авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 |

Жизнеспособность l. monocytogenes в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах

-- [ Страница 1 ] --

УДК 619:614.95:579.869.1 На правах рукописи

КАУМЕНОВ НУРЛАН САРСЕНБАЕВИЧ

ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ L. MONOCYTOGENES В КОНЦЕНТРИРОВАННЫХ КОРМАХ И КОРНЕКЛУБНЕПЛОДАХ

16.00.03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Республика Казахстан

Астана, 2010

Работа выполнена в лаборатории микробиологии кафедры ветеринарной санитарии факультета ветеринарии и технологии продовольственных продуктов Костанайского государственного университета им. А. Байтурсынова.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, Гершун В.И.
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, Антюхов В.М.
кандидат ветеринарных наук Бакирова Г.А.
Ведущая организация: Казахский национальный аграрный университет

Защита диссертации состоится 15 декабря 2010 г. в 1400 часов на заседании объединенного диссертационного совета ОД 18.08.03 при Казахском агротехническом университете им. С. Сейфуллина по адресу: 010011 г. Астана, ул. А. Молдагуловой 29а, малый конференц-зал тел.: 8 (7172) 31-75-64, факс: 8 (7172) 31-75-68, www.agun.kz

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина

Автореферат разослан «____» ноября 2010г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор ветеринарных наук Т.Ж. Абдрахманов

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Листериоз распространен широко, им болеют как дикие, так и домашние животные. Возбудитель выделен от 103 видов животных и регистрируется в свыше чем, в 65 странах мира, в различных природных ареалах. Листерии весьма устойчивы к неблагоприятным факторам окружающей среды [Котляров В.М., 1999].

Данные ряда исследований в последние годы свидетельствуют об исключительно широких адаптивных свойствах листерий, а также высокой метаболической лабильности возбудителя, который не только длительно выживает в объектах окружающей среды и различных природных субстратах, но и размножается в них, а также переходит от сапрофической фазы к паразитической и наоборот. Таким образом наряду с традиционными представлениями взаимосвязи листерий с животными, некоторые исследователи рассматривают листериоз как типичную сапронозную инфекцию [Гершун В.И., 1980, 1981,1988, Сомов Г.П., 1988, Adams T.J. et al., 1990, Литвин В.Ю., 1997].

Несмотря на то, что уже более 100 лет известны заболевания людей и животных, обусловленные листериями, до настоящего периода листериоз остается недостаточно изученным. Данную инфекцию, как на причину пищевой инфекции ранее не обращали внимания, только в 80 годах двадцатого столетия в ряде высокоразвитых стран мира (США, Великобритания, Швейцария, Франция, Канада) после вспышек в связи с употреблением готовых продуктов, данное заболевание стали рассматривать как пищевую инфекцию. Заражение животных происходит при использовании инфицированных кормов [Бакулов И.А., Котляров В.М., 1991, Куликовский А., 2000].



Во многих странах мира приняты государственные системы контроля за продуктами питания, несущими риск заражения листериями, выработаны стандарты для готовой пищевой продукции с учетом возможности их реконтаминации при хранении в холодильниках, законодательно закреплена необходимость соблюдения правил и технологических норм в пищевой индустрии, при транспортировке, хранении и реализации продуктов [L. Сох, С. Pedrazzini, 1989; L. Crawford, 1991; О. Rotterud, Т. Nesbakken, 1992].

В настоящее время актуальна проблема профилактики инфицирования листериями кормов и продуктов питания для животных и человека. Этим вопросам уделено большое внимание на XVI и XVII Международном симпозиумах по проблеме листериоза «ISOPOL» проведенные в США (2007 г) и Португалии (2010 г.).

В данный период установлен мониторинг на содержание L. monocytogenes в продуктах животноводства (мясо, молоко, колбаса, сыр и др.), рыбоводства (рыба, рыбный фарш, рыбные консервы, копчености и др.) и растениеводства (овощи, салаты и др.), в которых листерии не допускаются в 25 г навески пищевого продукта.

Инфицированность продуктов животноводства осуществляется в результате потребления животными кормов, инфицированных листериями.

Эпизоотическое значение контаминированных листериями кормов достаточно высоко, поэтому изучение жизнеспособности листерий в кормах является основой профилактики листериоза как у людей, так и животных.

Необходимо отметить недостаточную изученность жизнеспособности возбудителя листериоза в кормах. По данной проблеме имеются лишь единичные источники в отечественной литературе [Гершун В.И., 1981; Туякова Р.К., 2001; Осипова Б.А., 2008 и др.].

