авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 |

Этиология, характеристика микрофлоры и патоморфология при пневмониях маралов

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РОМАНЦЕВА

Юлия Николаевна

ЭТИОЛОГИЯ, ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОФЛОРЫ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ ПРИ ПНЕВМОНИЯХ МАРАЛОВ

16.00.03 – «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2009

Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» Сибирского отделения Россельхозакадемии.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ;

Луницын Василий Герасимович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Смолянинов Юрий Иванович

кандидат ветеринарных наук

Бокова Татьяна Владимировна

Ведущая организация Институт экспериментальной ветеринарии

Сибири и Дальнего Востока

Защита состоится «17» декабря 2009 года в 10:00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу: 656922, Алтайский край, г. Барнаул, ул. Попова 276, ИВМ АГАУ.

Факс (385-2) 31-06-36.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО АГАУ.

Автореферат разослан «10» ноября 2009 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета П.И. Барышников

  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Чтобы успешно предупреждать пневмонии, надо знать причины их возникновения, характер течения и признаки болезни, методы диагностики (Пятков Л.П., 1971).

На большинстве мараловодческих ферм обеспеченность кормами в зимний период составляет 50-80% от требуемого количества. Отдельные предприятия заготавливают достаточное количество кормов, но они низкого качества. На большей части вновь построенных ферм территория огороженных пастбищ в 0,25-0,50 раз меньше требуемой нормы. Пастбищеоборот отсутствует. По этой причине значительная часть территории парков выбита, в летнее время поголовье испытывает недостаток пастбищной травы. Всё это негативно сказывается на здоровье пантовых оленей (Луницын В.Г., 2004).

Не только нарушения условий содержания и кормления отрицательно влияют на организм пантовых оленей. Стрессы во время снятия пантов, частые перегруппировки маралов связаны со значительной нагрузкой на органы дыхания (полудикое животное старается уйти от преследования), что снижает резистентность животных. В конце концов помещенные в разбивочный двор рогачи, стоя, сбившись в кучу, при дыхании выбрасывают содержимое трахеи на рядом стоящих животных, что способствует передаче возбудителей инфекции воздушно-капельным путём.

Недостаточная изученность этиологии и патоморфологии пневмонии пантовых оленей определяется двумя основными причинами: сложностью прижизненной и постмортальной диагностики, а также невозможностью оказания лечебной помощи в виду специфики технологии содержания и биологических особенностей маралов и пятнистых оленей (Луницын В.Г., 1992, 1998).



В отечественной литературе встречаются лишь единичные сообщения о распространении пневмоний у пантовых оленей вышеприведенных авторов, поэтому целесообразность изучения этиологии и патоморфологии пневмонии пантовых оленей вне всякого сомнения.

Цель и задачи исследований. Цель исследований – изучить этиологию, характеристику микрофлоры и патоморфологию при пневмониях маралов. Для решения поставленной цели были предусмотрены следующие задачи:

- определить видовой состав и изучить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры в возникновении и распространении неспецифических пневмоний пантовых оленей;

- изучить патоморфологические изменения при специфических и неспецифических пневмониях;

- изучить явления персистирования патогенных микроорганизмов в диктиокаулах;

- модифицировать МПБ и МПА для культивирования микроорганизмов с определением антимикробного действия нового препарата «Сильверол»;

- определить экономический ущерб и разработать эффективные меры профилактики пневмоний пантовых оленей.

Научная новизна. Впервые определен видовой состав микрофлоры легких маралов, проведено сравнительное изучение патоморфологических изменений при специфических (туберкулез, диктиокаулез) и неспецифических пневмониях. Выявлено персистирование микроорганизмов в диктиокаулах. Разработана новая питательная среда для культивирования микроорганизмов. Изучено антимикробное действие нового препарата «Сильверол». Определен экономический ущерб, причиняемый мараловодческим хозяйствам пневмониями. Разработаны эффективные меры профилактики пневмоний маралов.

