Паразитоценозы свиней в прибайкалье и влияние антгельминтиков на физиологическое состояние поросят

На правах рукописи

УКРАИНЕЦ ВИКТОРИЯ ЛЕОНИДОВНА

Паразитоценозы свиней в Прибайкалье и влияние антгельминтиков на физиологическое состояние поросят

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2008

Работа выполнена в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени. В.Р. Филиппова, на кафедре паразитологии, эпизоотологии и ОВД

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

Евдокимов Петр Иванович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

Разумовская Валентина Владимировна

кандидат ветеринарных наук, доцент

Кравченко Ирина Алексеевна

Ведущая организация – ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится 28 ноября 2008 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» в Институте ветеринарной медицины по адресу: 656922, г. Барнаул, ул. Попова, 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета

Автореферат разослан 26 октября2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета П.И. Барышников

.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. В последнее время появилась необходимость комплексно–системного подхода к ветеринарно-санитарным мероприятиям в профилактике инвазионных и инфекционных заболеваний с позиции ветеринарной экологии (Гуславский И.И. с соавт., 1998). Появились работы, которые указывают на возникновение заболеваний ассоциативного характера имеющие инвазионное и инфекционное начало (Панасюк Д.И., 1978). Этиологические причины их стоят на различных уровнях иерархической лестницы и находятся в тесной трофической и биологической связи между собой, а вызываемые ими патологии зачастую связаны с состоянием экологической ситуации.

В работах ряда авторов (Мамедова Ф.Х., 1984; Голубков В.Ф., Величкин П.А., 1970; Плиева А.М., Даугалиева Э.Х., 1983 и др.) указывается роль инвазионного процесса в запуске механизмов инфекции. Выявлено микробоносительство гельминтами, которое впоследствии становится фактором передачи инфекции. Применяемые сегодня в профилактической и лечебной работе антгельминтики широкого спектра действии не индифферентны для иммунного и микробного статуса животных, они вызывают иммунодефицитное состояние и супрессии микробного статуса организма (Малахова Е.И., Фролова Н.П., 1980; Апалькин В.А., 1998; Третьяков А.М., 2001; Евдокимов П.И., 2005; Смирнов П.Н., 2007; Рябцева Е.В., 2007; Третьяков А.М., 2008; и др.).

В связи с этим, изучение влияния антгельминтиков широкого спектра действия на микробный и иммунный статус организма животных представляет научный и практический интерес. В тоже время разработка и внедрение комплексного системного подхода в профилактике инвазионных и инфекционных заболеваний приобрело высокую актуальность с позиции ветеринарной экологии.

Цель исследований. Целью исследования явилось изучение особенностей распространения ассоциативных инфекций и паразитов у свиней (в разных вариантах развития), патофизиологических характеристик их проявления у животных, а также изучение влияния антгельминтиков на микробный и иммунный статус поросят, биологические свойства микроорганизмов микробиоценоза желудочно-кишечного тракта, проведение коррекции микрофлоры бифидосодержащими препаратами после дегельминтизации и разработка методов одновременной дегельминтизации и микробной санации антгельминтиками и антибиотиками.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследований:

1.Изучить особенности и частоту распространения инфекционных и ассоциативных болезней у свиней на модели отдельных хозяйств Иркутской области.

2.Дать экспериментальную оценку влияния антгельминтика аверсект-2, аверсект-2ВК-6%, альбамелин на качественный и количественный состав кишечной микрофлоры поросят.

3.Изучить возможность использования пробиотика «коредон» в качестве иммунопротектора для коррекции негативного влияния аверсекта-2 на организм поросят при проведении массовой дегельминтизации животных.

4. Установить бактерионосительство возбудителя аскаридоза свиней.

5..Провести изучение влияния аверсект-2 на персистентные характеристики на представителей кишечной микрофлоры свиней.

6. Изучить клиническое проявление ассоциативного развития инфекций и паразитозов у свиней.

7. На модели развития сальмонеллезно-аскаридозной патологии свиней разработать научно-обоснованную эффективную лечебную схему на основе комплексного применения пробиотиков, антгельминтиков и антибиотиков.

Научная новизна. Впервые в Прибайкалье было изучено влияние антгельминтиков на микробиоценоз кишечника и физиологический статус организма животных, и выявлено их негативное воздействие. Проведен микробиологический мониторинг представителей кишечной микрофлоры, изучены биологические свойства бактерий, их персистентные характеристики и изменчивость после воздействия антгельминтика. Разработан методологический подход в санации микробоносительства патогенных микробов с помощью антгельминтиков.

