Авторефераты диссертаций >> Клинико-патоморфологические аспекты ассоциативного течения некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов
На правах рукописи
АШЕНБРЕННЕР
Александр Иванович
КЛИНИКО-ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АССОЦИАТИВНОГО ТЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА, АКТИНОМИКОЗА И ИНФЕКЦИОННОЙ АНАЭРОБНОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ У МАРАЛОВ
16.00.03 – «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»
16.00.02 – «Патология, онкология и морфология животных»
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной степени
кандидата ветеринарных наук
Барнаул - 2009
Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» Сибирского отделения Россельхозакадемии.
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор,
заслуженный деятель науки РФ
Луницын Василий Герасимович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Малофеев Юрий Михайлович
кандидат ветеринарных наук
Огнев Сергей Ильич
Ведущая организация: ФГОУ ВПО Институт ветеринарной
медицины ОмГАУ
Защита состоится « 17 » декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу: 656922, Алтайский край, г. Барнаул, ул. Попова 276, ИВМ АГАУ.
Факс (385-2) 31-30-48.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО АГАУ
Автореферат разослан «_10_» __ноября__2009 года.
Ученый секретарь
диссертационного совета:
доктор ветеринарных наук
профессор П.И. Барышников
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. У большинства исследователей не вызывает сомнения тот факт, что у многих видов сельскохозяйственных и диких животных постоянным местом обитания Actinomyces bovis являются слизистая ротовой полости, а Fusobacterium necrophorum и Clostridium perfringens - содержимое желудочно-кишечного тракта (Frost B.M., 1940; Балабанов В.А., 1971; Самоловов А.А., 1986, Нестеров И.А., 1999; Луницын В.Г., 2007). Нарушение технологии содержания и кормления животных способствует повышению вирулентности условно-патогенной микрофлоры, появлению новых заболеваний, протекающих скрытно, атипично и в ассоциации, из-за чего затруднена их диагностика (Белоусов В.И., 1999). Появление патологии животных нужно рассматривать с новых позиций, как влияние полиэтиологических факторов, изменяющих соотношения в сложном макроорганизме, в котором уже по-новому проявляет свое действие условно-патогенная и сапрофитная микрофлора (Сулейманов С.М., 1986). Комплексное, целенаправленное и планомерное изучение конкретных ассоциаций инфекций, находящихся на разных уровнях структурно-функциональной организации, позволяет глубже понять тайны паразитизма, своевременно поставить правильный диагноз и провести лечебно-профилактические мероприятия (Павловский Е.Н., 1955; Панасюк Д.И., 1994). По мнению А.В. Жарова (2003), несмотря на широкое разнообразие современных объектов и методов исследования в научно-практической деятельности ветеринарных специалистов, не потеряли своего значения клинико-морфологическое направление и комплексная, с учетом возможностей и удельного веса каждого метода, диагностика болезней животных при первых случаях их гибели, а также убитых с диагностической целью, обеспечивающая в большинстве случаев постановку диагноза с высокой степенью достоверности. На это же также указывает В.Г Луницын (2009), отмечая, что клинико-морфологическая диагностика имеет первостепенное значение при инфекционных болезнях пантовых оленей в виду того, что они содержатся в парках с пересеченной местностью, в несколько сотен гектаров, где весьма трудно обнаружить больное животное, а при обнаружении сложно использовать прижизненные методы диагностики из-за их дикости. В результате в большинстве случаев больных оленей находят погибшими. У пантовых оленей, в отличие от других видов сельскохозяйственных животных, в более ранние сроки после гибели начинаются процессы аутолиза, и морфологический метод исследования позволяет дифференцировать их от прижизненных патологических процессов. Поэтому целесообразность изучения этиологической структуры, клинической картины и патоморфологических изменений совместного течения факторных инфекционных болезней маралов имеет большую диагностическую ценность и актуальность в современных условиях ведения отрасли.
