авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 |

Морфофункциональные изменения органов гомеостатического обеспечения при абиктиновой интоксикации и способы коррекции

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Зайбель Ирина Александровна

Морфофункциональные изменения органов

гомеостатического обеспечения при абиктиновой интоксикации и способы коррекции

16.00.02 – Патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2007

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» на кафедре анатомии и физиологии сельскохозяйственных животных Института ветеринарной медицины и биотехнологии.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, доцент

Донкова Наталья Владимировна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Чумаков Виктор Юрьевич

кандидат ветеринарных наук, доцент

Сафронова Екатерина Дмитриевна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Вятская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита состоится 30 мая 2007 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу: 656922, г. Барнаул, ул. Попова, 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан 23 апреля 2007 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

профессор П.И. Барышников

  1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. В сельском хозяйстве нет фактора, более тесно связанного с проблемой охраны природы, особенно охраны здоровья человека, чем химизация отрасли (Гончар М.Т., 1986). Вопросы безопасного обращения пестицидов, агрохимикатов и химиотерапевтических средств чрезвычайно важны. Способность их к циркуляции в объектах окружающей среды (вода, почва) и их наличие в сельскохозяйственной продукции обуславливает возможность хронического неблагоприятного воздействия на живой организм. К тому же немало действующих веществ пестицидов и агрохимикатов, обладают способностью к материальной биологической кумуляции – накоплению в биосредах человека: в крови, грудном материнском молоке, волосах (Онищенко Г.Г., 2003).

Увеличение в экосистеме вредных факторов химической этиологии, обусловленное деятельностью человека, и отрицательные последствия применения современных агрохимикатов и химиотерапевтических препаратов становятся причиной изменения важнейших параметров функционирования живых систем, и ставит задачу комплексного изучения воздействия ксенобиотиков на организм (Kappus H., 2000; Krieter P., 2001).

В современной агрохимии и животноводстве широкое распространение получили авермектины, как одни из самых эффективных средств борьбы с эндо - и эктопаразитами растений и животных. Применение препаратов данной группы в качестве пестицидов приводит к повышению санитарно-гигиенической опасности, связанной с загрязнением их остатками сельхозпродукции. По данным некоторых авторов лишь 0,1% применяемых пестицидов достигает цели, остальная же часть является источником загрязнения окружающей среды, в том числе продуктов животноводства (Campbell W.C., 1989; Новик Т.С., Рябова В.А. и др., 2002). Вместе с тем отдаленные последствия воздействия авермектинов на организм животных и человека остаются до конца не изученными.



Известно, что одним из базовых механизмов токсичности ксенобиотиков является индукция ими окислительного стресса (Kappus H., 2000; Krieter P., 2001). Поддержание устойчивого состояния окислительно-восстановительного гомеостаза клетки может происходить при действии адаптогенов природного происхождения, которые оказывают влияние, как на клеточные мембраны, так и на ее метаболизм, проявляя антиоксидантную и антигипоксантную активность (Дардымов И.В., Хасина Э.И., 1993; Саратиков А.С., Венгеровский А.И, 2000; Бабкин В.А, и др., 2002; Сулайманова Г.В., 2005).

В настоящее время идет поиск новых видов адаптогенов, которые бы обладали широким спектром защитного действия. Одним из таких адаптогенов является бетулин – тритерпеноид, получаемый из внешней коры березы, проявляющий широкий спектр биологической активности. Однако, технически гораздо проще и дешевле использовать бетулиносодержащие экстракты бересты березы, получаемые традиционными методами экстракции органическими растворителями (Кузнецова С.А., 2002). Вместе с тем механизмы компенсаторно-адаптационных процессов, лежащие в основе действия этих адаптогенов на организм на фоне токсических и стрессорных факторов, остаются недостаточно выясненными, что существенно снижает возможности их практического применения.

Цель работы: изучить морфофункциональные изменения органов гомеостатического обеспечения крыс при абиктиновой интоксикации и способ коррекции этих изменений при помощи фитоадаптогена.

Задачи исследований:

1. Исследовать морфобиохимические показатели крови крыс при токсическом действии препарата из группы авермектинов – абиктина.

2. Исследовать процессы перекисного окисления липидов в суспензии клеток костного мозга при воздействии абиктина.

3. Изучить гистоструктуру печени, почек, 12-ти перстной кишки и головного мозга крыс при абиктиновой интоксикации.

4. Изучить защитное действие фитоадаптогена (экстракта бересты березы) на фоне абиктиновой интоксикации.

Научная новизна:

Установлено, что длительное воздействие абиктина вызывает морфофункциональные изменения в организме крыс, проявляющиеся в виде угнетения кроветворения и развития патологических процессов в органах гомеостатического проявления – почках и печени.

Впервые установлены антиоксидантные и антитоксические свойства нового фитоадаптогена – экстракта бересты березы (ЭББ), на фоне токсического действия ксенобиотика.

