авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 |

Исследования по стандартизации сырья и препаратов аконита каракольского.

-- [ Страница 1 ] --


На правах рукописи








ЧУБАРОВА ГАЛИНА ДМИТРИЕВНА







ИССЛЕДОВАНИЯ

ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ

АКОНИТА КАРАКОЛЬСКОГО.


15.00.02.фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук


Москва-2009

Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава и в Закрытом акционерном обществе «СКАЙ ЛТД»

Научные руководители: доктор фармацевтических наук

Алла Анатольевна Сорокина

кандидат биологических наук

Дмитрий Григорьевич Мальдов

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Сокольская Татьяна Александровна

доктор фармацевтических наук, профессор

Патудин Александр Васильевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия

Защита состоится «___»________2009г. в ____ часов на заседании

Диссертационного Совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова по адресу: 121419 Москва, Никитский бульвар, д.13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной медицинской библиотеке ГОУ ВПО Московская медицинская академия

имени И.М.Сеченова по адресу: 117998 Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан «____»_______2009г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета

Д.208.040.09

доктор фармацевтических наук,

профессор Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Более 70% современных гомеопатических средств получают из лекарственного растительного сырья. Аконит является одним из наиболее используемым в гомеопатии растением. В Гомеопатические Фармакопеи ведущих стран мира (Германия, Франция, США и другие) включены препараты аконита, получаемые из следующих видов растений: аконит аптечный (A. napellus L.), аконит ядовитый (А. ferox Wall.), аконит волчий (A. lycoctonum L.). Препараты, в состав которых входят разведения гомеопатической настойки аконита, широко используются при острых воспалительных заболеваниях, нервных болезнях с болевым синдромом, разнообразных сердечных симптомах с приступами страха, для лечения и профилактики простудных заболеваний. На территории России и бывших стран СССР, перечисленные выше виды аконита не произрастают в диком виде и не культивируются. В Киргизии произрастает в больших количествах близкий вид - аконит каракольский. В ГФ VIII издания (1947г) входила статья «Клубни аконита Тянь-Шаньского» представляющая смесь двух видов аконита каракольского и аконита джунгарского. Современная нормативная документация на сырье и настойку гомеопатическую матричную аконита каракольского отсутствует.



Цель и задачи исследования. Целью работы явились исследования по стандартизации клубней и матричных настоек аконита каракольского на основе изучения состава биологически активных веществ (БАВ) и биологических особенностей сырья.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

-провести анализ отечественной и зарубежной научной литературы и нормативной документации, регламентирующей качество гомеопатических лекарственных средств;

-изучить морфолого-анатомическое строение клубней аконита

каракольского и выявить диагностические признаки для идентификации

сырья;

-изучить состав БАВ клубней аконита каракольского;

-изучить динамику содержания БАВ в клубнях аконита каракольского в процессе хранения;

-провести исследования по оптимизации показателей качества клубней аконита каракольского;

-изучить состав БАВ настойки гомеопатической матричной и разработать показатели ее качества;

-изучить стабильность настойки гомеопатической матричной при хранении;

-изучить в сравнительном аспекте биологическую (канцеростатическую) активность настойки гомеопатической матричной (НГМ) и гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС) аконита на культуре клеток Hela и на мышах с перевитой миеломой.

Научная новизна результатов исследования состоит в комплексном изучении сырья, матричной настойки и разведений, основанном на углубленном анализе химического состава и биологических свойств клубней аконита каракольского. В сырье и настойке определено содержание алкалоидов, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ. Разработаны характеристики подлинности и показатели качества клубней аконита каракольского. Установлены показатели качества гомеопатической матричной настойки аконита. Изучена стабильность сырья и матричной настойки аконита каракольского при хранении, рекомендованы сроки их годности. Показана в сравнении цитостатическая активность настойки аконита (НГМ) и ГомЛС аконита на модели мышиной миеломы и на культуре клеток HeLa. Результаты исследований защищены патентом Рф (№ 2009112845 от 08.04.2009). Дан сравнительный анализ биологической активности настойки гомеопатической матричной аконита (НГМ) и ГомЛС аконита (Д6, Д12, Д30, Д12/30).