Новизна исследований подтверждена патентом № 2366700 от 10 сентября 2009 года «Питательная среда для выращивания микобактерий при бактериологической диагностике туберкулеза» и приоритетной справкой по заявке на патент № 2007142733 от 20.12. 2007 года «Питательная среда для выращивания микроорганизмов».

Практическая значимость. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Диагностика и профилактика болезней легких маралов». Материалы рассмотрены, одобрены и утверждены ученым советом ГНУ ВНИИПО СО Россельхозакадемии (протокол № 10 от 21 октября 2008 г.) и рекомендованы к внедрению в хозяйствах Алтайского края и Республики Алтай, НТС управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 11 от 2 февраля 2009 г.).

Апробация работы. Результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на 3-й Международной научно-практической конференции «Аграрная наука – сельскому хозяйству» (Барнаул, 2008 г.), в трудах XI Международной научно-практической конференции «Развитие АПК Азиатских территорий» (Новосибирск, 2008 г.), ученых советах ГНУ ВНИИПО СО Россельхозакадемии (2005-2008 гг.), НТС управления ветеринарии администрации Алтайского края (2009 г.).

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации отражены в 9 работах, в том числе одна в рецензируемом журнале ВАК Минобразования РФ «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», в патенте № 2366700 «Питательная среда для выращивания микобактерий при бактериологической диагностике туберкулеза», в трудах международных конференций. Научные исследования, изложенные в диссертации, являются составной частью научных программ ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института пантового оленеводства и проведены в соответствии с планом НИР (тема 08.03.08.06).

Основные положения, выносимые на защиту:

-видовой состав и этиологическая роль условно-патогенной микрофлоры в возникновении и распространении неспецифических пневмоний пантовых оленей;

-сравнительная патоморфологическая характеристика специфических и неспецифических пневмоний маралов;

- новая питательная среда для культивирования микроорганизмов и эффективность in vitro препарата «Сильверол».

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Иллюстрирована 5 таблицами и 24 рисунками. Библиографический список включает 159 источников, в том числе 29 иностранных авторов.

  1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» и в мараловодческих хозяйствах (ООО «Омега и К» Алтайского района и ОПХ «Новоталицкое» Чарышского района) Алтайского края в 2005-2009 годах.

Для выявления распространения пневмоний среди маралов было осмотрено 617 туш, из них 328 маралов-рогачей, 203 маралухи, 65 сайков и 21 саюшка.

При исследовании туши проводили осмотр внутренних органов (легких) на наличие изменений, характерных для заболеваний легких. Патологоанатомическую картину изучали методом полного вскрытия, органы исследовали по методике М.С. Жакова (1977).

В результате осмотра 617 туш было обнаружено 187 легких с различными патологическими изменениями. По данным бактериологических исследований 187 проб биоматериала легких маралов было выделено 302 культуры. Диагноз на туберкулёз был подтвержден в 56 случаях и изолировано 76 культур микроорганизмов, в 118 случаях выявлено 202 различных микроорганизма, у 36 маралов диагностировали диктиокаулез и идентифицировано 84 сопутствующих микроорганизма.

Биоматериал исследовали во Всероссийском научно-исследовательском институте пантового оленеводства, руководствуясь «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», разработанным департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 2002 года. Для исследования биоматериал готовили по методу Гона-Левинштейна-Сумиоши. Для выращивания микобактерий использовались среды Левинштейна-Йенсена и Финн-2. Биопробу ставили на 168 морских свинках, предварительно исследованных туберкулином. Опытные животные содержались в виварии ВНИИПО.

Материалом для микроскопических исследований служили патологически измененные участки легких животных, фиксированные в 30%-ном стерильном растворе глицерина.

Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств выделенных микроорганизмов осуществляли согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике бактериальных инфекций.

В научно-исследовательских экспериментах использовались следующие питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ, глюкозо-сывороточный и кровяной МПА, среда Гисса, Эндо, желточно-солевой агар и др. Патогенные свойства выделенных культур изучали на лабораторных животных. Заражение морских свинок и белых мышей проводили согласно регламентированным наставлениям.

