авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 |

Исследование лабазника вязолистного как источника эффективного ноотропного средства

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ЮРЬЕВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛАБАЗНИКА ВЯЗОЛИСТНОГО КАК ИСТОЧНИКА ЭФФЕКТИВНОГО НООТРОПНОГО СРЕДСТВА

15.00.02. – фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь – 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор

Краснов Ефим Авраамович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор

Петриченко Василий Михайлович, заведующий кафедрой ботаники и общей биологии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава»

доктор фармацевтических наук, профессор

Бубенчикова Валентина Николаевна, заведующая кафедрой фармакогнозии ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Росздрава»

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 23 сентября 2008г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан 20 августа 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент Метелева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Высокий уровень технического прогресса и высоких интеллектуальных достижений привел к резкому возрастанию роли умственного труда и психо-физиологических требований к человеческой личности, таких как способность быстро адаптироваться к постоянно меняющимся условиям и сложной социальной обстановке, экспрессно усваивать и обрабатывать значительный массив информации. Кроме того, существенно возросло количество заболеваний ЦНС, что связано с воздействием неблагоприятных факторов внешней среды, высокими психо-эмоциональными нагрузками и стрессовыми ситуациями в современном обществе. В связи с этим важное значение приобретают ноотропные лекарственные средства, нормализующие процессы обучения и памяти в условиях высокого психо-эмоционального напряжения, а так же при ослаблении интегративных и мнестических функций мозга, при их нарушении в результате воздействия ряда факторов физической и химической природы.

Ассортимент синтетических ноотропных средств разнообразен, но все они обладают рядом побочных эффектов (головная боль, нарушение сна, аллергические реакции). Ноотропные фитопрепараты зарубежных фирм («Танакан», Франция; «Гинсана», Швейцария) имеют высокую стоимость, а сырьевая база для их получения недоступна отечественным производителям. Поэтому актуальной является проблема разработки новых ноотропных фитопрепаратов на основе растений флоры Сибири.



Перспективным в этом плане является лабазник вязолистный (Fillipendula ulmaria (L.) Maxim.), ресурсный потенциал которого велик на всей территории России. Фармакологические исследования показали, что экстракты и фракции растения обладают выраженной ноотропной активностью. Проведенные нами фитохимические исследования указывают на высокое содержание фенольных соединений в надземной части растения, антиоксидантное, антигипоксическое и гемореологическое действие которых широко известно.

Таким образом, проблема изучения химического состава и фармакологических свойств лабазника вязолистного и создание на его основе нового эффективного ноотропного фитопрепарата является актуальной и перспективной.

Цель работы: химико – фармакогностическое исследование перспективного растения флоры Сибири – лабазника вязолистного, как источника создания ноотропного препарата.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

  1. Исследовать состав основных групп биологически активных соединений лабазника вязолистного.
  2. На основании исследований ноотропной активности лабазника вязолистного осуществить разделение активных фракций на индивидуальные компоненты и установить их строение.
  3. Исследовать антиоксидантные свойства ряда экстрактов, фракций и индивидуальных соединений лабазника вязолистного.
  4. Установить динамику содержания основных групп биологически активных веществ лабазника по органам и фазам вегетации.
  5. Провести анатомо-морфологическое исследование надземной части лабазника вязолистного и установить диагностические признаки.
  6. Разработать методики стандартизации сырья и проект ФС на траву лабазника вязолистного.
  7. Разработать рациональную технологию жидкого экстракта лабазника и его стандартизацию.

Научная новизна. Экспериментально обоснована возможность использования лабазника вязолистного в качестве источника создания ноотропного средства и целесообразность его стандартизации по флавоноидам. Из надземной части лабазника вязолистного выделено новое флавоноидное соединение ранее не описанное в литературе, названное филимарин, структура которого установлена как 4/-О--D-галактопиранозид кверцетина. Впервые определена динамика содержания основных групп биологически активных веществ (фенолокислот, флавоноидов) и изучены анатомо-диагностические признаки надземной части лабазника вязолистного.

Практическая значимость.

