авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Разработка методов анализа индикаторных компонентов в фиточаях и биологически активных добавках на их основе

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ВЛАСОВ АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ В ФИТОЧАЯХ И биологически активных добавках НА ИХ ОСНОВЕ

15.00.02. Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

МОСКВА 2006

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова и ГУ НИИ питания РАМН

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук

Раменская Галина Владиславовна

доктор химических наук

Эллер Константин Исаакович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук

Сорокина Алла Анатольевна

кандидат фармацевтических наук

Титова Анна Васильевна

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт

лекарственных и ароматических растений РАСХН

Защита состоится «18»  декабря 2006 г. в  14 часов на заседании диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова (119019, г. Москва, Никитский бульвар, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49

Автореферат разослан «_____»_________________2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.040.09,
доктор фармацевтических наук, профессор Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Существование большого числа сборов, фиточаев и биологически активных добавок к пище, представляющих собой многокомпонентные смеси растительного сырья делает все более актуальной проблему определения их безопасности и подлинности, а также разработки достоверных критериев идентификации. [В.А. Тутельян, Б.П. Суханов, 1999 г.; Т.Л. Пилат, А.А. Иванов, 2002 г.]

Необходимость определения незначительных концентраций действующих веществ на фоне сложного матрикса БАД предъявляет высокие требования к селективности и чувствительности методов анализа.

Решение этих задач затруднено в связи с отсутствием в большинстве случаев достоверных методов контроля маркеров в составе комплексных БАД. Большинство существующих не хроматографических методов определения индикаторных компонентов растительных БАД неселективные, трудоемки и могут в отдельных случаях приводить к получению ложноположительных результатов, а также к искажению количественных данных.

Одними из наиболее перспективных методов для решения этих задач являются хроматографические методы, сочетающие высокую эффективность разделения компонентов БАД с избирательностью и чувствительностью детектирования. Во многих зарубежных фармакопеях существует тенденция к применению современных методов на основе ВЭЖХ. [USP 29; BP 2004; JP 14]



В виду того, что большинство продуктов вторичного метаболизма растений существуют в виде относительно полярный гликозидов или агликонов полифенольной природы, предпочтительно определение в режиме распределительной обращено фазовой хроматографии, обеспечивающей разделение как по количеству функциональных групп, так и в пределах одного гомологического ряда.

Особенно актуальным является идентификация индивидуальных биологически активных веществ с помощью современных хроматографических методов, в случае оценки качества и стандартизации продуктов, включающих многокомпонентное растительное сырье и особенно экстракты.

Применение современных методов разделения с достоверной идентификацией индикаторных компонентов позволяет точнее установить корреляцию между содержанием вещества, качеством препарата и потенциальной биологической или фармакологической активностью.

В результате анализа составов фиточаев и БАД, существующих в настоящее время на рынке и представленных для государственной регистрации, а также изучения нормативно-методической базы по стандартизации растительного сырья, были определены наиболее широко и часто используемые ингредиенты многокомпонентных смесей, требующие разработки новых методов оценки подлинности и стандартизации.

Все вышесказанное определило цель и задачи исследования.

Цель и задачи исследования

Цель: разработать методики анализа индикаторных компонентов в фиточаях и БАД на их основе, пригодные для рутинного контроля качества.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

  • Изучить физико-химических свойства индикаторных компонентов.
  • Разработать методики пробоподготовки фиточаев и БАД, обеспечивающие наибольшую эффективность экстракции, характеризующиеся невысокой трудоемкостью.
  • Подобрать оптимальные хроматографические условия для определения индикаторных компонентов на фоне сложного матрикса.
  • Оценить параметры пригодности хроматографических систем.
  • Разработать методики количественного определения индикаторных компонентов в фиточаях.
  • Оценить метрологические характеристики разработанных методик.
  • Апробировать разработанные методики на образцах растительного сырья, экстрактов растительного сырья, фиточаях и БАД на его основе.

Научная новизна. Изучены хроматографические свойства катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты.

Впервые изучены спектры флуоресценции арбутина, гидрохинона, салидрозида.

Разработаны оригинальные методики идентификации и количественного определения индикаторных компонентов (для катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты) в многокомпонентных фиточаях и БАД на их основе.

Практическая значимость

Методики идентификации и количественного определения индикаторных компонентов (катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислота, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты) внедрены и используются при эксертизе в процессе государственной регистрации фиточаев и БАД в ГУ НИИ питания РАМН, ФГУЗ Федеральный центр гигиены и эпидемиологии.

