Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки желудка собак в зависимости от способов лечения язвенной болезни в эксперименте

На правах рукописи

Чубин Алексей Николаевич

МОРФОфункциональная характеристика слизистой оболочки желудка собак в зависимости от способов лечения язвенной болезни в эксперименте

16.00.02 – патология, онкология и морфология животных

автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Барнаул - 2008

Работа выполнена в ФГОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет.

Научный консультант:

доктор ветеринарных наук,

профессор Жуков Владимир Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук,

профессор Малофеев Юрий Михайлович

доктор ветеринарных наук,

профессор Кудряшов Анатолий Алексеевич

доктор ветеринарных наук,

профессор Герунов Владимир Иванович

Ведущая организация:

Бурятская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится 20 июня 2008 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д220.002.02 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу:656922, Алтайский край, г. Барнаул, ул. Попова,276, ИВМ АГАУ, т/факс (3852)31-06-36

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан «____» ____________2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор П.И. Барышников

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Язвенная болезнь желудка встречается практически у всех видов животных. У свиней язвы желудка регистрируются, не зависимо от породы и пола (Шалимов В.Г., Жаров А.В., 1995; Коробов А.В., 1998; 2002). Данная патология в свиноводстве диагностируется в 40-50% случаев от общего количества выбракованных животных. У поросят - отъемышей и подсвинков встречаемость язв кардиальной и фундальной частей желудка составляет 45,5 % (Лаковников Е.А., 1985; 1988). У собак язва желудка стала выявляться гораздо чаще после того, как эндоскопическое исследование стало широко распространенным методом диагностики (Ниманд Х.Г., Сутер П.Ф., 1998; Садовникова Н.Ю., Макаров В.В., 2000; Садовникова Н.Ю., Собещанская М.О., Лебедев А.В., 2001). История изучения данного заболевания составляет довольно длительный период. Так, В.И. Изментьев в 1901 году описал «круглую» язву желудка у собаки, а Н.Н. Мари в книге «Основы патологической анатомии домашних животных» (1906) осветил перечень причин и патологоанатомическую картину пептической язвы желудка. Не смотря на такую богатую историю изучения язвенной болезни и даже с учетом больших возможностей современной терапии, заболевание не только часто рецидивирует, но и сопровождается развитием опасных, порой смертельных, осложнений. Частота рецидивов заболевания достигает 31-38% (Гребенев А.Л., Голачевская B.C., Куртяну Б.Н., 1985; Бредихина Н.А., Бендиков Э.А., Сильверстова СЮ., 1990; Галанин С.Н., Сергеев В.Н., 1992; Гончаров Н.С., Докторов К.Н., 1993; Абрамов С.С, Коваленок Ю.К.;1997; Berg C.L., Gollan J.L., 1994).

В последние годы в ветеринарной практике и отечественной медицине наметилась тенденция к более широкому использованию методов нетрадиционной терапии, среди которых первое место по праву занимает лазерная терапия в сочетании с воздействием постоянного магнитного поля. Экспериментами и клиническими исследованиями установлено, что свет лазера снижает воспалительную реакцию за счет укорочения экссудативных и пролиферативных фаз воспаления, стимулирует регенеративную способность тканей, в частности, стенки желудочно-кишечного тракта (Балалыкин А.С., Терехова Т.В., Лапшина С.В., 1989; Бурный Н.А., Федин В.П, Башир-Заде Т.А., и др., 1990; Данилов Н.М., Марченко Н.С., 1991; Аркина А.И., 1992; Бойко В.Н., 1993; Никитин Р.С, Туманов Н.М., 1995; Циммерман Я.С., Попова Н.И., 2000; Новицкий В.А., Кузнецов В.В., 1996; Чайда А.А., Ефимова Е.Г., 2002; Ефимова Е.Г., Лутай А.В., 2001; Devis G.L., 1995).

В последние годы в клинической практике все большую популярность получают препараты, обладающие сорбционно-детоксикационными свойствами энтеросорбентов (Великанов В.В., 2002). Данные препараты не подвергаются гидролизу в желудочно-кишечном тракте, обладают обволакивающим эффектом, предохраняют клеточную поверхность от внешних механических и химических агрессивных воздействий (Мамаев И.А. и соавт., 2000).