Цели и задачи исследования: Цель исследований – изучить этиологическую структуру, клиническую картину и патоморфологические изменения при ассоциативном течении факторных инфекционных болезней маралов. Для достижения данной цели определены следующие задачи:
- изучить свойства возбудителей некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии изолированных от маралов;
- описать клинические признаки совместного течения некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов;
- исследовать патоморфологические изменения при совместном проявлении некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов.
Научная новизна. Впервые у маралов изучено ассоциативное течение некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии. Определены свойства возбудителей, изучены клиническая картина и патологоанатомические изменения совместного проявления вышеназванных болезней.
Практическая значимость. Результаты исследований вошли в методические рекомендации: «Патоморфологическая диагностика инфекционных болезней пантовых оленей». Материалы рассмотрены, одобрены и утверждены ученым советом ГНУ ВНИИПО СО Россельхозакадемии (протокол № 6 от 20 мая 2009 г) и рекомендованы к внедрению в мараловодческих хозяйствах Алтайского края и Республики Алтай, НТС Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (протокол № 3 от 06.08.2009 г).
Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на III Международной научно-практической конференции «Аграрная наука – сельскому хозяйству» (Барнаул, 2008) и Международной научно-практической конференции «Состояние и перспективы обеспечения ветеринарного благополучия Восточной Сибири» посвященной 45-летию ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири СО Россельхозакадемии (Чита, 2008 г.), ученых советах ГНУ ВНИИПО СО Россельхозакадемии (2007-2009 гг.) и НТС Министерства сельского хозяйства Республики Алтай (2009).
Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 7 научных работах, в том числе две в рецензируемых журналах ВАК Минобразования РФ «Ветеринария» и «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», а также в трудах международных конференций. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных программ ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института пантового оленеводства и проведены в соответствии с планом НИР (тема 08.01.08.03).
Основные положения, выносимые на защиту:
- характеристика возбудителей и клиническая картина совместного проявления некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов;
- патологоанатомическая картина ассоциативного течения некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов;
- патогистологические изменения при совместном течении некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии у маралов.
Структура объем и диссертации.
Диссертация изложена на 129 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, материала и методов исследований, результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Иллюстрирована 62 рисунком. Библиографический список включает 150 источников, в том числе 24 иностранных авторов.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал и методы исследований
Работа выполнена в период с 2007 по 2009 гг. в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства СО Россельхозакадемии и в мараловодческом хозяйстве Алтайского края.
Клиническую картину ассоциативного течения некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии изучали непосредственно на маралоферме у естественно больных животных.
Патологоанатомические изменения изучали методом полного вскрытия, органы исследовали по методике М.С. Жакова (1977). Возраст животных определяли по степени стертости резцов на нижней челюсти по методике М.П. Любимова (1955). Вскрытию подвергали павших животных. Всего исследовано 60 маралов, в том числе 53 марала-рогача, 3 сайка и 4 теленка. Вскрытие трупов состояло из наружного и внутреннего осмотра.
Материалом для бактериологических исследований служили патологически измененные участки внутренних органов (легкие, печень, почки, селезенка), сыворотка крови, содержимое кишечника и моча от 60 животных. Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических и патогенных свойств выделенных микроорганизмов осуществляли согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике бактериальных инфекций. Бактериологическое исследование биоматериала проводили согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят ГУВ МСХ СССР от 15.02.84 г. и по лабораторной диагностике некробактериоза ГУВ Госагропрома СССР от 01.06.87 г. Диагностику актиномикоза проводили согласно определителю М.А. Сидорова и др. (1995). В результате бактериологических исследований был произведен посев 420 проб биоматериала на различные среды и заражены лабораторные животные в количестве 120 белых мышей и 60 морских свинок. Опытные животные содержались в виварии ВНИИПО.
С целью изучения патоморфологических изменений внутренние органы от больных животных подвергали гистологическому исследованию. Материал отбирали из следующих органов: легкие, печень, селезенка, почки, мочевой пузырь, лимфатические узлы (брыжеечные, портальные, средостенные), кроме того, взяты фрагменты рубца, сычуга, тонкого и толстого отделов кишечника. Кусочки иссекали размером 0,5 х 0,5 см и фиксировали в 10 % нейтральном формалине не менее 24 часов. Материал обезвоживали в спиртах восходящей концентрации с последующей заливкой в парафин.
