авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 |

Фармако-токсикологические свойства и эффективность препарата айсидивит для профилактики послеродовых осложнений у коров

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Кугелева Татьяна Игоревна

Фармако-токсикологические свойства и эффективность препарата АйСиДивит для профилактики послеродовых осложнений у коров

06.02.03. - ветеринарная фармакология c токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата

биологических наук

Москва 2011

Работа выполнена в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

академик РАСХН Борис Вениаминович Уша

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Н.С. Преображенский

доктор биологических наук, профессор Т.С. Новик

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИВСГЭ» Россельхозакадемии)

Защита диссертации состоится « » 2011 года в часов на заседании диссертационного совета Д 220.011.01. при Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов».

Адрес: Россия, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д.5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ВГНКИ».

Автореферат разослан « » ________ 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук, доцент,

Заслуженный ветеринарный врач РФ Козырев Ю.А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Успешное ведение молочного скотоводства основано на максимальном и рациональном использовании репродуктивного потенциала маточного поголовья. Однако в современных условиях животные постоянно подвергаются воздействию различных стресс-факторов, вызывающих вторичные иммунодефициты, которые способствуют появлению заболеваний различной этиологии. (В.С. Бузлама, 2000; Ю.Н. Федоров, 2006; Ю.Н. Масьянов, 2009).

Исследованиями Mallard B.A. (1998) показано, что механизмы защиты организма коров и нетелей наиболее уязвимы в период, охватывающий последние 3 недели стельности и первые 3 недели после отела. При этом снижается неспецифическая резистентность и реактивность иммунной системы, что обуславливает возникновение послеродовых заболеваний.

По данным зарубежных авторов, задержание последа отмечается у 3-39% отелившихся коров (Ahmed W.M., 1999; Drillich M., 2006; Stephen J.L., 2008). В России акушерско-гинекологическую патологию регистрируют у 15 - 60% маточного поголовья (А.Н. Турченко, И.С. Коба, 2009; В.П. Иноземцев, И.И. Балковой, А.Г. Нежданов, 2000).

Задержание последа приводит к дальнейшим заболеваниям половой системы, в том числе, к различным формам метрита (Correa, 1993; Emanuelson, 1993), длительной ановуляции после отела (Fonseca, Britt., 1983; Oltenacu, Britt, 1983), многократным повторным осеменениям, удлинению межотельного периода, снижению воспроизводительной способности. Развивающиеся при этом патологические процессы характеризуются снижением локального и общего иммунитета, активацией свободнорадикальных механизмов и перекисного окисления липидов, развитием интоксикации (И.М. Карпуть, 1990, 1993; В.И. Слободяник, 2005; А.Г. Нежданов, 2005; О.В. Распутина, 2007).



В настоящее время с целью повышения неспецифической резистентности организма, стимуляции воспроизводительной способности животных, профилактики и лечения акушерско-гинекологических заболеваний у коров широко применяются фармакологические препараты различных групп: адаптогены, антиоксиданты, иммуномодуляторы природного и синтетического происхождения, пробиотики, детоксиканты, а также так называемые «фармакологические стимуляторы» (А. Г. Нежданов, В. П. Иноземцев, 1996; В.С. Бузлама, С.М. Сулейманов, С.В. Шабунин, И.В. Трутаев, Н.П. Мещеряков, 2006, 2007; H.H. Шпоганяч, С.А. Семенютина, 2009).

Препараты данных групп повышают неспецифическую резистентность организма животных, экологически безопасны, однако для достижения оптимальных результатов зачастую требуется их сочетанное применение, что приводит к увеличению материальных и трудовых затрат, возникновению стресса у животных при проведении мероприятий по профилактике послеродовых осложнений у коров.

Исходя из вышеизложенного, актуальным направлением является разработка удобного в применении комплексного иммуномодулирующего препарата на основе экологически безопасных фармакологических компонентов для профилактики послеродовых заболеваний коров.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии нового комбинированного лекарственного препарата в форме раствора для инъекций, содержащего в качестве действующих веществ субстанцию АСД-2Ф, витамины А и Е и янтарную кислоту, предназначенного для повышения неспецифической резистентности и профилактики послеродовых заболеваний у коров.