Практическая значимость. Результаты исследований расширяют представление о степени влияния антгельминтиков на микробный и иммунный статус организма свиней. Полученные данные показывают, что у животных наблюдаются нарушения в микробоценозе кишечника под действием этих препаратов, что свидетельствует о возможности возникновения вторичных инфекций и иммунодефицитного состояния. Применение животным препарата «коредон» после дегельминтизации, способствует восстановлению кишечной микрофлоры в короткие сроки.

На защиту выносятся следующие положения:

1.Распространение и клиническое проявление инфекционных и ассоциативных (гельминто-бактериальных) болезней свиней в Прибайкалье.

2. Микробиологические изменения в кишечнике свиней после применения аверсект-2, аверсект-2ВК-6%, альбамелин и способы их коррекции препаратом «коредон».

3. Влияние аверсект-2 на изменение видового состава, персистентные и гемолитические свойства кишечной микрофлоры свиней.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции посвященной 75-летию ФГОУ ВПО БГСХА (Улан-Удэ, декабрь 2006); Научно – практической конференции «Стратегия развития сельскохозяйственной науки Сибири в ХХI веке» (Улан-удэ, 1-6 февраля 2007); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 22-23 июня 2007); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инвазионной и инфекционной патологии животных» (Улан-Удэ, 27-29 июня 2008); Межрегиональной научно-практической конференции «Адаптация, здоровье и производительность животных» (Новосибирск, 22-23 мая 2008).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе в журнале по перечню ВАК (Сибирский вестник сельскохозяйственной науки) и 1 научная рекомендация.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 3 рисунками. Список литературы включает 216 источников, из них 46 иностранных.

Номер государственной регистрации темы: 01.9.70005.375

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы

Работу проводили с 2002 по 2008 год на кафедре паразитологии, эпизоотологии и ОВД ФГОУ ВПО БГСХА имени В.Р.Филиппова, в бактериологическом и серологическом отделах Усольской ветеринарной лаборатории Иркутской области.

Забор материала для исследований осуществляли на Усольском свинокомплексе. Для бактериологического исследования отбирали пробы содержимого кишечника свиней. В лабораторных исследованиях использовали следующие питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ, кровяной МПА, среды Эндо, Левина, Плоскирева, Сабуро висмут-сульфитный агар, молоко, желточно – солевой агар, агар Блаурокка, среда Вильсона-Блера.

С целью выяснения эпизоотической обстановки по инфекционным болезням в Иркутской области были проведены, прежде всего, ретроспективные исследования на глубину 10 лет – с 1995 по 2005 г.г.,

использовали ветеринарные статистические отчеты хозяйств, районных ветеринарных лабораторий. Кроме того, использовали результаты собственных эпизоотологических и клинических исследований сельскохозяйственных животных в очагах инфекционных и паразитарных болезней в животноводческих хозяйствах Иркутской области.

Эпизоотологический анализ осуществляли, руководствуясь «Рекомендациями по методике эпизоотического исследования» (Бакулов И.А., 1975).

Предметом лабораторного исследования служили свежевыделенные фекалии отдельных животных. Пробы фекалий, отобранные, до утреннего кормления животных помещали в пробирки с 1 мл физиологического раствора, разводили им же до конечного соотношения к весу фекалий 1:9, после гомогенизации полученную взвесь подвергали последовательным десятикратным разведениям, со сменой пипеток, в физиологическом растворе от 101 до 1010. Затем из каждого разведения материал засевали по 0,1 мл на чашки Петри с твердыми питательными средами с последующим растиранием шпателем, по 1 мл в пробирки с полужидкой питательной средой. Учет результатов проводили для аэробных бактерий через 24–48 ч и для анаэробных - через 48-96 ч культивирования при температуре 37оС в условиях микроанаэростата. Схема посева материала на питательные среды представлена в таблице 1.

Подсчет количества каждого вида микроорганизмов в 1 г фекалий проводили по формуле М=N·10n+1, где М- число микробов в 1 г; N – количество выросших колоний на чашке или в пробирке; n – степень разведения материала.

С целью установления видовой принадлежности и изучения биохимических свойств, выделенных микроорганизмов, их изолировали в чистой культуре, отбирая колонии, лежащие отдельно друг от друга. Выделение и родовую идентификацию осуществляли в соответствии с методиками, изложенными в методических рекомендациях (М.1986), и в методике К.К Раевского., В.М. Добрынина, В.И. Кочеровец (1997).