Идентификацию выделенных культур микробов проводили по определителям Берджи (1997) и М.А. Сидорова и др. (1995).

Посмертно диагноз на гельминтозы устанавливали с помощью неполных гельминтологических вскрытий по Скрябину. Для изучения феномена персистирования микрофлоры в гельминтах проводили бактериологические исследования поверхности гельминтов и их гомогенизата. Диктиокаул помещали во флаконы и трехкратно отмывали 0,9% -ным раствором хлористого натрия.

Для бактериологического исследования использовали раствор хлористого натрия после второго отмывания. Эту жидкость вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г по 0,5 мл (по 4 мыши на смыв с диктиокаул от каждого животного) и в объёме 0,5 мл высевали на МПБ и МПА.

Отмытых диктиокаул (от 1 животного по 20 экземпляров) помещали в стерильные пробирки и заливали физиологическим раствором, содержащим стрептомицин и пенициллин по 1000 ЕД в 1 мл раствора. Диктиокаул выдерживали в холодильнике при 5С в течение 60 мин., а затем 5 раз отмывали стерильным физиологическим раствором. Отмытых гельминтов помещали в фарфоровую ступку и в стерильных условиях измельчали до образования гомогенной массы. Из гомогенизата производили высевы на МПБ и МПА.

Материалом для микроскопических исследований являлись кусочки пораженных участков лёгких, отобранных от выбракованных животных. В качестве фиксатора для гистологических исследований применяли 10%-ный нейтральный формалин с последующей заливкой в парафин. Гистологические препараты изготавливали на микротоме МС-2. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином (Меркулов Г.А., 1969; Волкова О.В. и др., 1982).

При проведении контроля разрабатываемых питательных сред использовали штаммы микроорганизмов St. aureus, St. epidermidis, Str. pneumoniae, E. coli, Enterobacter aerogenes, изолированных от маралов.

Для сравнения новой питательной среды использовали общепринятые среды – мясопептонный бульон и мясопептонный агар. Новую питательную среду для выращивания микроорганизмов готовили следующим образом: 200 г пантового шрота смешивали с 1 л дистиллированной воды, смесь помещали в экстрактор и экстрагировали при 98°С под давлением 1,5 атм. в течение 3 ч. Содержимое емкости фильтровали через ватно-марлевый фильтр с последующей стерилизацией при 120°С в течение 40 мин.. После стерилизации экстракт фильтровали вторично. Для приготовления 500 г среды брали 487,5 г экстракта (пантолизата) и смешивали с 5 г пептона, 2,5 г натрия хлорида и 5 г агар-агара (для приготовления плотной среды), доводили рН до 7,6. После установления рН среду кипятили в течение 30 мин., отстаивали, фильтровали, фасовали в пробирки и стерилизовали при 1 атм. в течение 30 мин..





Для стандартизации посева определенного количества микробных клеток в жидкую или плотную питательную среду использовали бактериальный стандарт мутности (ОСО 42-28-85-04) ГИСК им. Л.А. Тарасевича на 10 ед.

При этом определяли характер роста культур в жидких средах: рост микроорганизмов с помутнением среды, придонный рост, поверхностный рост, а также размер, форму, цвет, рельеф и структуру колоний на плотных средах.

Показатель сроков появления роста определяли по минимальному времени инкубации посевов, после которого во всех засеянных чашках или пробирках с питательной средой обнаруживался визуально видимый рост культуры.

Изучение бактериостатического и бактерицидного действия препарата «Сильверол®» in vitro на культуры микроорганизмов Str. pneumoniae, Str. pyogenes, Str. faecalis, St. aureus, St. epidermidis, St. saprophyticus, E. coli, Enterobacter cloacae, Actinomyces pyogenes, Pseudomonas aeruginosa осуществляли путем посева культур в пробирки с МПБ, ГСБ и на чашки Петри с МПА и ГСА с последующим внесением «Сильверола®» и культивировали в течение 5 дней при температуре 37°С.