Практическая значимость результатов исследования. Результаты научных исследований использованы при разработке проектов фармакопейных статей «Клубни аконита каракольского» и «Настойка гомеопатическая матричная аконита каракольского», которые переданы для утверждения в установленном порядке.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на

Международной 2-ой Российско-Китайской научной конференции по фармакологии «Фундаментальная фармакология и фармация - клинической практике» (Пермь, 2006) и на III Российском Гомеопатическом съезде (Москва, 2007).

Связь темы диссертационной работы с планом научных работ учреждения. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 04.07.093, проблема № 1006 АМН РФ, Государственный регистрационный номер 01200110546).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных
работ.

На защиту выносятся:

-данные по качественному и количественному составу биологически активных веществ (алкалоидов, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ) сырья и настойки клубней аконита каракольского;

-результаты морфолого-анатомического изучения клубней аконита каракольского и вариабельность диагностических признаков при переработке сырья;

-результаты стандартизации клубней и матричной настойки аконита каракольского;

-результаты по изучению стабильности сырья и матричной настойки аконита каракольского;

- результаты оценки биологической активности матричной настойки и ее разведений.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 158 страницах машинописного текста, содержит 22 таблицы и 42 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы (115 наименований, из них 45 на иностранных языках) и приложения.

Полученные результаты обработаны статистически, обобщены в таблицах, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в работе.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цели и задачи исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе приводится ботаническая характеристика аконита каракольского, обобщены данные по применению этого растения в аллопатии, гомеопатии и народной медицине; приведены сведения о химическом составе и фармакологическом действии клубней аконита каракольского; показаны фармакологические свойства препаратов аконита.

Во второй главе приведены объекты исследования и методы их

изучения.

Третья глава посвящена фармакогностическому изучению клубней аконита каракольского. Отражены результаты изучения вариабельности диагностических морфолого-анатомических признаков сырья. Приведены экспериментальные данные по содержанию основных групп БАВ сырья (алкалоидов, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ).

В четвертой главе обобщены исследования по разработке проекта ФСП «Клубни аконита каракольского». Изложены результаты по разработке ВЭЖХ- методики алкалоидов в сырье. Приведены данные валидационных исследований и изучения стабильности клубней аконита каракольского при хранении.

Пятая глава посвящена изучению гомеопатической матричной настойки из клубней аконита каракольского. Приведены данные изучения компонентного состава основных групп БАВ настойки (алкалоидов, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ) методами ТСХ и ВЭЖХ, а также количественного определения алкалоидов. Приведены результаты изучения стабильности матричной настойки при хранении.

Шестая глава посвящена изучению цитотоксической активности матричной настойки аконита, ее разведений на культуре клеток HeLa и ее сравнительному анализу с гомеопатическими препаратами аконита.

В седьмой главе приведены результаты изучения противоопухолевого действия гомеопатической матричной настойки аконита на модели мышиной миеломы, как самостоятельного лекарственного средства, так и в сочетании с препаратом «Цисплатин» и «Стимфорте».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектом исследования явились сухие клубни аконита каракольского заготовленного в Иссык-Кульской области, Киргизии, 2001- 2005 годов. В литературе приведена информация, обобщающая характеристики для аконитов каракольского и джунгарского в связи, с чем сочли целесообразным изучить индивидуальные характеристики сырья аконита каракольского.

Микроскопический анализ сырья аконита

Изучена вариабельность диагностических признаков клубней аконита каракольского. На поперечных срезах через срединную часть клубней наблюдаются несколько рядов коричневых спавшихся опробковевших отмерших клеток первичной коры, за которыми следовала паренхима наружной коры, заполненная крахмальными зернами, изредка встречались узкие тупоконечные каменистые клетки с пористыми стенками. Тонкая эндодерма, состоящая из тангентально-вытянутых опробковевших клеток, отделяла наружную кору от внутренней. Во внутренней коре в выемках звездчатого камбия располагались участки флоэмы. Внутрь от линии камбия располагались несколько подковообразных групп сосудов ксилемы. Сердцевина состояла из тонкостенных паренхимных клеток, заполненных крахмалом; крахмальные зерна простые, круглые с центральной трещинкой, 2-5 сложные.