Для подсчета бифидобактерий подготовленные разведения фекалий вводили в свежередуцированную среду Блаурокка в модификации Г.И. Гончаровой (1968), разлитую в пробирки высоким столбиком (не меньше 10 мл), колонии бифидобактерий вырастали в виде характерных образований в нижней части посевной среды. При необходимости пастеровской пипеткой отбирали отдельные колонии, которые подвергали микроскопированию. Окраску препаратов проводили по Граму. Грамположительные клетки с характерными образованиями на концах, рассматривались как принадлежащие к роду Bifidobacterium. Для подсчета клостридиальных форм бактерий 0,1 мл каждого разведения добавляли в расплавленную и охлажденную до 56оС среду Вильсон-Блера. После перемешивания среда с посевами в высоком столбике оставалась при комнатной температуре до застывания. Учет результатов осуществляли по количеству черных колоний в толще питательной среды. Микробы семейства Enterobacteriaceae выделяли на средах Эндо, Плоскирева и Левина. На основании морфологии колоний и данных микроскопирования посчитывали количество кишечных палочек, сальмонелл и протея. Изоляцию стафилококков проводили на желточно-солевом агаре, содержащем 7,5% NaCl, и последующим микроскопированием выросших колоний. Бактерии округлой формы с характерным гроздевидным расположением были отнесены к роду Staphylococcus. Для выделения грибов использовали среду Сабуро с тетрациклином (45мг/л). Выросшие грамположительные крупные круглой или овальной формы клетки с диаметром 2,5 – 6 мкм, дающие на среде Сабуро бесцветные или слабоокрашенные колонии круглой формы в аэробных условиях при 37оС, были отнесены к грибам рода Candida. Для определения количества гемолизирующей энтеропатогенной микрофлоры использовали 5%-ный кровяной МПА. Подсчитывали те колонии микроорганизмов, которые образовывали зону гемолиза.

Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических свойств выделенных микроорганизмов из кишечника свиней производили с применением методов общей микробиологии (Биргер М.О., 1983; Герхард Ф., 1983; Антонов Б.И., 1986). Для изучения тинкториальных свойств микроорганизмов мазки окрашивали по Граму, Трухильо, Романовскому-Гимзе. Культуральные свойства изучали на следующих средах: МПА, МПБ, кровяном МПА, Эндо, Левина, Плоскирева, висмут–сульфитном агаре. Протеолитические свойства микроорганизмов определяли на МПЖ и молоке.

При идентификации и дифференциации микроорганизмов применяли систему индикаторных бумажек (СИБ) Горьковского НИИ эпидемиологии Минздрава РФ и планшеты мультимикротестов ММТ–1. В пробирки со стерильным физиологическим раствором (рН 7,2) по 0,3 мл вносили петлю суточной агаровой культуры, затем в эту взвесь погружали диски индикаторных бумажек, пропитанных растворами углеводов и многоатомных спиртов. Учет реакции производили после 30 минут, 2; 12 и 24 часов инкубирования в термостате при 37оС. Изменение цвета среды указывало на расщепление углевода и образований в среде кислых продуктов распада.

Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяют  методом диффузии в агаре с использованием официальных дисков согласно "Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам" (МЗ СССР 10.03.83 N 267583).

Для этого МПА разливали по 20 мл в стерильные чашки Петри. На поверхность уплотнившейся среды наливали 1 мл одномиллиардной взвеси (в 0,9%-ном растворе NaCl) агаровой культуры микроорганизмов. Легким покачиванием чашки взвесь культуры равномерно распределяли на поверхности агара. После подсушивания чашки в термостате при 370С в течение 30–40 минут на поверхность засеянной среды стерильным пинцетом накладывали бумажные диски с различными антибиотиками на расстоянии 2 см друг от друга и края чашки. Чашки Петри помещали в термостат на 16 – 18 часов при температуре 370.

Оценку результатов проводили с учетом наличия или отсутствия зоны задержки роста микроорганизмов, размера зоны (мм) вокруг диска с антибиотиками. Зона задержки роста до 15 мм в диаметре, включая диаметр диска, является показателем малой чувствительности микроорганизмов к данному антибиотику. Зона в 15 – 25 мм и более указывает на достаточную чувствительность испытуемой культуры. Отсутствие зоны задержки роста бактерий свидетельствует о нечувствительности к данному препарату (Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С., 1989).