Для достижения поставленной цели нами были определены следующие задачи:

  1. Научно обосновать состав комбинированного иммуномодулирующего лекарственного препарата в форме раствора для инъекций АйСиДивит.
  2. Изучить физико-химические свойства и стабильность препарата в процессе хранения. Определить показатели качества препарата и методы их контроля.
  3. Изучить фармако-токсикологические свойства препарата в опытах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте.
  4. Установить оптимальную дозу и схему применения препарата для профилактики послеродовых осложнений у коров.
  5. Испытать в условиях производства эффективность препарата в качестве средства повышения неспецифической резистентности и профилактики послеродовых осложнений у коров.
  6. Разработать и представить для согласования и утверждения проекты инструкции по применению препарата в ветеринарии и технических условий (ТУ).

Научная новизна. Впервые разработан отечественный комбинированный лекарственный препарат в форме раствора для инъекций, содержащий в качестве биологически активных веществ субстанцию АСД-2Ф, витамины А, Е и янтарную кислоту, изучены его физико-химические, фармако-токсикологические свойства, иммуномодулирующая активность. В производственных условиях установлена профилактическая эффективность и целесообразность применения препарата для повышения неспецифической резистентности и профилактики послеродовых осложнений у коров.

Практическая значимость. Разработан, стандартизирован и предложен для применения в ветеринарии новый комбинированный лекарственный препарат на основе субстанции АСД-2Ф, витаминов А, Е и янтарной кислоты, определены показатели и методы контроля качества, установлена его оптимальная доза и схема применения для повышения неспецифической резистентности и профилактики послеродовых осложнений у коров.

На основании полученных результатов подготовлены проекты ТУ и инструкции по применению препарата, которые согласованы и утверждены Россельхознадзором в установленном порядке.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт - Петербург, 2009 г.); II Съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (Казань, 2009); III Международной научной конференции «Ветеринарные препараты: разработка, контроль качества и применение» (Украина, Львов, 2009); Заседаниях Ученого совета ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» ( Москва, 2008, 2009, 2010 гг.).

Основные положения, выносимые на защиту:

- требования к составу лекарственного препарата, показатели качества и методы их контроля, результаты изучения стабильности препарата в процессе хранения;

- характеристика фармакологических и токсикологических свойств препарата по результатам опытов на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- результаты испытания в условиях производства эффективности применения препарата в целях профилактики послеродовых осложнений у коров;

- практические предложения по стандартизации, контролю качества и применению препарата для профилактики послеродовых осложнений у коров.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 7 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений.

Список литературы содержит 218 источников, в том числе 158 на русском языке и 60 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 31 таблицей, 7 рисунками. Приложение на 11 страницах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Экспериментальная часть работы выполнена в 2008-2010 гг. в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»), в животноводческих хозяйствах Московской, Рязанской и Смоленской областей РФ.

Объектом исследований служил комбинированный лекарственный препарат АйСиДивит на основе фармацевтической субстанции АСД-2Ф, витаминов А, Е и янтарной кислоты.

Фармако-токсикологические свойства препарата изучали в опытах на 139 белых мышах, 107 крысах, 12 морских свинках, 10 кроликах, 15 телятах и 80 коровах. Эффективность препарата для профилактики послеродовых осложнений у коров в условиях производства испытали на 167 животных.

Для стандартизации и контроля качества препарата, а также определения срока его годности при хранении были предложены методы исследования качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми Государственной фармакопеей (ГФ XI издание) к растворам для инъекций, включающие: определение внешнего вида, цвета, прозрачности раствора, его плотности, рН, объема заполнения флаконов, стерильности, токсичности в тест-дозе, наличия механических включений, пирогенности, а также модифицированные нами методики определения подлинности фармацевтической субстанции АСД-2Ф, массовой доли свободных и связанных аминокислот, ретинола ацетата, альфа-токоферола, янтарной кислоты.

