Аллергические реакции на туберкулин в северном таджикистане

На правах рукописи

Шарипов Абдугани

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ

РЕАКЦИИ НА ТУБЕРКУЛИН

В СЕВЕРНОМ ТАДЖИКИСТАНЕ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

А В Т О Р Е Ф Е Р А Т

диссертации на соискание ученой

степени кандидата ветеринарных наук

Душанбе-2006

Работа выполнена в лаборатории по изучению туберкулеза Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института и животноводческих хозяйствах Северного Таджикистана (Согдийская область).

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, Хабибов А.Х.,

доктор ветеринарных наук,

профессор, академик ТАСХН Сатторов И.Т.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Муминов А.М.,

кандидат ветеринарных наук,

доцент Абдуллоев У.

Ведущая организация: Среднеазиатский ящурный институт.

Защита диссертации состоится 29 декабря 2006 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 050.001.01 при Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43.

Автореферат разослан «28» ноября 2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Турдиев Ш. А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Успешное решение задач, поставленных Правительством Республики Таджикистан в области животноводства во многом зависит от разработки эффективных мер борьбы с наиболее опасными заразными болезнями сельскохозяйственных животных, в том числе и туберкулезом, который до настоящего времени продолжает наносить огромный экономический ущерб животноводству и представляет серьезную опасность здоровью населения.

В системе мер профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота важное значение имеет своевременная и эффективная диагностика болезни. С этой целью широко применяется внутрикожная, туберкулиновая проба, по результатам которой судят о благополучии хозяйства по туберкулезу. Однако в последние годы в благополучных по туберкулезу стадах нередко выявляют положительно реагирующих на туберкулин животных, у которых не обнаруживают характерных для туберкулёза изменений в органах и тканях, и бактериологическим исследованием патологического материала возбудителя туберкулёза не выделяют, а выделяют атипичные микобактерии. Это в значительной мере затрудняет правильную оценку эпизоотической ситуации по туберкулёзу в хозяйствах, что приводит к большим экономическим потерям в животноводстве из-за неоправданного убоя сенсибилизированного к туберкулину скота.

Изучением атипичных микобактерий занимались многие ученые (М.К. Юсковец,1953; О.В.Мартма, 1971; В.Е.Щуревский, Н.П.Овдиенко, А.М.Кадочкин, 1979; А.Н.Шаров, 1980, Ю.Я. Кассич 1984; А.Х.Найманов, Н. Я. Ярбаев, 1993;, А.Х.Хабибов, 2000; Д.М.Мирзоев, Н.Хасанов. 2001). Однако до настоящего времени нет полных данных о распространении видов этих микобактерий в различных регионах страны, а методы их идентификации трудно выполнимы в условиях производственных лабораторий. Поэтому изучение распространения атипичных микобактерий в различных зонах Таджикистана, эпизоотическое значение этих микобактерий для крупного рогатого скота, а также разработка схемы комплексной дифференциальной диагностики туберкулёза являются весьма актуальными.

Цель работы: Изучить роль атипичных микобактерий в возникновении неспецифических аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота и изыскать эффективные средства и методов дифференциальной диагностики.

Задачи исследований:

1. Изучить природу реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах Северного Таджикистана.
2. Выделить от положительно реагирующих на туберкулин животных и из объектов внешней среды культуры атипичных микобактерий, определить их видовой состав и роль в этиологии туберкулеза.
3. Разработать способ получения туберкулина из местных штаммов.
4. Изучить бактериостатическую и бактерицидную активность Bac. Subtilis в отношении штаммов микобактерий туберкулёза и атипичных микобактерий.
5. Определить влияние препарата Субтилбен на проявление неспецифических аллергических реакций на туберкулин.

Научная новизна. В результате проведенных исследований, нами определена природа аллергических реакций на туберкулин в восьми благополучных по туберкулезу хозяйствах Северного Таджикистана.

Установлено, что в 62,5% этих хозяйств сенсибилизацию животных к туберкулину обуславливают атипичные микобактерии пяти видов, которые широко распространены в объектах внешней среды обитания животных и не представляют эпизоотической опасности для крупного рогатого скота, определена бактериостатическая активность препарата Субтилбен на микобактерии туберкулеза и атипичные микобактерии, а также сроки угасания и выпадения неспецифических аллергических реакций на туберкулин.

