авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Антимикробная активность и лечебная эффективность диоксигена при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ЛАВРИЩЕВ ПАВЕЛ ЕВГЕНЬЕВИЧ

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

ДИОКСИГЕНА ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ И САЛЬМОНЕЛЛЁЗЕ ПОРОСЯТ

16.00.03. – ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата ветеринарных наук

Воронеж – 2009

Работа выполнена в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Бригадиров Юрий Николаевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Скворцов Владимир Николаевич

доктор ветеринарных наук

Жуков Иван Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная

академия имени профессора И.И. Иванова»

Защита состоится «____»______________2009 года в ________ часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.02 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» по адресу: 394087, г.Воронеж, ул. Ломоносова, 114/б

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии».

Автореферат разослан «______» ________________ 2009г.

Учёный секретарь

диссертационного совета Близнецова Г.Н.

  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение населения нашей страны качественной продукцией животноводства является стратегически важной задачей. Свиноводство, как наиболее скороспелая отрасль, представляется перспективным в этом отношении.

Одной из актуальных ветеринарных проблем, снижающей рентабельность животноводства РФ, остаются желудочно-кишечные болезни молодняка. Они широко распространены во всех странах мира с развитым свиноводством и занимают ведущее место в патологии свиней и наносят огромный экономический ущерб (С.И. Прудников с соавт., 1991; А.Г. Шахов, 2008; Е.В. Колотова, 2008).

В последние годы многочисленными исследованиями в нашей стране и за рубежом установлено, что болезни молодняка чаще возникают на фоне неблагоприятного воздействия на животных многочисленных технологических стресс-факторов, снижающих общую неспецифическую резистентность организма, имеют инфекционную природу (В.П. Урбан с соавт., 1984; М.А. Сидоров, 1991; А.Г.Шахов с соавт., 1995; В.П. Иноземцев с соавт., 1997; В.П. Новгородов, 1998; С.И. Прудников, 2000; А.Г. Шахов с соавт., 2001; 2007; 2008 и др.).

Среди них значительный удельный вес приходится на колибактериоз и сальмонеллёз (П.И. Притулин, 1970, 1975; В.Ф. Романенко, 1984; С.И. Прудников, 1989; Б.Т. Артёмов с соавт., 1989; А.Г. Шахов с соавт., 2002; 2008; С.И. Джупина, 2001; E.A. Gibson, 1969; P.J. Fedorka-Cray et al., 1998; и др.). Несмотря на внушительный промежуток времени со дня открытия этиологической роли кишечной палочки и сальмонеллы в развитии диарейного синдрома у новорожденных поросят и внедрения массовых вакцинаций, заболевания, вызываемые этими возбудителями, по-прежнему остаются одной из наиболее острых проблем в ветеринарии.



Множественная серовариабельность эшерихий и сальмонелл в этиологии желудочно-кишечных заболеваний у молодняка обеспечивает длительную их циркуляцию в организме животных, поддерживаемую комплексом предрасполагающих хозяйственных факторов, и создаёт трудно преодолимый барьер для конструирования эффективных средств специфической защиты при инфекционных диареях животных, а иммунопрофилактика факторных инфекций без создания надлежащих условий содержания и кормления животных является мало эффективной.

В связи с этим, в комплексе мер борьбы с колибактериозом и сальмонеллёзом поросят наряду с применением средств специфической профилактики, проведением технологических и ветеринарно-санитарных мероприятий, необходимо использование препаратов, обладающих антимикробным действием в отношении кишечно-паратифозной группы бактерий. К ним относится новый комплексный препарат «Диоксиген», содержащий в своём составе диоксидин (10мг/мл), гентамицина сульфат (40мг/мл).

Таким образом, актуальность проведения работ, связанных с изучением вопросов эпизоотологии и поиском новых антимикробных препаратов при желудочно-кишечных болезнях поросят бактериальной этиологии, с целью повышения эффективности ветеринарных мероприятий, несомненна.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение этиологии желудочно-кишечных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах и разработка комплексного антимикробного препарата диоксиген при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.