Включение в комплекстную терапию язвенной болезни иммуномодулятора положительно влияет на клиническое течение болезни, способствует более быстрому купированию субъективных проявлений болезни, раним срокам рубцевания язвенного дефекта, более длительной стойкой ремиссии (Ващенко В.М., Успенский В.М., Семенов В.В. и др., 1983, Циммерман Я.С. и др., 1998).

Однако эти исследования являются клиническими, без глубокого изучения морфологии и функций пищеварительных органов.

Нами выдвинуто предположение о том, что сочетание воздействия иммуномодулятора, энтеросорбента и лазерного излучения (ЛИ) в комплексе с постоянным магнитным полем (ПМП) может оказать качественно другое воздействие на морфофункциональное состояние здоровых и больных язвенной болезнью желудка животных.

Настоящая работа является составной частью комплексной программы исследований госбюджетной тематики кафедры патоморфофизиологии, терапии, акушерства и хирургии института ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета «Ветеринарное благополучие» (номер государственной регистрации (0.186.0060.935) и выполнена самостоятельно.

Цель исследования. Изучить морфологическую и секреторную реакции слизистой оболочки желудка на раздельное и сочетанное воздействие энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в постоянном магнитном поле при экспериментальной язвенной болезни.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Исследовать раздельное и сочетанное влияние энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в постоянном магнитном поле на секреторную функцию желудочных желез здоровых животных.

2. Изучить изменение секреторной реакции желудочных желез при экспериментальной язвенной болезни желудка у собак.

3. Исследовать раздельное и сочетанное влияние энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в ПМП на секреторную функцию желудочных желез при экспериментальной язвенной болезни.

4. Изучить морфологию микроциркуляции и лимфоток в слизистой оболочке желудка собак при сочетанном лечении энтеросгелем, риботаном, и лазерным излучением в ПМП экспериментальной язвенной болезни желудка.

5. Изучить морфологический состав тканевых лейкоцитов в слизистой оболочке желудка при сочетанном лечении энтеросгелем, риботаном и лазерным излучением в ПМП экспериментальной язвенной болезни у собак.

6. Изучить раздельное и сочетанное влияние энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в ПМП на морфологию язвенного дефекта, периульцерозного инфильтрата и морфофункциональное состояние стенки желудка.

Научная новизна. Всесторонне изучено состояние клинического статуса и патоморфологические и функциональные изменения в стенке желудка у собак с экспериментально вызванной хронической язвой желудка. Впервые изучена динамика морфологической и секреторной реакций стенки желудка на раздельное и сочетанное воздействие энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в ПМП при экспериментальной язвенной болезни желудка. Впервые изучена цитограмма собственной пластинки слизистой оболочки желудка при раздельном и сочетанном воздействии испытуемыми факторами. Впервые изучены гемоциркуляция и лимфоток слизистой оболочки желудка при различных способах лечения язвенной болезни у собак.

Теоретическая и практическая значимость работы. Выявленные особенности клинического статуса и гистоморфологические проявления хронической язвы желудка углубляют и расширяют научные представления о динамике структурных изменений в стенке желудка при язвенной болезни.

Полученные сведения использованы:

• в учебном процессе для чтения лекций и проведения практических занятий на ветеринарных факультетах высших учебных заведений, факультетах повышения квалификации и др.;
• при написании соответствующих разделов и справочных руководств по незаразной патологии желудочно-кишечного тракта;
• в практике при усовершенствовании клинической и морфологической диагностики язвенной болезни желудка. Предложенная комплексная терапия может использоваться как самостоятельный метод лечения при язвенной болезни желудка у собак.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: тематической научной конференции института ветеринарной медицины Дальневосточного государственного аграрного университета (Благовещенск, 2002); международной научной конференции, посвященной 40-летию института ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета (Барнаул, 2002); международной научной конференции, посвященной 60-летию факультета ветеринарной медицины Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии (Ульяновск, 2003); международной научной конференции, посвященной 90-летию профессора В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003); четвертой научно-практической региональной конференции (Благовещенск, 2003); пятой региональной научно-практической конференции (Благовещенск, 2004); международной научной конференции, посвященной 100 - летию со дня рождения профессора Суетина В.Я. (Улан-Удэ, 2004); международном съезде терапевтов, диагностов (Барнаул, 2005); международной научно-производственной конференции, посвященной 100 – летию со дня рождения профессора Авророва А.А.( Воронеж, 2006);

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 43 печатных работ. Из них 1 монография, 9 статей в журналах рекомендуемых ВАК для публикаций материалов докторских диссертаций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, список использованной литературы и приложения. Работа изложена на 285 странице компьютерного текста (без приложения) и иллюстрирована 42 таблицами, 105 рисунками. Список литературы включает 446 источников, из них иностранных 116.