Впервые показано защитное действие фитоадаптогена ЭББ в условиях абиктиновой интоксикации.

Теоретическая и практическая и значимость работы:

Данная работа является фрагментом темы «Структурно-функциональные основы гомеостаза сельскохозяйственных животных при экстремальных состояниях» основных научных исследований факультета ветеринарной медицины Красноярского государственного аграрного университета.

Работа носит экспериментальный характер.

Полученные данные расширяют представление о механизме цитотоксического действия авермектинов. Выявленные закономерности изменений позволяют оптимизировать пути коррекции токсических эффектов ксенобиотиков.

Продемонстрирована эффективность экспериментального препарата – экстракта бересты березы в снижении цитотоксического действия абиктина.

Результаты исследования могут быть использованы при оценке степени вреда, наносимого избыточным применением пестицидов, содержащих авермектины.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфобиохимические изменения в системе крови при действии абиктина: развитие анемии, нейтрофилеза, гипопротеинемии и активации цитолитических ферментов.

2. Индукция окислительного стресса в клетках красного костного мозга под действием абиктина.

3. Микроструктурные изменения в органах гомеостатического обеспечения при длительном воздействии абиктина

4. Эффективность применения фитоадаптогена, выделенного из бересты березы, на фоне токсического действия ксенобиотика – абиктина.

Апробация работы:

Основные материалы исследований доложены и получили одобрение на XI Международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003); Международной конференции молодых ученых (Улан-Удэ, 2004); Всероссийской научной конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2004); Сибирском ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005); XIII Международном симпозиуме «Сложные системы в экстремальных условиях» (Красноярск, 2006) и ежегодных научно–практических конференциях Красноярского государственного аграрного университета (2001 – 2006гг.).

Публикации. По результатам научных исследований опубликовано восемь печатных работ, из них две в ведущих научных журналах, перечень которых утвержден ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа изложена на 114 страницах, содержит 15 таблиц, 2 рисунка, 21 микрофотографию, 12 диаграмм и 1 схему. Список литературы включает 225 наименования, из них 32 зарубежных источника.

  1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
    1. Материалы и методы исследования

Экспериментальная работа выполнена на базе кафедры анатомии и физиологии сельскохозяйственных животных Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» и Институте химии и химических технологий Сибирского отделения Российской Академии Наук (ИХХТ СО РАН).

Исследования проведены на 200 белых беспородных крысах-самцах массой 150-200 г 2-2,5 месячного возраста. Животные содержались в виварии при температуре воздуха 20-22С, влажности не более 50%, в стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой.

В первой серии опытов было сформировано три группы клинически здоровых крыс. Первая группа – контрольные животные, получавшие в эквиобъемных количествах физиологический раствор в течение опыта; вторая группа – крысы, получавшие абиктин (Агроветсервис, г. Москва) в дозе 0,3 мг/кг подкожно, в течение 14 дней; третья группа – абиктин в дозе 1,0 мг/кг, 14 дней подряд. Морфобиохимические, гистологические исследования, изучение процессов перекисного окисления липидов проводили на 7-е и 14-е сутки. Для изучения восстановительного периода, исследования проводили на 21-е, 28-е сутки после введения абиктина.

Во второй серии опытов в качестве адаптогена использовали экстракт бересты березы, полученный ИХХТ СО РАН в дозе 600 мг/кг. Перед применением данный препарат разводили крахмальной суспензией. Животные были разделены на четыре группы. Первая группа – крысы, получавшие в эквиобъемных количествах физиологический раствор в течение опыта; вторая группа – получавшие ЭББ (внутрижелудочно, через зонд) в дозе 600 мг/кг в течение 14 дней; третья группа – абиктином в дозе 1 мг/кг, 14 дней; четвертая группа – абиктин 1 мг/кг + ЭББ 600 мг/кг в течение 14 дней. Морфобиохимические, гистологические исследования, изучение процессов перекисного окисления липидов проводили на седьмые и 14-е сутки. Для изучения восстановительного периода, исследования проводили на 21-е, 28-е сутки.

Материалом для исследований послужили цельная и стабилизированная трилоном Б кровь, сыворотка и мазки крови, суспензия клеток красного костного мозга, печень, почки, 12-ти перстная кишка и головной мозг.

Отбор периферической крови у крыс производили путем пункции хвостовой вены. Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов проводили в камере Горяева стандартными методами.

Лейкоцитарную формулу выводили на мазках крови, окрашенных по Паппенгейму. Определение концентрации гемоглобина осуществляли гемоглобинцианидным методом на фотоэлектрическом концентрационном колориметре КФК-2 при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр).

Содержание общего белка сыворотки крови определяли по биуретовой реакции. К 5 мл рабочего раствора биуретового реактива добавляли по 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 мин измеряли на фотоэлектроколориметре оптическую плотность опытной пробы против контрольной с длиной волны 540-560 нм (зеленый светофильтр). Расчет проводили по калибровочному графику.