Для реализации цели исследований поставлены следующие задачи:

  1. Изучить эпизоотическую ситуацию и этиологическую структуру желудочно-кишечных болезней поросят в специализированных свиноводческих хозяйствах Воронежской, Липецкой, Орловской и Волгоградской областей.
  2. Изучить in vitro антимикробную активность диоксигена в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят.
  3. Изучить влияние диоксигена на течение эшерихиозной и сальмонеллёзной инфекции белых мышей.
  4. Изучить лечебную эффективность диоксигена при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.
  5. Провести производственные испытания диоксигена и определить его экономическую эффективность.

Научная новизна. Впервые изучены заболеваемость поросят желудочно-кишечными болезнями в специализированных хозяйствах Центрально-чернозёмного и других регионов РФ, антимикробная активность диоксигена и составляющих, его влияние на течение эшерихиозной и сальмонеллёзной инфекции белых мышей, определены оптимальные соотношения компонентов в комплексном препарате, терапевтическая и экономическая эффективность диоксигена при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.

Практическая значимость и внедрение. Результаты исследований расширяют и углубляют научное представление об этиологии желудочно-кишечных болезней свиней. Для терапии больных поросят разработан новый комплексный антимикробный препарат диоксиген, обладающий выраженным антимикробным действием в отношении эшерихий и сальмонелл.

Практическая значимость предложений, вытекающих из проведённой работы, подтверждена местной комиссионной апробацией – акты производственных испытаний за 2006, 2007 годы.

Полученные результаты исследований вошли в разработанную и утверждённую нормативно-техническую документацию на препарат диоксиген-АФ (СТО 10590965 – 0009 – 2008) и инструкцию, утверждённую заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за № ПВР–2 – 1.8/02137 от 22.05.2008 г.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на первом съезде ветеринарных фармакологов России, Воронеж 21-23 июня 2007года, международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» 17-19 сентября 2008 года, г.Воронеж; заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» протокол №2 от 06.02.2008 г.

Публикации материалов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 статей, из них 1 в издании, рекомендованном ВАК РФ для публикации работ кандидатских и докторских диссертаций. Получен патент на изобретение № 2351343 «Способ лечения сальмонеллёза у молодняка сельскохозяйственных животных», зарегистрированный в Государственном реестре изобретений РФ 10.04.2009г.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Эпизоотическая ситуация и этиологическая структура возникновения желудочно-кишечных болезней поросят в специализированных хозяйствах и факторы, предрасполагающие их развитию.
  2. Антимикробная активность диоксигена в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят.
  3. Лечебная эффективность комплексного препарата диоксиген при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 218 источников, из них 29 на иностранных языках. Работа содержит 26 таблиц и 13 рисунков.

  1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научные исследования по решению поставленных задач выполнены в 2005 – 2008 годах в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук в соответствии с планом научно-исследовательских работ и государственными темами по заданиям 08.04.01.02 «Изучить этиологическую структуру желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят в крупных животноводческих хозяйствах с применением современных методов исследований» и 08.04.01.05. «Разработать новый эффективный препарат диоксиген для лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных».

Изучение эпизоотической ситуации по желудочно-кишечным болезням поросят и их этиологической структуры проведено в специализированных свиноводческих хозяйствах Воронежской, Липецкой, Волгоградской и Орловской областей, а лабораторные исследования проведены в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии ВНИВИПФиТ.

Экспериментальная часть работы выполнена в 2005 – 2008 годах на базе отделов микробиологии, вирусологии и иммунологии, физико-химических методов исследований, отдела клинической биохимии, фармакологии и токсикологии ВНИВИПФиТ. Научно-производственные опыты проведены в крупных свиноводческих хозяйствах Воронежской области (ООО «Вишневское» Верхнехавского района, СХА МХП «Николаевское» Аннинского района), ЗАО «Краснодонское» Иловлинского района Волгоградской области, ОАО «Русская АПК» Лебедянского района Липецкой области, ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» Ливенского района Орловской области с различной технологией и объёмом производства.