Подготовлен проект дополнения к «Руководству по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище». – М.2004,Р.4.1.1672-03., включающее все разработанные нами методики.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Конференции молодых ученых «Окружающая среда и здоровье» (апрель 2005 г., Суздаль); на научных конференциях кафедры фармацевтической химии ММА им. И.М.Сеченова (2003–2006 гг., Москва); на семинаре «Аналитическая химия в контроле безопасности, качества и подлинности пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище» AnalyticaExpo-2006, Москва (апрель 2006 г., Москва), конгрессе «Фитофарм 2006» (июнь 2006 г., Санкт-Петербург)

Публикация результатов исследования. По результатам проведенных исследований опубликовано 13 печатных работ.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической химии фармацевтического факультета ММА им. И. М. Сеченова «Совершенствования контроля качества лекарственных средств» (№ государственной регистрации 01.200.110545).

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Разработанные методики хроматографического анализа и пробоподготовки индикаторных компонентов (катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты).
  2. Результаты определения содержания индикаторных компонентов в растительном сырье и продуктах на его основе (фиточаях, БАД, лекарственных препаратах – всего 180 образцов).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы из 109 названий (65 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 42 таблицами и 25 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Оборудование и реактивы

Для проведения исследований была использована система: «Agilent 1100» (США) с УФ-спектрофотометрическим детектором на диодной матрице (УФ-ДМ), флуориметрическим детектором (ФЛД), масс-спектрометрическим детектором «Agilent» 1100 series LC/MSD Trap SL family (США), в качестве неподвижной фазы использовались хроматографические колонки разных производителей: Zorbax Eclipce XDB C8 150х4.6 mm (США), Phenomenex Luna 5 C18(2) 250 х 4,6 мм, США, Agilent Hypersil AA-ODS 200 х 2,1 мм, США. Для спектрофотометрического анализа исследуемых соединений использовался спектрофотометр фирмы GBC UV- visible Cintra 6 Spectrophotometer (Австралия) с диапазоном длин волн от 190 нм до 1100 нм.

Применялось следующее вспомогательное оборудование: весы Sartorius BP 121S; рН-метр Metter Toledo MP220; ультразвуковой генератор, дистиллятор ДЭ-10; аппарат для получения деионизированной воды «Водолей».

При приготовлении подвижных фаз и пробоподготовки использовались: ледяная уксусная кислота «ОСЧ»; трифторуксусная кислота «ОСЧ»; триэтиламин «ОСЧ»; ацетонитрил, марки для ВЭЖХ; метанол, марки для ВЭЖХ; кислота о-фосфорная, «ХЧ», спирт этиловый ректификованный; кислота муравьиная безводная; вода бидистиллированная, деионизированная.

Стандартные образцы

При разработке методик и проведении аналитических исследований по содержанию индикаторных компонентов нами были использованы коммерчески доступные стандартные образцы галловой кислоты, катехина, эпикатехина, эпигаллокатехина, эпигаллокатехин галлата, катехин галлата, эпикатехин галлата, галлокатехин галлата, кофеина, теофиллина, теобромина, теафлавина, глицирризиновой кислоты, арбутина, гидрохинона, силибина, силикристина, силидианина, салидрозида, гиперицина, гиперфорина, гиперозида, рутина, сеннозида А, сеннозида В, розмариновой кислоты, валереновой кислоты, схизандрина, -схизандрина, элеутерозида В, элеутерозида Е, производства компаний PhytuLab, CromaDex, Sigma-Aldrich, INDOFINE Chemical.

Приготовление растворов стандартных образцов

Для приготовления растворов стандартных образцов с концентрацией 0,1 мг/мл 10 мг стандарта, высушенного до постоянной массы, растворяли в 100 мл метанола. Растворы хранили при -25 0С в течение 6 месяцев.

Приготовление рабочих растворов стандартных образцов

Для приготовления рабочих стандартных образцов (РСО) с концентрацией 1, 5 и 10 мкг/мл 1, 5 и 10 мл раствора стандартного образца, соответственно, разводили до 100 мл метанолом. РСО хранили в холодильнике при -1-2 0С в течение месяца.

Объекты исследования

В ходе эксперимента нами были исследованы различные виды растительного сырья (камелия китайская, зверобой, брусника, толокнянка, бадан, расторопша, валериана, сенна, элеутерококк, лимонник, мелисса, розмарин), экстрактов на основе растительного сырья, а также был проанализирован ряд фиточаев и БАД (около 120 образцов), проходящих предрегистрационную экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН.