Содержание белковых фракций определяли нефелометрическим методом на основе фосфатного буфера. К 0,5 мл сыворотки крови добавляли 5 мл соответствующих фосфатных буферов. Результат определяли через 15 мин по оптической плотности на фотоэлектроколориметре при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) против контроля.





Для определения активности аланинаминотрансфераз (АЛТ) и аспартатаминотрансфераз (АСТ) использовали унифицированный динитрофенилгидразиновый метод Райтмана-Френкеля.

Выделение клеток костного мозга у лабораторных животных. Источником клеток костного мозга служила бедренная кость. Животных забивали методом цервикальной дислокации спинного мозга в шейном отделе. Получение суспензии костного мозга проводили следующим образом: вскрывали полость бедренной кости и с помощью иглы и шприца вымывали содержимое кости физиологическим раствором (0,5-1 мл раствора на кость). Материал ресуспендировади путем пропускания через иглы уменьшающего диаметра (без образования пены), центрифугировали при 1500 об/мин в течение 15 мин. После этого удаляли третью часть надосадочной жидкости, материал ресуспендировали и готовили мазки (Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П., 1992).

Исследование продуктов перекисного окисления липидов в суспензии клеток костного мозга в тесте с тиобарбитуровой кислотой. Исследование проводили путем определения содержания ТБК-активных продуктов (Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А., 1998). Для анализа брали 0,3 мл суспензии клеток, приливали к ней 3 мл 1% ортофосфорной кислоты, 1 мл 0,6 % тиобарбитуровой кислоты (ТБК) и 0,1 мл раствора сернокислого железа. Пробирки ставили в кипящую водяную баню на 1 час. Затем пробирки охлаждали в холодной воде, добавляли 4 мл бутанола, тщательно перемешивали и центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Оптическую плотность измеряли на фотоэлектрическом концентрационном колориметре КФК-2, при длине волны 535 нм против бутанола. Расчет содержания продуктов, реагирующих с ТБК, проводили с учетом коэффициента молярной экстинции малонового диальдегида (МДА), равного 1,56·105 моль·см-1.

Для гистологического исследования кусочки печени, почек, 12-ти перстной кишки и головного мозга фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин и изготавливали срезы толщиной 5-7 мкм. Окрашенные гематоксилин-эозином и по методу Ван-Гизон срезы микроскопировали при об.8x, 40x, 90x и 100x.

Микроскопию и морфологический анализ препаратов проводили при об. 4х, 10х, 40х и 100х на микроскопе МС 50, а микрофотосъемку – камерой CAM V200 совмещенной с компьютером посредствам кабеля USB 2.0 с помощью программного обеспечения BioVision 2005.

На гистологических препаратах печени и почек подсчитывали количество двуядерных клеток, а так же очагов некроза, в число которых включали уницеллюлярные и фокальные некрозы.

Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента на персональном компьютере с помощью пакета программ Microsoft Office XP и XSTAT 2006. Различия считали значимыми, если вероятность случайности не превышала 5% (Р<0,05) (Лакин Г.Ф., 1990).

2.2. Результаты исследования

      1. Морфофункциональные изменения в организме крыс при абиктиновой интоксикации

Повышенное накопление абиктина в организме крыс приводило к расстройству процессов кроветворения и нарушению синтеза белков. Важным диагностическим показателем токсического действия абиктина являлось появление анемии и нейтрофильного лейкоцитоза.

При введении абиктина в дозе 0,3 мг/кг на седьмые сутки в периферической крови уменьшалось количество эритроцитов на 23,8 %; на 14-е сутки – на 30,5 % (P<0,05) по сравнению с показателями контрольной группы (табл.1).

При введении абиктина в дозе 1,0 мг/кг количество эритроцитов на седьмые сутки уменьшалось на 44% (P<0,05); на 14-е сутки – на 50,9% (P<0,05).

Таблица 1 – Изменения показателей периферической крови крыс при введении абиктина

№ п/п Условия опыта Эритроциты, 1012/л Гемоглобин, г/л Лейкоциты, 109/л
7-е сутки
1 Контроль 10,88±0,15 165,07±0,01 15,22±0,16
2 Абиктин, 0,3мг/кг 8,29±0,12 157,23±1,23* 17,28±0,60
3 Абиктин, 1,0 мг/кг 6,09±0,18* 123,13±0,04** 22,54±2,08**
14-е сутки
1 Контроль 11,40±0,12 160,0±2,06 15,22±0,16
2 Абиктин, 0,3 мг/кг 7,93±0,10* 111,10±0,89* 26,50±1,94**
3 Абиктин, 1,0 мг/кг 5,60±0,40* 62,92±0,83** 36,17±2,36***


Pages:   || 2 |
 

Похожие работы:







 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.