авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Оценка качества и стандартизациякомпозиций на базе диквертина

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

САВВАТЕЕВ АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ
КОМПОЗИЦИЙ НА БАЗЕ ДИКВЕРТИНА

15.00.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук

МОСКВА – 2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук Белобородов Владимир Леонидович

Официальные оппоненты:

профессор, доктор химических наук Харитонов Юрий Яковлевич

профессор, доктор фармацевтических наук Берлянд Александр Семенович

Ведущая организация:

Институт стандартизации и контроля лекарственных средств ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора

Защита состоится «____»_______________2007 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д.208.040.09 при Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу: 121019, г. Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан «____» __________2007 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д.208.040.09

доктор фармацевтических наук, профессор Садчикова Наталья

Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Для России с ее богатейшими растительными ресурсами характерен широкий масштаб производства фитопрепаратов. В состав многих из них входят флавоноидные соединения.

Относительно недавно этот список пополнился препаратом Диквертин®, обладающим антиоксидантными и капилляропротекторными свойствами. Растительным источником диквертина служит древесина лиственницы. Состав его представлен тремя флавоноидными соединениями при подавляющем количестве (90% и выше) одного из них – дигидрокверцетина.

Банк присущих диквертину фундаментальных фармакологических свойств обеспечивает ему базисный статус для создания на его основе препаратов, комбинированных с другими лекарственными средствами с целью оптимизации отдельных видов фармакологического действия. В последние годы проведены совместные исследования сотрудниками НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН и кафедры органической химии ММА им. И.М. Сеченова по разработке принципиально новой группы гемореологических лекарственных препаратов. Известно, что гемореологические нарушения осложняют течение таких заболеваний, как ишемическая болезнь сердца, артериальная гипертензия и др.

Препарат, сочетающий диквертин и аскорбиновую кислоту, зарегистрирован как ангиопротекторное лекарственное средство Асковертин®. Препарат, сочетающий диквертин и ацетилсалициловую кислоту (под рабочим названием Саливертин), прошел стадию доклинического изучения с выявлением антитромбоцитарного и гемореологического действия. Cочетание диквертина с двумя компонентами – аскорбиновой кислотой и -каротином – используется как биологически активная добавка к пище «Каровертин».



Появление новых комбинированных препаратов в силу усложнения состава действующих веществ, существенно различающихся по свойствам, ставит задачу поиска оптимальных путей их фармацевтического анализа.

Актуальность настоящей работы определяется необходимостью совершенствования на современном физико-химическом уровне стандартизации базового фитопрепарата диквертина, а также создания системы стандартизации новых комбинированных препаратов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлась разработка методологического подхода к оптимизации хроматографического анализа в качестве сквозного унифицированного метода стандартизации как базового препарата диквертина, так и комбинированных препаратов на его основе.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

  • модификация и унификация методик анализа диквертина – от растительного сырья, субстанции, стандартного образца до лекарственной формы;
  • совершенствование методик спектрального (УФ, ИК, ЯМР) анализа стандартного образца дигидрокверцетина;
  • разработка методик хроматографического анализа с учетом специфичности состава комбинированных препаратов – асковертина, саливертина и БАД – каровертина;
  • валидация предлагаемых методик на основе изучения соответствующих валидационных характеристик;
  • включение разработанных методик в фармакопейную документацию.

Научная новизна. Предложен единый методический подход к стандартизации комбинированных препаратов на базе диквертина путем сквозного использования метода ВЭЖХ в сочетании со специфичностью пробоподготовки.

Определены оптимальные хроматографические условия эффективного разделения флавоноидных компонентов диквертина и аскорбиновой кислоты, компонентов диквертина и ацетилсалициловой и салициловой кислот в составе комбинированных препаратов – асковертина и саливертина соответственно. Разработаны селективные и воспроизводимые методики качественного и количественного анализа действующих веществ комбинированных препаратов.

Предложены спектральные (УФ-, ИК-, ЯМР 1Н, ЯМР 13С) и хроматографические критерии подлинности и оценки качества стандартного образца дигидрокверцетина.

Разработан оригинальный комбинированный способ использования в определенной последовательности методов твердофазной экстракции, ВЭЖХ и спектрофотометрии для анализа разнополярных компонентов каровертина.

Впервые разработана система стандартизации лекарственного растительного сырья – древесины лиственницы цельной и измельченной.

Практическая значимость. Методики анализа действующих веществ препаратов диквертина, асковертина и саливертина валидированы и унифицированы с целью определения таких фармакопейных показателей, как подлинность, родственные соединения, посторонние примеси, растворение, однородность дозирования, количественное определение. Разработанные аналитические методики включены в зарегистрированные фармакопейные статьи: Лиственницы древесина цельная, измельченная «ангро»; Дигидрокверцетин–стандартный образец; Диквертин субстанция; Диквертин таблетки; Асковертин таблетки; в проект фармакопейной статьи Саливертин таблетки; в Технические условия на БАД «Каровертин».

Предложенные методики апробированы на производственных сериях таблеток диквертина, асковертина и саливертина.

Основные положения, выносимые на защиту.