На поперечном срезе тонкой (молодой) зоны клубня присутствовал однослойный эпидермис; первичная кора, ограниченная эндодермой; звездчатая линия камбия; участки флоэмы и ксилемы имели вышеописанное расположение; центр корня занимала сердцевина, которая пропадала в кончике корня, где располагался радиальный пучок.

При исследовании микропрепаратов порошка под микроскопом видны:

изодиаметричные или слегка удлиненные клетки паренхимы; редко- узкие тупоконечные каменистые клетки с пористыми стенками; членистые сосуды ксилемы преимущественно с сетчатым типом вторичного утолщения клеточных стенок; фрагменты покровной ткани - эпидермиса или опробковевшей первичной коры, которые представляли собой коричневые пласты полигональных прямостенных клеток.

Изучение биологически активных веществ клубней аконита каракольского

Согласно литературным данным, в растениях рода Аконит содержатся алкалоиды, флавоноиды, дубильные вещества, кумарины, органические кислоты. С помощью качественных реакций, используемых в ГФ ХI, было подтверждено присутствие данных групп БАВ в клубнях аконита каракольского.





Изучение алкалоидного состава клубней аконита каракольского

Качественный состав алкалоидов в клубнях аконита каракольского был

изучен методом тонкослойной хроматографии. Тонкослойная хроматография осуществлялась с использованием готовых пластинок силикагеля «Sigma» (5 х 10 см) и подвижной фазой н-бутанол : уксусная кислота : вода (4 : 1 : 1). Для обнаружения зон адсорбции хроматограммы просматривали в УФ-свете (Desaga UV) при длине волны 254 нм, а так же использовали раствор йодоплатината калия, стойко окрашивающий зоны в коричневый цвет.

На хроматограмме хлороформного извлечения из клубней аконита каракольского в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаружено 9 зон адсорбции, три из которых совпадали с зонами адсорбции РСО аконитина. После окрашивания раствором йодоплатината калия хроматограмм обнаружено 4 зоны адсорбции, две из которых совпадали с зонами РСО аконитина.

Изучение алкалоидов аконита каракольского с использованием ВЭЖХ

ВЭЖХ–анализ алкалоидов аконита проводили на жидкостном хроматографе Waters (1990г) с изократическим режимом подачи растворителей; аналитической колонке Discovery C18 фирмы “Sopelko”, с подвижной фазой - вода : ацетонитрил ( 1:1), а также хроматографе фирмы «Waters», включающем систему подачи элюента “Breeze” оборудованную проточным дегазатором, инжектором Reodyne 7725i, хроматографическую колонку «YMC-Pack ODS-A», 250 мм x 4,6 мм заполненную сорбентом на основе пористого силикагеля с размером пор 20 нм и размером частиц 5 мкм.

Наблюдали время выхода пика у пробы из сырья в одинаковых условиях с РСО аконитина 7 мин. (рис. 1.)

 Рисунок. 1. Хроматограмма РСО аконитина в-0

Рисунок. 1. Хроматограмма РСО аконитина в изократическом режиме содержание ацетонитрила в подвижной фазе 50 % и УФ-спектры в апексе пиков. В таблице представлены данные эффективности хроматографической колонки.

Стандартизация сырья «Клубни аконита каракольского»

Стандартизация лекарственного растительного сырья требует проведения исследований направленных на установление подлинности сырья и оценку его качества. Полученные результаты были оформлены в виде проекта ФСП «Клубни аконита каракольского »

Раздел «Внешние признаки» включает описание внешних признаков цельного сырья и порошка клубня аконита каракольского. В разделе «Микроскопия» приведено описание микроскопических признаков анатомического строения поперечных срезов срединной и молодой зон цельного клубня и порошка. Диагностически значимые признаки визуализированы фотографиями. В раздел «Качественные реакции» включены методики проведения пробирочных качественных реакций на алкалоиды, хроматографии в тонком слое сорбента, ВЭЖХ-хроматограмма. Раздел «Числовые показатели» состоит из следующих показателей: содержание суммы алкалоидов в пересчете на аконитин, влажность, зола общая, зола не растворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, клубни с остатками стеблей и корней, дряблые клубни, клубни побуревшие в изломе, органическая примесь и минеральная примесь.