Определение внешнего вида, цвета, прозрачности и окраски препарата, рН, объема заполнения флаконов, стерильности, пирогенности и испытание на токсичность проводили согласно ГФ ХI, т.1; плотность раствора при температуре 20°С - в соответствии с ГФ ХII, ч.1. Контроль препарата на наличие механических включений - в соответствии с инструкцией по контролю на механические включения инъекционных лекарственных средств РД-42-501.

Для определения подлинности препарата был выбран метод тонкослойной хроматографии. В качестве подвижной фазы испытали 3 различные смеси, в качестве индикатора использовали раствор нингидрина. Общее содержание аминокислот, свободные аминокислоты, витамины А и Е, а также массовую долю янтарной кислоты определяли методом ВЭЖХ.

Стабильность препарата изучали в условиях естественного хранения при температуре 23±2С в течение 2 лет.

Исследование фармако-токсикологических свойств препарата проводили в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005 г.).

Изучение специфической активности препарата АйСиДивит проводили на мышах линии CBA массой 18 – 20 г.

Влияние препарата на антителообразование изучали методом локального гемолиза и в реакции гемагглютинации при иммунизации мышей эритроцитами барана (ЭБ). Титры агглютининов определяли в микроварианте прямой реакции гемагглютинации.

О влиянии препарата на клеточный иммунитет судили по индукции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и по изменению количества ауторозеткообразующих клеток (ауто-РОК) по Jondal M. et al.(1972), в качестве эритроцитарного маркера в этом тесте применяли 1,5 % взвесь аутологичных эритроцитов.





Для определения параметров острой токсичности исследуемого препарата использовали белых мышей обоего пола массой 19-21 г и белых крыс массой 200-240 г. Перед опытом животных в течение 6 часов выдерживали на голодной диете, после чего взвешивали и распределяли по группам.

Для установления параметров острой токсичности препарат вводили белым мышам однократно (в максимальной дозе дробно, с интервалом 1 час) в желудок с помощью шприца с оливой в дозах от 1 до 25 мл/кг массы животного (6 доз), а также белым крысам однократно подкожно в область бедра (в максимальных дозах - с обеих сторон тела) в дозах от 0,1, до 30 мл/кг массы.

Каждую дозу препарата испытывали на 7 животных, контрольным животным вводили воду для инъекций в том же объеме. Наблюдения проводили в течение 14 суток; в первые сутки наблюдение вели непрерывно. Регистрировали общее состояние животных, поведение, интенсивность и характер двигательной активности, координацию движений, состояние кожно-волосяного покрова, слизистых оболочек, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускание и окраску мочи, потребление корма и воды. Регистрировали сроки развития интоксикации и гибели мышей, проводили макроскопическое исследований внутренних органов и тканей в месте введения препарата (степень кровенаполнения, наличие кровоизлияний, изъязвлений слизистой оболочек и др.). Оценку степени опасности лекарственного средства проводили согласно ГОСТ 12.1.007-76.

Исследования субхронической токсичности препарата проводили на белых мышах исходной массой 19 23 г, из которых сформировали 4 группы по 10 голов в каждой. Препарат вводили животным в желудок ежедневно в течение 15 суток в дозах 0,1 и 0,3 мл/кг массы. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,5 мл.

В процессе опыта ежедневно регистрировали массу мышей, характер, степень и обратимость патологических изменений. На 16 сутки мышей декапитировали и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для последующих гематологических и биохимических исследований. Извлекали печень, почки, сердце, лёгкие, селезёнку и проводили взвешивание органов.

Состояние гемопоэза оценивали по количеству эритроцитов и лейкоцитов, которое определяли с помощью камеры Горяева, уровень гемоглобина – фотометрическим методом. Биохимические исследования проводили на анализаторе «Spekol 220/221» (Германия).