Оптимальное соотношение гентамицина и диоксидина в диоксигене в комбинациях – 3,5%:1,5%; 4%:1% и 4,5%:0,5% определяли путем сравнения антимикробной активности изучаемых композиций с антимикробной активностью гентамицина и диоксидина.

Изучение чувствительности культур референтных и эпизоотических штаммов потенциальных возбудителей желудочно-кишечных болезней к диоксигену in vitro проведено на жидких и плотных питательных средах методом серийных разведений, описанным в справочнике «Лабораторные исследования в ветеринарии», издательство М., «Агропромиздат», 1986., с.270 – 278. Минимальная бактериостатическая концентрация препарата (МБсК) определялась по признакам роста микроорганизмов в мясо-пептонном бульоне (МПБ). Минимальная бактерицидная концентрация (МБсК) устанавливалась путём высева четырёх последовательных разведений препарата в сторону увеличения концентрации от пробирки, в которой обнаружен рост микроорганизмов на плотные питательные среды (мясопептонный агар - МПА). Инкубация в термостате при 37° С длилась 18 – 24 часа.

Изучение фармакокинетики, субхронической токсичности и остаточных количеств диоксигена проводили на базе отдела фармакологии ГНУ ВНИВИПФиТ совместно с Михайловым А.А. с использованием общепризнанных методик в опытах на поросятах.

Для изучения влияния диоксигена на течение эшерихиозной (E. coli) и сальмонеллёзной (Salmonella cholerae suis и Salmonella dublin) инфекции были подобраны белые мыши с массой тела 27 – 33 г, проверенные на носительство эшерихий и сальмонелл.

В предварительных опытах определяли минимальную летальную дозу (ЛД-50) суточных бактериальных культур эшерихий и сальмонелл. Физиологическим раствором смывали суточную агаровую культуру, определяли концентрацию микробных клеток по оптическому стандарту мутности, доведя её до 1 млн. микробных клеток в 1 мл, а затем вводили белым мышам 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25 мл, на каждую дозу брали по 4 животных. В основной опыт было взято 60 белых мышей (3 группы по 16 животных и 3 группы по 4 животных – контроль к каждой бактериальной культуре). Лечение мышей начинали через 6 часов после заражения.





Диоксиген вводили внутримышечно при помощи шприца и иглы из расчёта 100 мкг на голову 2 раза в день в течение 5 суток.

За животными вели ежедневное клиническое наблюдение до гибели или в случае выздоровления в течение 10 дней. Для определения специфичности гибели павших мышей вскрывали, проводили бактериологические исследования крови сердца, печени, почек, селезёнки. Индекс специфической защиты диоксигена определяли по формуле В.Д. Белякова (1961).

Клинические исследования проводили согласно требованиям к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т. Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных. Для исключения случайных результатов опыты проводили в нескольких повторностях.

Изучение влияния разного уровня иммунного статуса на возникновение болезней желудочно-кишечного тракта проведено в двух сериях опытов на 3 – 5 дневных клинически здоровых животных, от которых дважды брали кровь для проведения морфологических, биохимических и иммунологических исследований при развитии клинических признаков диарейного синдрома (16 –19 и 33 – 35 дни) соответственно.

Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «ABX Micros 60», биохимические исследования крови – на анализаторе «Hitachi – 902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных (2005)». Определение микроэлементов проводили на атомно-адсорбционном спектрофоометре – 6500. Комплементарную активность сыворотки крови (КАСК) проводили по Г.Ф. Вагнеру (1963), лизоцимную активность (ЛАСК) – по К.А. Кагромановой и З.В. Ермольевой (1966), бактерицидную активность (БАСК) сыворотки крови по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ), фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ) – по В.С. Гостеву (1950) (С.И. Плященко с соавт., 1979), количество иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (1965). Концентрацию общего белка – рефрактометрически, белковые фракции – по Оллу и МакКорду в модификации С.А. Карпюка (1962).