Практическая ценность: На основании проведенных исследований разработаны:

- инструкция по изготовлению и контролю туберкулина (утв. ГУВ МСХ РТ 18.01.2003г.);

- технические условия на туберкулин (утв. ГУВ МСХ РТ 18.01.2003г.);

- наставление по применению туберкулина для аллергической диагностики туберкулёза у крупного рогатого скота (утв. ГУВ МСХ РТ, 18.01.2003г.).

- схема комплексной дифференциальной диагностики туберкулёза крупного рогатого скота. (утв. ГУВ МСХ РТ, 27. 10.2006г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- выяснение причин неспецифических аллергических реакций на туберкулин;

-результаты изучения активности и специфичности туберкулина из местных штаммов;

- результаты изучения бактериостатической и бактерицидной активности препарата Субтилбен на штаммы микобактерий и атипичных микобактерий и его влияние на неспецифические аллергические реакции на туберкулин.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института (Душанбе, 2001-2006 гг.), на международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию Таджикского НИВИ (Душанбе, 22.11.03. г.), на Республиканских и областных семинарах-совещаниях, (2001-2006 гг.), на Республиканской научно-практической конференции, посвященной 15-летию независимости Республики Таджикистан (Душанбе, 30-31.03.2006г.).

Публикации. По результатам исследований опубликованы 6 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложение. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 3 рисунками. Список литературы включает 158 наименований.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2001-2006 гг. в лаборатории по изучению туберкулеза Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института и животноводческих хозяйствах Северного Таджикистана (Согдийская область).

Изучение эпизоотической обстановки по туберкулезу в хозяйствах области за период с 1993 по 2006гг. проводили путем анализа материалов Государственной ветеринарной отчетности и собственных исследований.

Для аллергической диагностики у крупного рогатого скота применяли ППД-туберкулин для млекопитающих, КАМ и эхиноаллерген.

Введение туберкулина крупному рогатому скоту проводили согласно действующего «Наставления по диагностике туберкулеза животных и птиц» от 25.02.1985 года Утвержденного ГУВ Госагропрома СССР и «Наставления по проведению симультанной аллергической пробы с применением туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза у животных» от 04.07.1980 года и нормативно-технической документации (инструкция по изготовлению и контролю, технические условия, наставление по применению туберкулина для аллергической диагностики туберкулёза у крупного рогатого скота) (утв. ГУВ МСХ РТ, 18.01.2003г.).

Во всех хозяйствах области за 1993-2006 годы проведено 49056 аллергических исследования, в том числе в восьми благополучным по туберкулезу хозяйствах нами проведено 6696 исследований туберкулином для млекопитающих и 6659 симультанной аллергической пробой с применением туберкулина для млекопитающих, КАМ и эхиноаллергена.

Из 279 реагирующих на туберкулин животных 37 было подвергнуто диагностическому убою.

Для изучения обсемененности микобактериями туберкулеза объектов внешней среды взято для бактериологического исследования 27 проб воды, 64 - кормов, 14 - почвы и 31 - навозной массы.

Материал от 37 убитого реагирующего скота и 136 объектов внешней среды исследовали бактериоскопическим, культуральным и биологическим методами.

Для изучения биологических свойств во всех опытах использовано 112 кроликов, 260 морских свинок и 24 кур.

Для бактериоскопического исследования материала из органов убитых животных и объектов внешней среды использовали метод Циля-Нильсена. Всего просмотрено более 3500 мазков.

Обработку патологического материала и проб кормов проводили по методике А.П.Аликаевой (1940, 1979), а проб почвы и фекалия по методике УНИИЭВ (Ю.Я.Кассич, П.М.Тихонов, 1984).

У выделенных первичных культур изучали и описывали свойства согласно «Методических указаний по диагностике туберкулеза (1976)», в первой адаптивной генерации.

Исследование на пигментобразование проводили по (I.Cubica 1973). У всех выделенных культур микобактерий определяли следующие биохимические свойства: каталазную (I.Middlebrook, 1954) и формамидазную (H.Nagajama 1961) в модификации М.М.Дыхно (1964) активности, реакцию с теллуритом (I.Hileburn, 1969), гидролиз «Твин-80» (I.Wayne, 1967).