Гистологические срезы изготавливали на санном микротоме МС-2, толщиной 3-5 мкм, окрашивали общепринятым обзорным методом окраски – сочетание гематоксилина с эозином. Всего приготовлено 2340 гистосрезов. Изучение и описание препаратов осуществляли при помощи австрийского тринокуляра МС – 300. Микрофотографии получены при помощи выше указанного микроскопа, цифровой профессиональной цветной камеры САМ V–400/1,3 H через адаптер. Макросъемка осуществлялась цифровым фотоаппаратом.
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Характеристика возбудителей некробактериоза, актиномикоза и инфекционной анаэробной энтеротоксемии выделенных от маралов
В результате бактериологических исследований биоматериала от 60 маралов в 15 случаях был выделен возбудитель актиномикоза Actinomyces bovis. Так, 5 случаях он был изолирован только из печени, а в 10 - из печени и легких. Выделенные культуры на плотной питательной среде в первые сутки инкубирования образовывали нитевидные микроколонии, а на 2 сутки - макроколонии 2-3 мм, выпуклые, с волнистыми краями, непрозрачные, белые, гладкие. В столбике полужидкого агара рост выявлялся в виде крупинок до 2 мм в диаметре. При микроскопии мазков обнаруживали грамположительные мелкие палочки и кокки. Изолированные штаммы не образовывали каталазу, цитохромоксидазу, не редуцировали нитраты и нитриты. Продуцировали Н2S, не гидролизовали ксантин, тирозин, крахмал, лецитин, гиппурат, гуанин, желатин и казеин. В молоке образовывали кислоту, пептонизации нет. Образовывали ДНК-азу. Не диаминировали аргинин, аланин и расщепляли сахарозу.
При посеве биоматериала на среду Китт-Тароцци во всех пробах на 2 сутки наблюдали равномерное помутнение среды и газообразование. Микроскопия мазков показала наличие 60% грамотрицательных нитевидных палочек и 40% грамположительных коротких толстых палочек с обрубленными концами.
Зараженные лабораторные животные, 120 белых мышей и 60 морских свинок, кроме животных зараженных суспензией из мочи, погибали в течение 10 суток после введения культур микроорганизмов. Патологоанатомические изменения у зараженных животных характеризовались образованием некроза на месте введения, увеличением селезенки в 2-4 раза, содержимое кишечника светло-зеленого цвета с усиленным газообразованием. От павших лабораторных животных из участков некроза и внутренних органов делали высевы на среду Китт-Тароцци, для выделения чистой культуры. В результате было идентифицировано два вида микроорганизмов Clostridium perfringens и Fusobacterium necrophorum. Морские свинки и белые мыши зараженные суспензией мочи были подвергнуты эвтаназии на 15 сутки, видимых патологоанатомических изменений не установлено, а при посеве биоматериала на питательные среды рост отсутствовал.
С целью определения патогенных свойств выделенными культурами заражали белых мышей. Использовали 16-ти часовые культуры, выращенные на среде Китта-Тароцци.
Культуру Clostridium perfringens вводили лабораторным животным внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл. Животные пали в первые 12 часов. При вскрытии наблюдали, что мышечная ткань как бы "вареная", легко отделяется от кожного покрова, а содержимое кишечника светло-зеленого цвета с усиленным газообразованием. Изолированные штаммы Clostridium perfringens на основании выделения чистой культуры и определения ее токсигенных свойств в реакции нейтрализации были отнесены к типу D и представляли собой при микроскопии мазков грамположительные короткие толстые палочки с обрубленными концами с капсулами. На среде Китт-Тароцци с содержанием глюкозы выделенные штаммы бурно образовывали газ, рост характеризовался равномерным помутнением среды. На глюкозо-кровянном агаре образовывали крупные, круглые, гладкие, сочные, куполообразные, с ровными краями, гладкой блестящей поверхностью колонии, окруженные зоной гемолиза. При засеве культур в молоко оно через 6-12 часов инкубации свертывалось с образованием губчатого осадка казеина и отделением прозрачной жидкости. В одних случаях изолированные штаммы разжижали желатину, а в других нет.