В литературе мы не обнаружили работ, посвященных изучению жизнеспособности листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах.

Цель и задачи исследований. Основной целью настоящих исследований является изучение жизнеспособности листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах. Для достижения данной цели были определены следующие задачи:

1 Изучить распространение листерий в почве, воде, растительных продуктах и кормах;

2 Изучить жизнеспособность листерий в концентрированных кормах (комбикорма, шроты);

3 Изучить жизнеспособность листерий в корнеклубнеплодах (морковь, свекла, картофель);

4 Изучить влияние молочнокислых бактерий и плесневых грибов на жизнеспособность листерий в кормах;

5 Разработать меры по обезвреживанию кормов, инфицированных листериями.

Научная новизна. Впервые изучена жизнеспособность листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах.

Впервые изучено влияние молочнокислых бактерий и плесневых грибов на жизнеспособность листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах.

Разработаны новые растительные среды для культивирования листерий. Установлена приоритетность этих сред, которая подтверждена двумя инновационными патентами: «Способ культивирования листерий в морковном соке», № 20802 (16.02.2009 г.); «Способ культивирования листерий в водном экстракте из комбикорма», № 22048 (15.12.2009 г.).

Практическая значимость работы. При использовании в кормлении животных комбикормов и корнеклубнеплодов, необходимо осуществлять контроль их на инфицированность листериями. Особое внимание при этом следует уделять кормам низкого качества. При наличии листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах необходимо их обеззараживать при 750С в течение 5 минут. Результаты диссертации используются в Костанайском государственном университете им. А.Байтурсынова в учебном процессе для студентов и магистрантов специальностей «Ветеринарная санитария», «Ветеринарная медицина».

Разработанные нами рекомендации были приняты для рассмотрения и утверждения Комитетом государственной инспекции в АПК МСХ РК.

Результаты диссертации используются при планировании профилактических мероприятий по инфекционным болезням животных в Костанайской области.

Основные положения, выносимые на защиту диссертации

1 Жизнеспособность листерий в концентрированных кормах (комбикорма, шроты) в зависимости от температурного режима;

2 Жизнеспособность листерий в корнеклубнеплодах (морковь, свекла, картофель) в зависимости от температурного режима;

3 Морковный сок и водный экстракт из комбикорма как питательная среда для культивирования листерий;

4 Влияние молочнокислых бактерий и плесневых грибов на жизнеспособность листерий в концентрированных кормах и корнеклубнеплодах;

5 Способы обеззараживания комбикормов и корнеклубнеплодов, инфицированных листериями.

Апробация результатов работы. Основные материалы доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции посвященной 45-летию «Северо-Казахстанского НИИ животноводства и ветеринарии» (п. Бишкуль,2007); на международной научно-практической конференции «Молодых ученых» (г. Алматы, 2007); на международной научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности сельскохозяйственного производства Казахстана: проблемы, пути решения» (г. Алматы, 2007); на республиканской научно-практической конференции «Сейфуллинские чтения - 4» (г. Астана, 2008); на международной научно-практической конференции «Наука и образование» (г. Прага, 2009/2010); на международной научно-практической конференции «Байтурсыновские чтения-2010», посвященной 70-летию РГКП «Костанайский государственный университет им А.Байтурсынова» (г. Костанай, 2010); на международной научно-практической конференции «Последние научные достижения» (г. София, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе два инновационных патента на изобретения, выданных Национальным институтом интеллектуальной собственности РК.

Объем и структура диссертации. Диссертация представлена на 124 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, практических предложений, списка использованных источников и приложений.

Работа иллюстрирована 20 таблицами, 20 рисунками. Список использованной литературы включает 225 источников.

1ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в период с 2006 по 2010 год в лаборатории микробиологии кафедры ветеринарной санитарии факультета ветеринарии и технологии продовольственных продуктов Костанайского государственного университета имени А. Байтурсынова.

В работе использованы 3 музейных штамма Listeria monocytogenes из коллекции кафедры ветеринарной санитарии КГУ им. А. Байтурсынова (№ 3 был выделен в лаборатории микробиологии Костанайского сельскохозяйственного института, № 9-72 и № 9-127 предоставлены Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной вирусологии и микробиологии), которые в соответствии с паспортными данными обладали типичными морфологическими, культуральными, биохимическими и патогенными свойствами.

Для культивирования и выделения листерий из исследуемых объектов использовали метод «холодового обогащения», а также производили посевы в жидкие и плотные питательные среды: МПБ, МППБ, бульон обогащения (LEB), бульон Фрейзера, МПА с 0,004% налидиксовой кислотой, Palcam-агар, Oxford-агар.