  • Результаты изучения хроматографических характеристик флавоноидных компонентов диквертина. Усовершенствованная методика стандартизации и оценки качества диквертина методом ВЭЖХ.
  • Спектральная (УФ-, ИК-, ЯМР 1Н и ЯМР 13С) и хроматографическая характеристика дигидрокверцетина как стандартного образца и оценка его индивидуальности и степени чистоты.
  • Оптимальные хроматографические параметры ВЭЖХ для одновременного качественного и количественного анализа аскорбиновой кислоты и флавоноидов диквертина. Валидированная и унифицированная для определения ряда фармакопейных показателей методика стандартизации препарата асковертина методом ВЭЖХ.
  • Оптимальные хроматографические параметры ВЭЖХ для одновременного качественного и количественного анализа ацетилсалициловой кислоты, примеси салициловой кислоты и флавоноидов диквертина. Валидированная и унифицированная для определения фармакопейных показателей методика стандартизации желудочно-резистентных таблеток саливертина методом ВЭЖХ.
  • Комплексный аналитический подход (твердофазная экстракция, ВЭЖХ, спектрофотометрия) к анализу компонентов каровертина (аскорбиновая кислота, диквертин, -каротин).
  • Стандартизация лекарственного растительного сырья – древесины лиственницы цельной, измельченной «ангро».
  • Результаты изучения возможности использования разработанных методик в анализе опытно-промышленных серий асковертина и лабораторных серий саливертина.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на IV, VI, IX и X международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Великий Новгород 2001, С-Пб 2002, 2005 и 2006), на VI Симпозиуме по фенольным соединениям (Москва 2004) на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры органической химии ММА им. И.М. Сеченова: «Физико-химические основы стандартизации и биотрансформации лекарственных средств и биологически активных добавок к пище». Номер госрегистрации 01200110547.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 0000 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, двух глав, отражающих собственные экспериментальные исследования, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 000 таблицами, 000 рисунками и 000 схемами. Библиографический список включает 124 отечественных и 64 зарубежных источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Характеристика основных объектов и методов исследования

Объектами настоящего исследования являлись образцы древесины лиственницы сибирской и л. даурской; дигидрокверцетин – стандартный образец; биофлавоноидный комплекс диквертин и одноименный препарат «Диквертин»; композиции на базе диквертина, лежащие в основе создаваемых оригинальных комбинированных препаратов. Доминирующий компонент диквертина (90% и более) – дигидрокверцетин. В состав диквертина входят также родственные флавоноиды дигидрокемпферол и нарингенин.

Препарат «Асковертин» является комбинацией диквертина и аскорбиновой кислоты (таблетки, содержащие 0,02 г диквертина в пересчете на 100% содержание дигидрокверцетина и 0,05 г аскорбиновой кислоты). Композиция диквертина и ацетилсалициловой кислоты лежит в основе разрабатываемого препарата «Саливертин» (таблетки покрытые желудочно-резистентной оболочкой, содержащие 0,01 г диквертина в пересчете на 100% содержание дигидрокверцетина и 0,05 г ацетилсалициловой кислоты). Композиция диквертина, аскорбиновой кислоты и каротина является основой БАД «Каровертин» (таблетки, содержащие 0,01 г диквертина в пересчете на 100% содержание дигидрокверцетина, 0,05 г аскорбиновой кислоты и 0,001 г каротина). В исследование включались модельные смеси, субстанции и таблетки одноименных препаратов.

Основным аналитическим методом, используемым в работе, являлся метод ВЭЖХ. Для идентификации и анализа объектов исследования привлекались методы УФ-, ИК-, ЯМР 1Н и ЯМР 13С спектроскопии. Для фракционирования многокомпонентных смесей на стадии пробоподготовки применялась твердофазная экстракция в ее современном техническом исполнении.

2. Методический подход к анализу многокомпонентных смесей на базе диквертина

В состав биофлавоноидного комплекса и вышеуказанных композиций входят разнохарактерные с химической точки зрения соединения: от наиболее полярной и гидрофильной аскорбиновой кислоты, полярных и менее гидрофильных флавоноидов до неполярного и гидрофобного каротина. Эффективное разделение компонентов смеси является основой для их аналитического определения.

Многокомпонентность состава комбинированных препаратов обусловила поиск оптимальных способов анализа и стандартизации их действующих веществ. Методические пути анализа многокомпонентных смесей, использованные в настоящей работе, представлены на схеме 1.

Схема 1. Алгоритм разработки методик анализа смесей на базе диквертина

Унификация методик качественного и количественного анализа композиций осуществлялась таким образом, чтобы они служили единой аналитической основой для определения фармакопейных показателей качества препарата: подлинность, посторонние примеси, растворение, однородность дозирования, количественное определение. Большое значение уделено валидации методик, дающей высокую степень уверенности в том, что разработанная методика приводит к результатам, отвечающим установленным критериям приемлемости.





3. Физико-химическая характеристика дигидрокверцетина как стандартного образца

В фармацевтическом анализе для получения точных (правильных) и воспроизводимых результатов анализа ЛС решающее значение имеет применение высокоочищенных и хорошо охарактеризованных стандартных образцов.