Внедрение результатов исследований. Полученные данные используются в учебной и научной работе кафедр: терапии и клинической диагностики Бурятской государственной сельскохозяйственной академии; зоологии анатомии и физиологии Бурятского государственного университета; патологической анатомии и гистологии УО Витебской ордена «Знака почета» государственной академии ветеринарной медицины; кафедра анатомии и патологической анатомии Уральской государственной сельскохозяйственной академии; патологической анатомии и хирургии, анатомии и физиологии сельскохозяйственных животных Красноярского государственного аграрного университета; зоогигиены, основ ветеринарии и морфологии Курганской государственной сельскохозяйственной академии; патологической анатомии института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета; биологии и ветеринарии Ярославской государственной сельскохозяйственной академии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Раздельное воздействие энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в ПМП на секреторную функцию желудочных желез в норме показало, что энтеросгель обладает угнетающим действием, риботан не изменяет секреторную функцию главных и париетальных клеток, лазерное излучение в ПМП сопровождается тенденцией к снижению изучаемых показателей, а их сочетанное применение проявляется угнетением секреции желудочных желез в течение всего наблюдения.

2. При экспериментальной язвенной болезни желудка выявлено угнетающее действие энтеросгеля и лазерное излучение в ПМП на секреторные элементы желудка, риботан не изменяет секреторную функцию желудка. Сочетанное воздействие энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в постоянном магнитном поле нормализует секреторную функцию желез при экспериментальной язвенной болезни желудка.

3. Разработанный метод противоязвенной терапии способствует улучшению микроциркуляции и лимфотока слизистой оболочки желудка, что сопровождается уменьшением острой воспалительной реакции в краях язвы.

4. Сочетанное воздействие энтеросгеля, риботана и лазерного излучения в постоянном магнитном поле способствует эффективному, полному заживлению язвы желудка с достижением стадии розового рубца, исчезновению явлений периульцерозного гастрита.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Характеристика условий выполнения опытов

Исследования проводили в лабораториях института ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета. Секреторную функцию желудка – в лаборатории кафедры физиологии и зоологии. Морфологические исследования при экспериментальной патологии – в лаборатории кафедры патомофо-физиологии, терапии, акушерства и хирургии.

Объектами исследования были беспородные собаки массой 12-15 кг. Животных содержали в благоустроенном виварии института ИВМЗ, оборудованном специальными секциями для каждого вида животных.

Собаки в зависимости от целей и задач исследования распределены на 15 групп по три животных в каждой. Для патогистологических исследований животные были распределены на шесть групп с учетом длительности ЭЯБЖ (8,16,18,20,22 суток) без лечения, и с применением различных методов терапии данного заболевания: первая и вторая – контрольная; третья, четвертая, пятая и шестая – опытные.

Секреторную функцию желудочных желез и биопсийный материал исследовали на фистулированных собаках. У животных хирургически создавали изолированный желудочек по методу Павлова И.П. (Павлов И.П., 1946), с сохраненной нервной связью с пищевым центром. Это позволяло во время экспериментов получать чистый, не контактировавший с кормом, желудочный сок.

Кормили собак два раза в сутки в 7 и 16 часов кашей, сваренной на мясокостном бульоне из размолов зерновых злаков с добавлением соевой муки. Доступ к воде не ограничивали. Выгуливали собак до кормления, дважды в сутки, в это же время осуществляли влажную уборку помещения.