Бактериологическому исследованию подвергнуты 20 проб почвы, 15 проб воды открытых водоемов, 15 проб комбинированных кормов, 7 проб свеклы, 5 проб моркови и 5 проб картофеля.

Отбор проб и их подготовку для бактериологического анализа проводили согласно ГОСТ 26668-85, 26669-85, ГОСТ 1721-85, ГОСТ 1722-85, ГОСТ 7176-85, ГОСТ 12220-96, ГОСТ 13496.0-80, Методических указаний. Методы исследования пищевых продуктов на листерии. МУК №8.05002.04.

Морфологические, культуральные, ферментативные, биохимические и патогенные свойства штаммов листерий изучали по общепринятым методикам.

Изучена жизнеспособность листерий в 9 пробах морковного сока и 9 пробах моркови, в 9 пробах свекольного сока и 9 пробах свеклы, в 9 пробах картофельного сока и 9 пробах картофеля, в 18 пробах комбикормов и в 18 пробах шротов.

Изучено влияние влажности на жизнеспособность листерий в 6 пробах комбикормов.

Изучено влияние на листерий молочнокислых бактерий (Streptococus lactis diastatikus AMC 23, Lactina- LAT. BY, ST. BODY 3, CNH-19) в 9 пробах морковного сока и 9 пробах комбикормов и влияние плесневых грибов ( Alternaria tenius АТ№1, Fusarium sporotrichiella FS №5, Aspergillus insuetus Г-342, Fusarium graminearum FG №13, Penicillium cyclopium 1) в 9 пробах морковного сока и в 9 пробах комбикормов.

Для обеззараживания листерий в корнеклубнеплодах и концентрированных кормах был проведен опыт по термической обработке в 9 пробах концентрированных кормов и в 6 пробах корнеклубнеплодов.





При проведении исследований использовались микроскопы-Микмед-5, термостаты, водяная баня, сушильные шкафы, холодильники, мясорубки и соковыжималки, рН- метры, мешалка, мерная лабораторная посуда, материалы и среды для микробиологического исследования.

Результаты исследований подвергали определению критерия достоверности по Стьюденту: по первому (Р<0,05), по второму ( Р<0,01), по третьему ( Р<0,001) порогам вероятности.

2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Распространение листерий в почве, воде и растительных кормах

В целях изучения распространения листерий в почве, воде и растительных кормах для исследования были отобраны 67 проб: 15 проб почвы с картофельных полей и 5 проб почвы из овощехранилища, 15 проб воды открытых водоемов, 15 проб комбинированных кормов с птицеводческой фабрики и животноводческих ферм, 7 проб свеклы, 5 проб моркови, 5 проб картофеля, которые отбирали на животноводческих предприятиях и в торговых точках по Костанайской области.

В результате исследования листерии обнаружены в 3 пробах почвы, что составляет, соответственно 15%.

При исследовании воды открытых водоемов листерии обнаружены в 2 (13,3%) пробах. В кормах возбудитель листериоза обнаружен в 2 пробах (6,25%).

Всего при исследовании 67 проб, положительными оказались 7 проб, что составляет 10,4%.

Таким образом, наши исследования свидетельствуют о сравнительно широком распространении листерий в объектах окружающей среды.

Культуры листерий были подвергнуты культурально-морфологическим, биологическим и биохимическим исследованиям.

Типичной для всех культур была палочковидная форма. Все культуры в мазках по Грамму окрашивались положительно, при этом они выглядели в виде коротких палочек, с закругленными концами, располагаясь беспорядочно: одиночно, попарно и виде небольших цепочек. Бульонные 12 часовые культуры листерий полученные при комнатной температуре (18-200С), обладали хорошо выраженной подвижностью. В старых культурах (свыше 1 месяца) листерии имели нитчатую форму.

Полученные культуры довольно хорошо росли на МПБ, бульоне обогащения, бульоне Фрейзера, МПА, Palcam-агаре, Oxford-агаре и других питательных средах. При культивировании на МПБ рост листерий характеризовался помутнением, после встряхивания были отчетливо видны муаровые волны. При 370С в течение 48-72 часов на дне пробирки появлялся осадок, надосадочная жидкость становилась прозрачной. При равномерном встряхивании слизистый осадок поднимался и выглядил в виде «косички», достаточно трудно разбивавшейся в равномерную мутность.