Стандартный образец дигидрокверцетина (СО ДГК), получаемый из древесины лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и л. гмелина, или л. даурской (Larix gmelinii (Rupr.) Rupr., синоним Larix dahurica Turcz.), был разработан в 1996 г. совместно кафедрой органической химии ММА им. И.М. Сеченова и ООО «Флавир» г. Иркутск. За прошедший период проведена работа по совершенствованию способа выделения ДГК из экстракта древесины с использованием ВЭЖХ в полупрепаративном варианте. Экспериментальная работа по получению СО ДГК проведена в ООО «Флавир», г. Иркутск.

Одна из целей настоящей работы заключалась во всесторонней характеристике физико-химических свойств СО ДГК, доказательстве его строения и степени чистоты.

Индивидуальность и стереохимическое строение ДГК доказывалось с помощью хроматографических (ВЭЖХ) и спектральных (УФ-, ИК-, ЯМР 1Н и ЯМР 13С) методов.

Хроматографический анализ проводили с использованием двух типов сорбентов – октадецилсилановых и цианопропилсилановых – как в изократическом, так и в градиетном режимах элюирования. Подвижной фазой (ПФ) служили смеси ацетонитрила или метанола с водными растворами кислоты (фосфорной, трифтороуксусной или уксусной) с рН 3,0 – 3,5. Создание такой кислотности среды необходимо для подавления диссоциации фенольных гидроксильных групп. Детектирование осуществляли на аналитических длинах волн: при 230 нм для обнаружения соединений с короткой хромофорной системой; при 290 нм – ДГК и флаванонов с близкой структурой и при 370 нм – возможных примесей флавонов. Широкое варьирование условий производили с целью выявления возможных примесей. В качестве оптимальных нами предложены следующие условия ВЭЖХ анализа ДГК: колонка LiChrosper RP-18 5 мкм (250 х 4,6 мм); ПФ: А – ацетонитрил, Б – 2% уксусная кислота. Градиентное элюирование А : Б: 0–4 мин 35 : 65 об.%; 4,1–10 мин 70 : 30 об.%. Скорость потока – 1 мл/мин, аналитическая длина волны 290 нм. В данных условиях эффективность колонки по пику ДГК составляет 5450 т.т.; коэффициент емкости k – 1,6; фактор симметрии пика As – 0,9–1,05; относительное стандартное отклонение площади пика S 0,98%. На всех хроматограммах образцов ДГК содержался единственный пик практически со 100% степенью чистоты.

Степень чистоты ДГК подтверждалась также методом ЯМР. Спектры ЯМР 1Н и ЯМР 13С регистрировали в дейтерированных растворителях – метаноле и диметилсульфоксиде. Отнесение сигналов, их мультиплетность и константы спин-спинового взаимодействия спектра ЯМР 1Н ДГК в ДМСО-D6 в области от 0,5 до 12 м.д. представлены в табл. 1. Суммарная интенсивность всех указанных сигналов соответствует 12 протонам молекулы ДГК С15Н12О7.

Наряду с сигналами протонов, представленных в табл. 1, наблюдаются сигналы растворителя: ДМСО-D6 (квинтет остаточных протонов дейтерированных метильных групп при 2,50 м.д.) и уширенный сигнал воды при 3,34 м.д.; а также незначительные примесные сигналы – уширенный синглет при 1,25 м.д. (0,03 массовых%) и синглет при 2,07 м. д. (0,007 массовых%), который можно отнести к ацетону, используемому в технологическом цикле. В целом, на основании анализа методами ВЭЖХ и ЯМР можно оценить степень чистоты образцов ДГК не ниже 99,96%.

Также проведено отнесение всех сигналов в спектре ЯМР 13С. Химические сдвиги ядер 13С ДГК в ДМСО-D6 (, м.д.): 71,62 (С-3), 83,10 (С-2), 95,02 (С-8), 96, 03 (С-6), 100,53 (С-4а), 115,17 (С-5/), 115,40 (С-2/), 119,41 (С-6/), 128,08 (С-1/), 144,98 (С-3/), 145,81 (С-4/), 162,6 (С-8а), 163,37 (С-5), 166,83 (С-7), 197,78 (С-4).

Таблица 1. Химические сдвиги () и константы спин-спинового взаимодействия (J) в ЯМР 1Н спектре СО ДГК в ДМСО-D6

(д,д – дублет дублетов, д – дублет, с – синглет, АВ – АВ-система)

Данные спектра Кольцо С Кольцо А Кольцо В Протоны ОН групп при:
Н-2 Н-3 Н-6 Н-8 Н-2/ Н-5/ и Н-6/ С-5 С-3 С-7 С-3/ С-4/
, м. д. 4,973 4,483 5,898 5,848 6,868 6,72 – 6,76 11,87 5,712 10,78 8,98 8,93
J, Гц 11,1 6,1 и 11,1 2,0 2,0 8,2 6,1
Сигнал д д,д д д с АВ с д с с с


Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 

Похожие работы:









 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.