Серологические исследования проводили по общепринятой методике, описанной в книге «Лабораторные исследования в ветеринарии» (Антонова В.Я., Блинова П.Н., 1971).

Для изучения влияния антгельминтиков на активность антибиотиков культуры высевали на чашки Петри с МПА до момента культивирования их в присутствии антгельминтиков и после через каждые 6 часов с применением стандартных дисков антибиотиков.

Идентификацию выделенных культур микробов проводили по определителям Берджи (1997), Циона (1948).

Экспериментальный материал обрабатывали методом вариационной статистики на кафедре информатики и вычислительной техники БГСХА.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Динамика эпизоотического процесса инфекционных болезней свиней в Иркутской области

Анализ эпизоотической ситуации проводили по материалам ветеринарной отчетности, используя интенсивные и экстенсивные методы оценки эпизоотического процесса, в котором были приняты к сведению данные последних четырех лет. Всего за анализируемый период в области зарегистрированы инфекционные болезни в 88 неблагополучных пунктах, при этом заболело 1088 свиней, из них пало 389. Показатель летальности оказался равным 35,7%. В 2000 году было зарегистрировано 20 неблагополучных пунктов, заболело 370 и пало 93(25,1%), в 2001 году регистрировалось 17 неблагополучных пунктов, в них заболело 333 и пало 157 голов (47,1%), в 2002 году было зарегистрировано 35 неблагополучных пунктов, заболело 198 и пало 49 (24,7%), и в 2003 году регистрировалось 16 неблагополучных пунктов, в них заболело 187 и пало 90 голов (48,1%). В анализируемом периоде 2002 год характеризуется двукратным увеличением числа регистрации неблагополучных пунктов по инфекционным болезням свиней. За анализируемый период по районам области наибольшее число неблагополучных пунктов с большим числом заболеваемости свиней и высоким уровнем летальности регистрировалось в Бодайбинском (н/п 17-19,3%, заболело 131-12% и пало 48-12,3%), Нижнеудинском (12-13,6%, 89-8,1%, и 24-6,1-%), Тулунском (18-20,4-%, 123-11,3% и 38-9,7%), Балаганском (16-18,1%, 468-43% и 173-44,4%). В двух районах ежегодно (за анализируемый период) регистрировались неблагополучные пункты (4-х кратно), в трех (3-х кратно), в пяти (двукратно) и в пяти (однократно). За анализируемый период неблагополучные пункты по инфекционным заболеваниям регистрировали в 15-ти районах области из 32-х, то есть более 50% районов, где возникали вспышки инфекционных болезней. В семнадцати (53%) районах области ветслужбой обеспечивалось ветеринарное благополучие.

Не менее иллюстративным был такой показатель эпизоотического процесса как коэффициент очаговости, который отражает тенденцию снижения степени неблагополучия по инфекционным болезням свиней в области. За анализируемый период в целом по области коэффициент очаговости был достаточно высоким и составил в среднем 12,4. Так, например, в 2000 году средний показатель очаговости по области равнялся 18,5; в 2001году он был выше и составил 19,5 и в 2002 году, несмотря на 2-х кратное увеличение неблагополучных пунктов, коэффициент очаговости был в три с лишним раза ниже по сравнению с предыдущим годом (составил 5,65), а 2003 год, несмотря на снижение числа неблагополучных пунктов с 35-ти до 16-ти, имел тенденцию повышения - до 12,36. Показатель летальности выглядел следующим образом: в 2000 году в среднем по области он составил 14,0%; в 2001году - 14,3; в 2002 г. произошло снижение данного показателя в 2 раза до 7,2%. В 2003 году он оставался на том же уровне -7,3%. В 2000 году высокие показатели летальности имели место в Братском, Тайшетском- 100%, Черемховском-60% и Осинском-75% районах; в 2001 году в Тайшетском, Черемховском-100%, в Тулунском, Усольском-50%, в Балаганском-54,7%; в 2002 году – в Братском-100%; в 2003 году - Куйтунском-59%.

Таким образом, в отдельных районах Иркутской области инфекционные болезни свиней протекали с высоким уровнем летальности и соответственно регистрацией большого числа неблагополучных пунктов, что указывает на тяжесть эпизоотического процесса и степень напряженности эпизоотической ситуации.

Ретроспективный анализ нозологического профиля наиболее распространенных бактериальных инфекций свиней в Иркутской области на глубину 5 лет (2000 -2004 г.г.)