В целях дифференциации вирулентных микобактерий туберкулеза от атипичных проводили изучение их роста на среде Левенштейна-Йенсена с содержанием салицилата натрия (M.Teukamuro, 1962), толерантность к 5% хлористому натрию (D.Kestle, 1967) и изучение патогенных свойств на лабораторных животных.

С целью определения устойчивости выделенных культур микобактерий к туберкулостатикам изучали их лекарственную чувствительность к стрептомицину и тубазиду («Методические указания по диагностике туберкулеза, 1976»).

Суспензию исследуемого материала вводили подкожно и интратестикулярно морским свинкам, внутривенно кроликам в краевую вену уха и курам в подкрыльцевую вену.

Нативным материалом из фекалий, воды и кормов заражали только морских свинок.

Для заражения лабораторных животных выделенными культурами микобактерий, как патогенными, так и атипичными готовили взвесь культуры в концентрации 1,0 млрд/м.к. Лабораторных животных заражали взвесями так же, как и при заражении, первичным материалом.

В опытах в качестве пробиотика использовали Субтилбен (патент TJ 391, 2004) представляющий собой взвесь штаммов Bacillus subtilis, полученный из лаборатории микробиотехнологии Таджикского аграрного университета.

Эффективность препарата Субтилбен изучали по сравнению с тубазидом.

Применение препарата Субтилбен проводился по следующей схеме:

а) Перорально по 0,2 г порошка на 1 кг живого веса 1 раз в сутки в течении 14 дней и в форме суспензии интратрахеально 10 мл на гол. 1 раз в 48 часов в течении 14 дней.

б) спустя 60, 120, 180, 240 дней после каждого аллергического исследования животных повторяли дачу препарата Субтилбен в тех же дозах.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Изучение природы реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах

Северного Таджикистана (Согдийская область)

Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Северном Таджикистане (Согдийская область) значительно благоприятнее, чем в других областях республики. На начало 1990г. здесь было 3 неблагополучных пункта, которые к концу года были оздоровлены.

В течение 1993-2006гг. по области зарегистрированы 6 неблагополучных пунктов по туберкулезу крупного рогатого скота, которые приведены далее.

1. В марте 1993 г. на МТФ с-зе им. Айни Зафарабадского района в результате исследования 1242 голов крупного рогатого скота было выявлено 29 голов коров, положительно реагирующих на туберкулин.

2. В апреле 1995 г. на МТФ А/О «Дегмай» Дж. Расуловского района исследовано всего 2621 голов крупного рогатого скота, в результате выявлено 13 голов положительно реагирующих на туберкулин.

3. В декабре 1998 г. в МТФ А/О «Йори» Пенджикентского района исследовано 600 голов крупного рогатого скота, и выявлено 7 голов, положительно реагирующих на туберкулин, в том числе 2 коровы.

4. В декабре 1998 г. на МТФ А/О «Ленинград» Дж. Расуловского района исследовано всего 574 головы крупного рогатого скота, в результате было выявлено 4 коровы, положительно реагирующих на туберкулин.

5. В декабре 1998 г. в МТФ с-за Чапаев Истаравшанского района исследовано всего 269 голов крупного рогатого скота, и выявлено 4 коровы, положительно реагирующих на туберкулин.

При контрольно-диагностическом убое положительно реагировавших на туберкулин животных этих хозяйств были обнаружены характерные для туберкулеза изменения, а при бактериологическом исследовании патматериала выделены микобактерии туберкулеза бычьего вида. После проведения оздоровительных мероприятий по туберкулезу, получения 2-х кратного отрицательного результата и постановки 2-х кратного профилактического контроля (через каждые 3 месяца) эти хозяйства были оздоровлены от туберкулеза.

6. В апреле 2006г. в производственном кооперативе им. А. Саматова Дж. Расуловского района исследовано всего 2311 голов крупного рогатого скота в результате выявлено 11 голов, в том числе 9 коров, положительно реагирующих на туберкулин. Согласно результатов лабораторного исследования эксп. №1,3,4,5 от 09.09.2006 года и Решением Хукумата Дж. Расуловского района от 28 сентября 2006 года было наложено ограничение по туберкулезу крупного рогатого скота. В настоящее время проводятся оздоровительные мероприятия согласно инструкции и составленного плана работы по борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота.

На 01.11.2006 года в Согдийской области имеется один неблагополучный по туберкулезу пункт (производственный кооператив им. А.Саматова Дж. Расуловского района).