Показатели, отражающие состояние системы ПОЛ-АОЗ: содержание малонового диальдегида, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы и каталазы, активность супероксиддисмутазы (Т.В. Сирота, 1999) определяли на спектрофотометре «Specol - 340», а средние молекулы по О.Л. Гребневой с соавт. (2006).

Изучение терапевтической эффективности диоксигена проведено на больных колибактериозом и сальмонеллёзом поросятах. Поросята содержались в типовых помещениях в станках безвыгульно. Зоогигиенические условия не всегда отвечали требуемым нормативам (загазованность, неудовлетворительная освещённость и др.). Рационы сбалансированы по основным питательным веществам – витаминам, макро- и микроэлементам, согласно существующим нормам.

Диагноз на колибактериоз и сальмонеллёз устанавливали комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований, проведённых в соответствии с «Методическими рекомендациями по выделению и идентификации условно- патогенных энтеробактерий при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных» (1990), «Методическими указаниями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемых патогенными энтеробактериями» (1999).

Вскрытие павших животных и регистрацию морфологических изменений в органах и тканях проводили в соответствии с методикой, принятой в морфологии (А.В. Жаров с соавт., 2000).

Для бактериологического исследования от вынужденно убитых и павших поросят отбирали паренхиматозные органы, мезентериальные лимфоузлы, тонкий отдел кишечника, трубчатую кость.

Патологический материал исследовали не позднее 2 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на МПБ с глюкозой, МПА с сывороткой крови лошади, МПА с 5% крови барана и дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина или Плоскирева). После 18 – 24 инкубации в термостате при температуре +37°С учитывали характер роста микроорганизмов. По 3 – 5 типичных колоний бактерий отсевали на скошенный МПА, МПА с 10%- ной сывороткой крови и 1% глюкозы для дальнейшего изучения.

У выделенных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные и культурально-биохимические свойства. Патогенность выделенных культур определяли на белых мышах. Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью определителя D. Bergey’s (1974) и М.А. Сидорова с соавт., (1995). У части выделенных культур микроорганизмов определяли чувствительность к антибиотикам методом индикаторных бумажных дисков и методом серийных разведений.

Серологическую типизацию эшерихий и сальмонелл проводили в реакции агглютинации с О- и Н- агглютинирующими сальмонеллёзными сыворотками и О- коли сыворотками согласно «Наставлению по применению сывороток сальмонеллёзных О- комплексных и О- и Н- агглютинирующих для идентификации сальмонелл в реакции агглютинации» (1990) и «Наставлению по применению сывороток агглютинирующих эшерихиозных к адгезивным антигенам К88, К99, 987Р, F41 и А20» (1997).

Исследование образцов фекалий от поросят после лечения их диоксигеном на качественный и количественный состав микрофлоры проводили по методике, описанной И.Н. Блохиной с соавт. (1990).

Для количественной характеристики аэробной микрофлоры проводили дозированный посев на пластинчатые среды из четырёх диагностически значимых разведений исходного материала (10-4, 10-5, 10-6, 10-8). Разведения готовили в пяти бактериологических пробирках. В две пробирки наливали по 9,9 мл изотонического раствора хлорида натрия (для разведений 10-3, 10-8), в три пробирки – по 4,5 мл (для разведений 10-4, 10-5) и последовательно переносили взвесь из предыдущего разведения в последующее. Все посевы инкубировали в термостате при +37±10С. Для количественной характеристики условно-патогенных энтеробактерий подсчитывали колонии каждого типа на пластинчатых дифференциально-селективных средах (Эндо, 5%-ный кровяной агар, Плоскирева 10-4). Количество выросших колоний умножали на соответствующее разведение (из которого проводили высев на чашку) и на 10, если высевали по 0,1 мл.

Экономическую эффективность применения препарата определяли в соответствии с «Методическими указаниями для выполнения курсовой работы по организации и экономике ветеринарного дела» (Б.Т. Артёмов с соавт., 1991).

Статистическая обработка полученных данных проведена с помощью компьютера с процессором Intel Core 2 Quad, пакета программного обеспечения Microsoft Office 2007 и программы «ExStat».



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 

Похожие работы:










 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.