Культуры Fusobacterium necrophorum вводили лабораторным животным подкожно в области крестца в дозе 1 мл. Все зараженные животные пали в течение 15 дней. На месте введения развивались характерные некротические очаги. При микроскопии мазков-отпечатков с участков некроза обнаруживались длинные нитевидные, грамотрицательные палочки, часто с интенсивно окрашенными круглыми зернами. При изучении культуральных свойств выделенных штаммов Fusobacterium necrophorum на кровяном агаре Цейсслера через 2-3 суток после посева отмечали рост в виде росинок, а в дальнейшем колонии увеличивались до 3 мм в диаметре и имели хорошо очерченные формы и края. На среде Китт-Тароцци через 24 часа обнаруживался слабый едва заметный рост, характеризующийся слабым помутнением, газообразованием и появлением специфического запаха на 3-5-е сутки инкубирования. Все изученные штаммы образовывали индол и сероводород, но не разжижали желатин и не свертывали молоко. Некоторые штаммы ферментировали с образованием кислоты и газа сахарозу, мальтозу, левулезу, арабинозу, глюкозу и галактозу.
При посеве биоматериала на МПБ и МПА был выявлен рост разнообразной микрофлоры, которая при пересеве на кровяной агар Цейслера и биопробе на лабораторных животных не обладала патогенными свойствами и соответственно не имеет этиологического значения.
В результате бактериологического исследования биоматериала от 60 маралов, в ассоциации в 25% случаев были изолированы патогенные микроорганизмы Cl.perfringens, Fusobacterium necrophorum и Actinomyces bovis и в 100% случаев - Cl.perfringens и Fusobacterium necrophorum. Биологическая характеристика выделенных микробных культур имела показатели характерные для классических вариантов этих микроорганизмов.
2.2.2 Клинические признаки
При изучении клинических признаков отмечали, что больные животные отделялись от стада, были угнетены, шерсть взъерошена, живот подтянут. У некоторых животных наблюдались нервные явления, которые проявлялись в виде нарушения координации движения. Маралы становились безучастными к окружающему миру, подолгу лежали на одном месте с опущенной головой, при попытке встать - падали.
В начальной стадии болезни фекалии зеленовато-коричневого цвета, сформированы с примесью слизи и крови. В дальнейшем, по мере прогрессирования патологического процесса, происходило их разжижение, а количество слизи и крови увеличивалось. Характерным признаком заболевания является своеобразная вынужденная поза, принимаемая животными в большинстве случаев. Рогачи отставляют задние конечности назад, прогибаются и стоят в такой позе в среднем 10-30 минут. Затем в течение непродолжительного времени поедают прошлогоднюю траву и снова принимают вынужденную позу. При приближении человека неохотно отходят на несколько метров, проявляют признаки агрессии, скрипят зубами. Некоторые животные подпускают человека на близкое расстояние, скрипят зубами, но не уходят. Для мочеиспускания принимали характерную позу, тужатся, стонут, но мочеиспускания при этом не происходит. Животные ненадолго ложатся, лежат, протянув ноги в стороны, затем встают и вновь принимают вынужденную позу. Наружные покровы вокруг анального отверстия замараны фекалиями, слизью и кровью, хвост постоянно приподнят, а анальное отверстие приоткрыто.
Продолжительность болезни в среднем составляет 4-10 дней с момента появления видимых клинических признаков. В состоянии агонии животные лежат, не реагируют на внешние раздражители, дышат часто, стонут.
Таким образом наиболее характерными видимыми клиническими признаками ассоциативного течения явились своеобразная вынужденная поза, нарушение акта мочеиспускания и процесса пищеварения.
2.2.3. Патологоанатомическая картина