В жидких питательных средах «Сильверол®» разводили в соотношениях от 1:3 до 1:100 (препарат к среде).

На плотные питательные среды (МПА, ГСА) в чашки Петри вносили по 1 мл суспензии культур микроорганизмов, приготовленных по оптическому стандарту мутности 1 млн кл/мл; после равномерного распределения суспензии, вносили «Сильверол®», соответственно, от 0,1 до 5,0 мг в 1 мл физиологического раствора.

Свойства культур изучали согласно регламентированным в ветеринарии методам.

Экономический ущерб рассчитывали согласно методическим рекомендациям «Методика расчета и оценки экономической эффективности противоэпизоотических мероприятий в пантовом оленеводстве» (2003).

3. Результаты исследований

3.1. Видовой состав, этиологическая роль условно-патогенной микрофлоры в возникновении и распространении неспецифических пневмоний у маралов

При исследовании легких от 328 маралов-рогачей у 109 (33,2%) диагностировали болезни легких различной этиологии: у 39 (11,9%) – туберкулез легких, 36 (10,9%) – диктиокаулез и у 34 (10,4%) – неспецифические пневмонии.

При исследовании легких от 203 маралух у 53 (26,1%) установили заболевание легких различной этиологии: у 17 (8,4%) – туберкулез легких, 36 (17,7%) – неспецифические пневмонии.

При исследовании легких от 65 сайков и 21 саюшек выявили поражение неспецифического характера у 25 (29%) животных.

В результате проведения бактериологических исследований 187 проб биоматериала легких маралов было выделено 302 культуры.

Диагноз на туберкулёз был подтвержден в 56 (30%) случаях. При посеве данного материала на общепринятые питательные среды было получено 76 культур, которые идентифицированы как: Str. pyogenes – 20 (26,3%), P. vulgaris – 15 (19,7%), St. epidermidis – 13 (17,1%), Actinomyces pyogenes – 10 (13,2%), Actinomyces candidus – 9 (11,9%), E. coli – 6 (7,9%), St. aureus – 3 (3,9%) (рисунок 1).

 Рисунок – 1 Процентное соотношение-0

Рисунок – 1 Процентное соотношение микроорганизмов при туберкулезе маралов: 1 – Str. pyogenes; 2 – P. vulgaris; 3 – St. epidermidis; 4 – Actinomyces pyogenes; 5 – Actinomyces candidus; 6 – E. coli; 7 – St. aureus

При бактериологическом исследовании 118 (50,8%) проб биоматериала туберкулёз был исключен и выявлено 202 микроорганизма: Str. pneumoniae – 45 (22,3%), St. aureus – 28 (13,8%), St. epidermidis – 22 (11%), E. coli – 21 (10,4%), Kl. pneumoniae – 17 (8,4%), Actinomyces actinoides – 17 (8,4%), Str. pyogenes – 13 (6,4%), Staphylococcus saprophyticus – 11 (5,4%), Actinomyces candidus – 10 (4,9%), Pseudomonas aeruginosa – 8 (4%), P. vulgaris – 7 (3,5%), Kl. oxytoca – 3 (1,5%) (рисунок 2). На основании этого ставили диагноз – неспецифическая пневмония.

  Процентное соотношение-1

Рисунок 2 – Процентное соотношение микроорганизмов

при неспецифической пневмонии маралов: 1 – Str. pneumoniae; 2 – St. aureus; 3 – St. epidermidis; 4 – E. coli; 5 – Kl. pneumoniae; 6 – Actinomyces actinoides; 7 – Str. pyogenes; 8 – St. saprophyticus; 9 – Actinomyces candidus; 10 – Pseudomonas aeruginosa; 11 – P. vulgaris; 12 – Kl. oxytoca

При бактериологическом исследовании 36 (19,2%) проб биоматериала паренхимы легких от животных пораженных диктиокаулами, выделено 84 культуры: E. coli – 29 (34,5%), P. haemolytica – 13 (15,5%), Str. faecalis – 12 (14,3%), St. citreus – 7 (8,3%), Salmonella – 6 (7%), Enterobacter cloacae – 5 (6%), Str. pyogenes – 5 (6%), Enterobacter аerogenes – 4 (4,8%), St. epidermidis – 3 (3,5%) (рисунок 3).