Влияние препарата на антитоксическую функцию печени изучали методом гексеналовой пробы (Д.Г. Розин, 1964) на 36 белых крысах-самцах, которых распределили на опытную и контрольную (по 18 животных) группы. Животным опытной группы вводили препарат в дозе 0,3 мл/кг. Крысам контрольной группы препарат не вводили. Через 1,5; 3 и 6 часов животным обеих групп вводили гексенал внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг в объеме 1 мл свежеприготовленного раствора на 100 г массы животного. Продолжительность сна учитывали в минутах от момента развития бокового положения до первых попыток крыс принять положение «спиной вверх».

Для определения массового коэффициента печени на 1, 3 и 7 сутки белых крыс опытной и контрольной групп декапитировали, вскрывали брюшную полость, извлекали печень.

Изучение раздражающего действия на кожу провели на 10 кроликах массой 1,9-2,2 кг. Препарат наносили на выстриженный участок кожи (10 см2) боковой поверхности туловища 5 кроликам в дозе 1 мл. Остальные животные служили контролем (наносили дистиллированную воду). Экспозиция составляла 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию оценивали через 1 и 16 часов после нанесения препарата.

Для изучения раздражающего действия на слизистые оболочки препарат однократно вносили в конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов (10 голов) в количестве 1 капли. Правый глаз служил контролем, и в него вносили 1 каплю физиологического раствора. Оценку раздражающего действия проводили в баллах через 15 минут, 2 часа (быстрая реакция) и через 24 - 48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) по изменению кровенаполнения конъюнктивы, наличию лакримации и состоянию века и роговицы.

Аллергизирующие свойства препарата тестировали методом гистаминного шока (М.Л. Гершанович, 1954) на 12 морских свинках массой 250 – 300 г. Шести подопытным морским свинкам перорально вводили препарат в дозе – 0,1 мл/кг. Контрольным животным препарат не применяли. Через 6 и 12 часов всем животным подкожно вводили гистамин в дозе 5 мг/кг. Регистрировали время наступления гибели животных.

В основу выявления возможного тератогенного и эмбриотоксического действия препарата были положены «Методические рекомендации по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (МЗ РФ, 1986) и «Методические указания по тестированию тератогенной активности химических веществ» (А.П. Дыбан и др., 1970).

Эксперименты провели на 72 беременных самках белых крыс с установленным сроком начала беременности, которых разделили на 6 групп (3 контрольных и 3 опытных). Препарат вводили крысам опытных групп внутрижелудочно в трехкратной терапевтической дозе (0,1 мл/кг) массы животного по следующей схеме: с 1 по 7 сутки беременности (ежедневно); с 8 по 14 (ежедневно) и с 1 по 19 сутки беременности (ежедневно). Учёт результатов эксперимента проводили после декапитирования подопытных и контрольных крыс на 20 сутки беременности. При вскрытии в яичниках подсчитывали количество резорбций, жёлтых тел, в матке – число мест имплантаций, живых и погибших плодов. Оценивали анатомическое строение и определяли массу и размеры плодов.

Влияние препарата на организм крупного рогатого скота изучали в ЗАО «Дашковка» Серпуховского района Московской области на 15 клинически здоровых телятах чёрно-пёстрой породы 2-месячного возраста, которых разделили на 3 группы (по пять голов в каждой). В период опыта всех животных содержали в одинаковых условиях, на одинаковом рационе.

Препарат вводили телятам внутримышечно один раз в сутки в течение 30 дней: первой опытной группе животных в дозе 0,03 мл/кг массы, второй опытной группе - в дозе 0,1 мл/кг массы. Третьей (контрольной) группе животных препарат не вводили.

За животными вели наблюдение в течение опыта и 30 дней после его окончания. Определяли общий клинический статус животных, оценивая температуру тела, количество сердечных толчков, частоту дыхательных движений, а также состояние кожного покрова, видимых слизистых оболочек, состояние тканей в месте введения препарата, подвижность животных, приём ими корма и воды. Проводили морфологический, биохимический анализ крови и исследование мочи до и после введения препарата.



Pages:   || 2 | 3 |
 

Похожие работы:







 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.