В послеоперационном периоде собак содержали в лаборатории, соблюдая специальную диету. Через сутки после операции животных поили кипяченой водой, в последующие дни постепенно переводили на молоко, через четыре дня в эту смесь добавляли хлеб. На шестой день давали жидкую кашу на мясном бульоне, которую в последующем использовали в качестве экспериментального рациона. К 10-12-ым суткам собак переводили на обычное двухразовое кормление. В этот период их приучали к фиксации в станке и к режиму опыта, одновременно выполняли пробные опыты. Выстраивали кривые секреторной и ферментовыделительной реакции желудочных желез на кормление, исходя из которых принимали решение о готовности собак к экспериментам. На 15-ые сутки моделировали язву желудка антрального отдела путем диатермокоагуляции слизистой оболочки желудка через фиброгастроскоп (OLIMPUS CLE-4U), с последующим введением винкрестина из расчета 0,01мг/кг для стойкой хронизации процесса (Шалимов С.А., 1989).

2. Морфофизиологические методы исследования

2.1. Физиологические методы исследования

Выполнено пять серий опытов на здоровых фистулированных собаках и 5 серий на собаках с экспериментальной язвенной болезнью. Схема исследования во всех сериях была идентична. После 18 часов голодания на животных воздействовали тем или иным изучаемым фактором, фиксировали в станках и в течение первого часа определяли исходный уровень (фон) секреции. Затем собак кормили и исследовали каждую часовую порцию в последующие три часа.

В первой опытной серии, согласно схеме исследования, собакам принудительно выпаивали энтеросгель в дозе 0,2 г на один кг массы животного. Во втором опыте собакам внутримышечно вводили риботан в дозе 2,0 мл на 20 кг массы животного. В третьем опыте собакам область желудка облучали лазером с вентральной поверхности тела от мечевидного отростка в каудальном направлении в четырех зонах по 2 мин в каждой, при частоте 50 Гц и мощности 40-45 МВт. В четвертой серии опытов животным выпаивали энтеросгель, внутримышечно вводили риботан и одновременно облучали область желудка в той же дозе и концентрации. В контрольных исследованиях собак поили дистиллированной водой (0,2 мл/кг) в той же дозе, что и энтеросгель. В пятом опыте моделировали язвенную болезнь. Данная группа служила контролем для животных последующих групп. В шестой, седьмой, восьмой и девятой сериях проводилось лечение экспериментальной язвенной болезни энтеросгелем, риботаном и лазерным излучением в ПМП как раздельно, так и при их сочетании, аналогично предыдущим сериям.

Напряжение секреторной деятельности желудочных желез изучали по объему секретируемого сока и концентрации в нем основных компонентов: свободной соляной кислоты, общего количества кислот и пепсина. Суммарную секрецию этих компонентов определяли умножением их концентрации на объем собранного сока за каждый час опыта.

2.2. Биохимические методы исследования

Свободную соляную кислоту и общую кислотность желудочного сока определяли методом титрования 0,1 нормальным раствором едкого натра в присутствии индикаторов диметиламидоазобензола и фенолфталеина. Концентрацию кислот выражали в мэкв/л.

Пептическую активность сока определяли методом Н.П. Пятницкого (Лея Ю.Я., 1996). Его концентрацию выражали в условных единицах Пятницкого.

2.3. Методы гистологического исследования

Гистологическому исследованию подвергали аутопсийный и биопсийный материал, полученный из краев и дна язвы, переульцерозной зоны, а также из фундального, кардиального и антрального отделов. Отобранный материал фиксировался в 10%-ом водном растворе нейтрального формалина. Приготовление гистопрепаратов осуществлялось по общепринятой методике (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982), путем заливки материала в парафин. Полученные гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

2.4. Методы морфометрического исследования

При морфометрическом исследовании стенки желудка применяли окулярный микрометр Мов-1-15м (ГОСТ-151-50-69) и окулярную сетку для цитогистостереометрических исследований со 100 и 25 равноудаленными точками нулевой толщины (Автандилов Г.Г., 1972; 1973; 1980; 1981; 1984; 1990). В процессе морфометрических исследований определяли: объёмную плотность (Vi) артерий, вен, лимфатических сосудов, интерстициальных пространств, клеток и межклеточного вещества. Численную плотность (NA) лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, тучных клеток, эритроцитов, моноцитов, макрофагов, дегенерирующих и плазматических клеток. Тип клеток определяли в соответствии с рекомендациями Бородина Ю.И, Григорьева В.Н. (1986).

2.5. Метод эндоскопического исследования верхних отделов пищеварительного тракта