Обработка полученных результатов

Для оценки пригодности хроматографической системы рассчитывали следующие параметры: коэффициент емкости (k’), число теоретических тарелок (N), коэффициент асимметрии (As), селективность () и степень разделения (R). Для вычисления этих показателей использовали алгоритмы программы обработки хроматографических данных ChemStations, Agilen и общие фармакопейные статьи USP29 и ВР2004.

Статистическая обработка результатов количественного определения проводилась в соответствии с требованиями ГФ XI. При статистической обработке оценивались следующие параметры: среднее выборки (Хср), дисперсия (s2), стандартное отклонение (s), доверительный интервал (х ср), относительная погрешность (), для решения вопроса о наличии или отсутствии систематической ошибки вычисляли критерий Стьюдента (t), если рассчитанный коэффициент Стьюдента был больше табличного значения, то рассчитывали систематическую ошибку ().





ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАТЕХИНОВ В ЧАЕ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТОВ ЧАЯ

Подготовка проб для анализа.

БАД и фиточаи на основе чая. 1,0 г образца, высушенного до постоянной массы, измельчают и экстрагируют 100 мл 0,1% раствора фосфорной кислоты при нагревании на водяной бане в течение 1 часа. Затем образец обрабатывают ультразвуком. БАД и продукты на основе экстракта чая 1,0 г измельчают и растворяют в 250 мл 0,1% раствором фосфорной кислоты, обрабатываем ультразвуком.

Проведение анализа ВЭЖХ. Колонка: Phenomenex Luna C18(2), 5, 4,6250; условия градиентного элюирования: фаза А: трихлоруксусная кислота, рН=2,5;фаза В: ацетонитрил; 0 мин. – 4%В; 25 мин. – 25%В; 40мин. – 25%В; скорость подвижной фазы 1 мл/мин, детектирование: УФ, =288 нм, объем вводимой пробы 10 мкл.

Таб. 1. Параметры разделения полифенольных компонентов чая совместно с пуриновыми алкалоидами в условиях градиентного элюирования.

Компоненты чая tR, мин. K N As R
галловая кислота 8,25 1,846 13600 1,1 1,718 1,623 1,144 1,105 1,027 1,078 1,250 1,086 1,138 1,022 1,010 19,25 33,5 4,28 16,86 2,73 8,14 27,99 2,62 29,06 3,86 1,04
теобромин 12,09 3,172 26400 1,1
катехин 18,94 5,515 33700 1,2
кофеин 19,75 6,310 52800 1,1
эпикатехин 23,12 6,973 58200 1,1
эпигаллокатехин галлат 23,67 7,162 67100 1,1
галлокатехин галлат 25,29 7,723 75500 1,1
эпикатехин галлат 30,89 9,654 134000 1,2
эпигаллокатехин 31,42 10,490 135000 1,2
теафлавин 37,52 11,939 137000 1,2
теафлавин-3-галлат 38,29 12,206 142000 1,2
теафлавин-3,3’-дигаллат 38,65 12,328 127000 1,2

Предел обнаружения для катехинов составил 1,1 мг/л, предел количественного определения 6,5 мг/л, линейность наблюдалась при концентрациях от 1,0 до 1000 мг/л, коэффициент корреляции был близок к единице.

Рис. 1. Хроматограмма экстракта черного чая. 1 – галловая кислота; 2 – катехин; 3 – кофеин; 4 – эпикатехин; 5 – эпигаллокатехин галлат; 6 - галлокатехин галлат; 7 - эпикатехин галлат; 8 – эпигаллокатехин; 9 – теафлавин; 10 – теафлавин-3 – галлат; 11 – теафлавин-3,3’ -дигаллат

Вещество Х ср s2 s x ср %
кофеин 562,3 130,8 11,436 14,21 2,52
эпикатехин 1013,2 273,6 16,540 20,56 2,03
эпигаллокатехин 991,8 788,4 28,078 34,90 3,51
эпикатехингаллат 1116,2 297,1 17,236 21,43 1,92
эпигаллокатехин галлат 1053,1 858,5 29,300 36,42 3,46
галловая кислота 1123,4 2388,5 48,872 60,76 5,41
галлокатехин галлат 981,1 88,1 9,380 11,66 1,19
теафлавин 1043,2 1629,7 40,369 50,19 4,81
теафлавин-3-галлат 943,5 1065,3 32,638 40,57 4,30
теафлавин-3,3’-дигаллат 986,9 779,5 27,919 34,71 3,52


Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 

Похожие работы:









 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.