  Процентное соотношение-2

Рисунок 3 – Процентное соотношение микроорганизмов

при диктиокаулезе маралов: 1 – E. coli; 2 – P. haemolytica; 3 – Str. faecalis;

4 – St. citreus; 5 – Salmonella; 6 – Enterobacter cloacae; 7 –Str. pyogenes;

8 – Enterobacter аerogenes; 9 – St. epidermidis

В результате проведения бактериологических исследований 187 проб биоматериала были выделены 19 видов микроорганизмов, из них 6 (31,6%) обладали патогенными свойствами: Str. pneumoniаe, Str. pyogenes, St. aureus, P. haemolytica, Actinomyces pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella.

Бактериальными агентами, вызывающими и осложняющими течение пневмонии у пантовых оленей, в 11,5% случаев являлись Str. pneumoniae, 10,6% – Str. pyogenes, 7,6% – St. aureus в и 4,3% – P. haemolytica, Actinomyces pyogenes изолировали в 3,3%, а Pseudomonas aeruginosa и Salmonella – в 2% случаев, а на долю условно-патогенных микроорганизмов приходилось 58,7% от числа всех выделенных культур.

3.2. Ассоциации микроорганизмов в легких у маралов

Диагноз на туберкулёз был подтвержден в 56 случаях и изолировано 76 культур микроорганизмов после идентификации, из них в 13 (23,2%) пробах выделен только M. bovis, но чаще микроорганизмы встречались в следующих ассоциациях (рисунок 4).

  Ассоциации микроорганизмов-3

Рисунок 4 – Ассоциации микроорганизмов легких при туберкулезе маралов:

1 – M. bovis; 2 – M. bovis + Str. pyogenes + P. vulgaris; 3 – M. bovis + Str. pyogenes + E. coli + St. epidermidis; 4 – M. bovis + Actinomyces candidus; 5 – M. bovis + Str. pyogenes;

6 – M. bovis + Actinomyces pyogenes; 7 – M. bovis + Actinomyces candidus + P. vulgaris;

8 – M. bovis + Actinomyces pyogenes + St. aureus; 9 – M. bovis + Actinomyces pyogenes + St. epidermidis; 10 – M. bovis + St. epidermidis + P. vulgaris; 11 – M. bovis + St. epidermidis

В результате бактериологического исследования 118 (50,8%) проб биоматериала выделено 202 культуры микроорганизмов, из них в 44 пробах изолировано по одному виду микроорганизмов, в остальных пробах микроорганизмы встречались в следующих ассоциациях (рисунок 5):

  Ассоциации микроорганизмов в-4

Рисунок 5 – Ассоциации микроорганизмов в легких при неспецифических пневмониях маралов: 1 – Str. pneumoniae; 2 – Str. pneumoniae + E. coli; 3 – Kl. pneumoniae + St. aureus; 4 – Str. pneumoniаe + St. epidermidis; 5 – Actinomyces actinoides;

6 – St. aureus + St. epidermidis; 7 – Pseudomonas aeruginosa; 8 – Kl. pneumoniae; 9 – Str. pneumoniae + St. saprophyticus; 10 – Actinomyces candidus; 11 – Str. pneumoniae + Str. pyogenes; 12 – St. aureus + E. coli+ St. saprophyticus + St. epidermidis; 13 – St. aureus+ E. coli; 14 – Actinomyces actinoides + P. vulgaris; 15 – Actinomyces candidus + Str. pyogenes;

16 – Actinomyces actinoides+ Str. pyogenes; 17 – Kl. oxytoca + P. vulgaris.



Pages:   || 2 | 3 |
 

Похожие работы:







 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.