В бульоне обогащения и бульоне Фрейзера при 300С через 1-2 суток отмечался значительный рост листерий, в результате среда окрашивалась в темно-коричневый цвет.

На МПА через сутки появлялись мелкие, изолированные, круглые, прозрачные, напоминающие капельки росы колонии. Большинство суточных культур имели ровные края и гладкую поверхность. Через 2-3 суток они увеличивались в размере, верхняя часть колоний была округлая, имела шероховатую поверхность, с блестящим серовато-голубоватым оттенком.

На Palcam-агаре через 24-48 часов культивирования при 370С колонии были размером 0,5-1,0 мм, круглой формы с серо-зеленоватым оттенком и темным ореолом вокруг. На Oxford-агаре через 24-48 часа колонии имели темно-коричневый цвет, размер 0,5-1,0 мм с черным ободком вокруг. Через 2 суток эти колонии увеличивались до 2,0-2,5 мм, становились черного цвета, центр колонии погружался в агар.

Выделенные штаммы расщепляли с образованием кислоты без газа: глюкозу, фруктозу, рамнозу, через 3 суток наблюдалась ферментация мальтозы и салицина. Все штаммы не изменяли среду с дульцитом, арабинозой, раффинозой и ксилозой. Четыре штамма разлагали сахарозу и только 2 штамма положительно реагировали с маннитом. По результатам исследования свежевыделенных штаммов листерии обладают разнообразными биохимическими свойствами.

Все выделенные штаммы не продуцировали индол, аммиак и сероводород, но проявляли каталазную активность. При этом перекись водорода расщеплялась с образованием пузырьков газа.

При исследовании чувствительности культур к бактериофагам (L2A, L4A) 4 штамма листерий показали принадлежность к 1 серогруппе и 3 штамма - ко 2 серогруппе.

С целью определения патогенных свойств выделенных штаммов проводили конъюнктивальную пробу на морских свинках. У 5 штаммов конъюнктивальная проба была положительной, у двух штаммов, полученных из воды и почвы, конъюнктивальная проба была отрицательной.

Таким образом, листерии выделенные из различных объектов окружающей среды (почва, вода, растительное сырье) обладали типичными культурально-морфологическими, биохимическими и патогенными свойствами.

2.2 Жизнеспособность листерий в моркови

Жизнеспособность листерий в моркови изучали при 40С, 180С и 370С. В стерилизованных пробах морковного сока при 40С исходная концентрация листерий (0,15 тыс. КОЕ/мл) возрастала и на 6-8 сутки составляла 96,7-156,3 тыс. КОЕ/мл, при 180С концентрация листерий на 6-8 сутки поднималась до 323,3-5773,3 тыс. КОЕ/мл, а при 370С концентрация листерий на 6-8 сутки была в пределах 61666,6-98400 тыс. КОЕ/мл. При 18-370С в пробах морковного сока концентрация листерий была значительно выше, чем при 40С (рисунок 1,А).

Учитывая полученные данные, нами был проведен опыт с использованием, морковного сока в качестве питательной среды. Исследования показали, что при культивировании листерий в морковном соке, их концентрация при 370С на 4 сутки достигала 90-100,0 млн. КОЕ/мл. На основании этих исследований был получен инновационный патент «Способ культивирования листерий в морковном соке» (№ 20802 от 16.02.2009, Бюл. №2, 2с.).

Изучена жизнеспособность листерий в пробах нестерильной моркови. Как показали результаты исследования в пробах моркови, которые хранились при 40С исходная концентрация листерий (0,72 тыс. КОЕ/г), возрастала и составляла на 4-5 сутки 50,3-90,6 тыс. КОЕ/г, а рН была в пределах 7,05-7,16.

А В

Рисунок 1 - Динамика концентрации листерий в стерилизованном морковном соке и в нестерильной моркови при различных температурных режимах

В пробах моркови при 180С исходная концентрация листерий значительно увеличивалась и на 1-2 сутки она достигала до 155,4-2260,3 тыс. КОЕ/г, но на 3 сутки популяция листерий была менее 0,01 тыс. КОЕ/г, а в последующие сутки листерии не обнаруживались. Исходная рН в этих пробах понижалась до 4,05-4,11. В аналогичных пробах при 370С исходная концентрация листерий значительно увеличивалась и достигала спустя сутки 3845,0 тыс. КОЕ/г, на 2 сутки их концентрация уменьшалась до менее 0,01 тыс. КОЕ/г, а в последующие сутки листерии не обнаруживались (рисунок 1,В).



Pages:   || 2 | 3 |
 

Похожие работы:










 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.