Для всех перечисленных показателей установлены нормы. В разделе «Количественное определение» приведена титрометрическая методика определения суммы алкалоидов в пересчете на аконитин. Установлены сроки годности сырья. Содержание алкалоидов в сырье в зависимости от места обитания колебалось от 1% до 2,02%. Для ФС «Клубни аконита каракольского» рекомендован показатель «Количественное определение» - сумма алкалоидов в пересчете на аконитин (абсолютно сухое сырье) не менее 1 %.

Исследование настойки гомеопатической матричной аконита

Настойку гомеопатическую матричную (НГМ) аконита каракольского получали методом 4 ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные». С помощью качественных реакций, используемых ГФ ХI, в НГМ было показано наличие алкалоидов, флавоноидов, дубильных веществ, кумаринов. Изучены спектры поглощения НГМ аконита каракольского в ультрафиолетовой и видимой областях света. УФ-спектр настойки аконита имел максимумы поглощения при 227нм, 282 нм. Параллельно снимали спектр раствора аконитина, он имел максимумы поглощения при 227нм, 282 нм. Сравнение спектров позволяет говорить о наличии аконитина.

Спектр поглощения препарата НГМ в видимой области света имел максимумы поглощения при 380 нм, 480 нм, 556 нм, 620 нм и 648 нм.

Изучение компонентного состава настойки гомеопатической матричной аконита каракольского

При изучении алкалоидного состава НГМ аконита методом ТСХ в системе н-бутанол : ледяная уксусная кислота : вода (4 : 1 : 1) на хроматограмме в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаружено 11 зон адсорбции фиолетового и голубовато-зеленого цвета. Три зоны соответствовали зонам РСО аконитина. После окрашивания раствором йодоплатината калия на хроматограмме были обнаружены 4 зоны адсорбции фиолетового и коричневого цвета. Две зона коричневого цвета соответствовали зонам РСО аконитина.

Методом ТСХ обнаруженны соединения флавоноидной (кверцетин) и кумариновой природы (умбелиферон).

Изучение компонентного состава НГМ аконита каракольского методом ВЭЖХ

Была разработана ВЭЖХ-методика идентификации аконитина в настойке

аконита и оценка его содержания. Идентификацию пика аконитина на хроматограмме проводили путем сравнения времен удерживания пиков на хроматограмме испытуемой настойки аконита и раствора РСО аконитина. При хроматографировании раствора РСО аконитина установлена его не стабильность. Для большей надёжности идентификации аконитина на хроматограмме испытуемого препарата, в препарат вводили минорные количества раствора РСО аконитина. По увеличению одного из минорных пиков на хроматограмме его идентифицировали как аконитин (рис.3, 4).

 Хроматограмма хлороформенного-1

Рис. 3. Хроматограмма хлороформенного экстракта из НГМ аконита с разведением ~ 2500 раз без стандарта.

 Хроматограмма хлороформенного-2

Рис. 4. Хроматограмма хлороформенного экстракта из НГМ аконита с разведением ~ 2500 раз и добавкой минорного количества РСО аконитина.

Для количественной оценки содержания алкалоидов в НГМ аконита были разработаны две методики количественного определения: ВЭЖХ и титрометрическая.

Метрологические характеристики методик представлены в таблицах 2,3.

Содержание суммы алкалоидов в пересчете на аконитин в НГМ аконита каракольского определенное методом ВЭЖХ составило 0,036 ± 0,001 %, а титрометрическим методом 0,034 ± 0,001 %. Таблица 2.

Метрологические характеристики метода количественного определения

суммы алкалоидов в НГМ аконита методом ВЭЖХ



Pages:   || 2 |
 

Похожие работы:










 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.