеткообразования (Е-рок); лимфоцитов-киллеров – в реакции непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок); В-лимфоцитов – в реакции комплементарного розеткообразования (ЕАС-рок); антигенсвязывающих лимфоцитов – с помощью розеткообразования с эритроцитами собаки (ЕАГ-рок), адсорбировавшими антиген возбудителя трихофитии, полученный методом автоклавирования экстрактов.

Для выведения лейкограммы брали капиллярную кровь из краевых вен ушных раковин собак. Лейкограмму выводили по окрашенным мазкам в иммерсионной системе микроскопа (объектив х100, окуляр х10) путем дифференциального подсчета 100 лейкоцитов трехпольным методом с использованием клавишного счетчика (по Филиппченко).

Цифровой материал обрабатывали методами вариационной статистики с определением t-критерия достоверности по Стьюденту и уровня значимости Р. Вероятность различий осуществляли при Р

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Распространение дерматофитозов собак на территории

городов Тюмени и Омска

На основании анализа материалов ветеринарной отчетности ветеринарных клиник ФГОУ ВПО ТГСХА и ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии, установлено, что за период с 1997 по 2005 гг. поступило на обследование 24550 собак с различной патологией, - из них: 12381 (50,4%) животных с заболеваниями кожи. Дерматофитоз выявлен в 1011 (8,2%) случаях от числа животных с кожными заболеваниями, из них у 169 (16,7%) собак в момент поступления диагностировали сочетанное течение дерматофитоза и демодекоза.

В результате микологических исследований биоматериала от собак выделяли и идентифицировали культуры грибов Microsporum canis и Trichophyton mentagrophytes.

Изучая анамнез, мы отметили, что заражение часто происходит при контакте собак с бродячими животными в местах общего их выгула, за городом, на дачах во время летних отпусков, а также при вязках собак, при использовании в качестве подстилки соломы, изъеденной грызунами и т.п. Собаки заражались при непосредственном контакте с больными животными или через предметы ухода. Факторами передачи возбудителя служили инфицированные помещения, корма, подстилка и т.д.

В результате статистического анализа установлено, что дерматофитозы собак в городах Тюмени и Омске регистрируются в течение всего года. Однако можно отметить общую тенденцию увеличения количества больных собак в летне-осенний период: зимой (декабрь, январь, февраль) – 127 (12,5%) из 1011 собак; весной (март, апрель, май) - 208 (20,6%); летом (июнь, июль, август) – 389 (38,5%); осенью (сентябрь, октябрь, ноябрь) – 287 (28,4%).