Анализ аллергических исследований в динамике за 1993-2006гг. указывает, что за этот период процент выявления реагирующих на туберкулин животных достигал наибольшего показателя в 1993-1998гг.

Реакции у животных непостоянны, отмечаются на протяжении года то у одних, то у других. В некоторых фермах реагирующие животные выявлялись в течение длительного времени (2-3 года и более), а в других они уменьшались, выпадали, а затем появлялись вновь.

Результаты исследований крупного рогатого скота симультанной аллергической пробой указывают, что какой-либо определенной зависимости между выявлением на КАМ и туберкулином и сезоном года не отмечается.

Проведенные симультанные аллергические исследования в одних хозяйствах указывают предпочтительно на неспецифическую сенсибилизацию, а в других на неопределенный результат. Однако при убое реагирующих животных, как и в первом, так и во втором хозяйствах туберкулез не подтверждается, а при исследовании материала от убитых животных в отдельных случаях выделяют атипичные микобактерии.

Следует отметить, что при патологоанатомическом осмотре туш животных и органов, у которых были выделены атипичные микобактерии, изменений, характерных для туберкулеза не обнаруживали. Однако в отдельных из них отмечали видимые изменения в виде гиперплязии лимфоузлов с кровоизлияниями, а также наличие в лимфоузлах, особенно в заглоточных, очажков с гноеобразной массой желтоватого цвета.

Нами, кроме выяснения этиологии возникновения реакций у животных на внутрикожное введение туберкулина при отсутствии у них при убое характерных для туберкулеза изменений, ставилась задача выделить из материала убитых, с диагностической целью животных и объектов внешней среды хозяйств, в которых отмечаются массовые выявления реагирующих, культуры микобактерий и определить их видовую принадлежность, сенсибилизирующие свойства и патогенность для лабораторных животных.

Материал для бактериологического исследования от убитых животных отбирали во всех благополучных по туберкулезу хозяйствах области, в которых обнаруживались реагирующие на туберкулин животные. Кроме того отбирали пробы из объектов внешней среды.

Результаты проведенных исследований показывают, что туберкулез крупного рогатого скота на территории Северного Таджикистана распространен неравномерно. Наибольшее число животных, положительно реагирующих на туберкулин выявлено в 1993-1998 годы.

3.2. Выделение от положительно реагирующих на туберкулин животных и из объектов внешней среды культуры атипичных микобактерий и определение их видового состава, установление их роли в этиологии туберкулеза

Часто в благополучных по туберкулезу хозяйствах при плановом обследовании на туберкулез выявляют животных, положительно реагирующих на туберкулин. При их вскрытии характерных для туберкулеза изменений не обнаруживают, при этом диагностируют эхинококкоз, фасциолез. При бактериологическом исследовании патматериала микобактерии туберкулеза также не обнаруживаются, иногда выделяются атипичные микобактерии.

Для выяснения причин парааллергических и псевдоаллергических реакций на туберкулин в 8 благополучных по туберкулезу хозяйствах Исфаринского, Дж. Расуловского, Пенджикентского, Канибадамского, Спитаменского, Б. Гафуровского районов Согдийской области Республики Таджикистан провели симультанную аллергическую пробу с применением ППД-туберкулина для млекопитающих, КАМ и эхиноаллергена.

ППД-туберкулин для млекопитающих и КАМ вводили внутрикожно в дозе 0,2 мл в среднюю область шеи. Реакции учитывали через 72 часа положительно реагирующими считали тех животных, у которых кожная складка на месте введения аллергена была увеличена на 3 мм и более.

Эхиноаллерген вводили в подхвостовую кожную складку в дозе 0,5 мл, учет реакции проводили через 2 часа. Реакцию считали положительной если толщина подхвостовой кожной складки превосходила в 2 раза исходные размеры.

Достоверность различий в интенсивности реакций на все аллергены определяли согласно наставлению по диагностике туберкулеза животных (1986) и методическим указаниям по применению эхиноаллергена (1990).

После выявления животных, положительно реагирующих на все аллергены (на КАМ, а также на ППД-туберкулин и эхиноаллерген в отдельности), с целью уточнения диагноза на туберкулез отбирали животных для контрольно-диагностического убоя и бактериологического исследования.