  1. Результаты фитохимических исследований, в частности, изучение физико-химических свойств индивидуальных соединений, позволяют в соответствии с современными требованиями решить проблему стандартизации лекарственного растительного сырья (трава лабазника вязолистного) и полученного на его основе жидкого экстракта.
  2. Получен патент № 2310467 РФ на изобретение «Гепатопротекторное средство, обладающее антиоксидантной активностью и способ его получения».
  3. Разработан проект ФС на траву лабазника вязолистного, внедрение на фармацевтический рынок лекарственного средства которого обеспечит расширение ассортимента фитопрепаратов ноотропного действия.

Степень внедрения. Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований, изложенные в диссертационной работе, используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармацевтической химии и кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии ГОУ ВПО Сибирского государственного медицинского университета. Подготовлен к рассмотрению проект ФС на лекарственное растительное сырье.

На защиту выносятся:

- Результаты исследований по выделению и изучению фенольных соединений, обладающих ноотропной активностью.

- Методики идентификации и стандартизации надземной части лабазника вязолистного.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 63-ей международной студенческой научной конференции им Н.И.Пирогова (Томск, 2004), «Конгрессе молодых ученых» (Томск, 2007), II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2007), Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007), VI Всероссийском научном семинаре с Молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007), а так же на заседаниях кафедры фармацевтической химии СибГМУ (Томск, 2004-2007).

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармацевтической химии Сибирского государственного медицинского университета и комплексной целевой программой СО АМН Российской федерации «Здоровье человека в Сибири (№ государственной регистрации 01.9.2002479).

По результатам работы опубликовано 12 печатных работ, в том числе 3 журнальные статьи и 1 патент на изобретение.

Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнялись на кафедрах фармацевтической химии и фармакогнозии с курсами ботаники и экологии СибГМУ г.Томск, а так же в сотрудничестве с коллективами других научных организаций: НИИ Фармакологии ТНЦ СО РАМН (лаборатория психофармакологии г.Томск), НИИ органической химии СО РАН (г.Новосибирск), Томский политехнический университет (кафедра аналитической химии, г.Томск), Кубанский государственный университет (г.Краснодар). Сотрудникам данных подразделений и научных учреждений выражаем искреннюю благодарность.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 39 таблицами, 30 рисунками и 3 схемами. Библиографический указатель включает 261 источник литературы, из которых 66 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Объектом исследования служила надземная часть лабазника вязолистного (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.), собранная в 2003-2007 гг. в Томской, Кемеровской областях и Алтайском крае.

Для разделения сложных смесей веществ и выделения индивидуальных соединений применяли избирательную жидкостную экстракцию, хроматографию на колонках и метод дробной кристаллизации. Для подбора элюентных систем, контроля за ходом элюации при разделении веществ на колонках и чистотой полученных соединений применяли метод восходящей хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента.

При установлении структуры выделенных веществ использовали электронную спектроскопию, ИК- и масс-спектрометрию, ЯМР, хромато-масс спектрометрический анализ.

АОА изучали хемилюминисцентным и вольтамперометрическим методоми, АРА – спектрофотометрическим методом.

Изучение фармакологической активности проводили по существующим тестам на белых мышах и крысах. Животных содержали в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей.

Стандартизацию цельного и измельченного сырья проводили согласно методикам ГФ .

Микроскопические признаки устанавливали на основании анатомического исследования частей растения. Фотосъемку плоскостных препаратов осуществляли с помощью цифрового фотоаппарата Olympus C-4000 ZOOM Digital compact camera и оптико-механического согласователя при увеличениии 120х и 240х. Снимки обрабатывали в Adobe Рhotoshop CS Central European Version.

При разработке проекта ФС на сырье руководствовались ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества ЛС. Основные положения».

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили общепринятым методом с определением среднего арифметического значения (Х) и средней квадратичной ошибки (). Достоверность результатов оценивали, используя параметрический (t-критерий Стьюдента) и непараметрический (критерии Вилкоксона и Манна-Уитни) методы. Расчеты проводили с использованием программы «Statistica for Windows 7,0».

Результаты исследования

Изучение нооторопной и антиоксидантной активности

лабазника вязолистного

Скриннинговые исследования ноотропной активности надземной части л.вязолистного были проведены в лаборатории патологической физиологии и экспериментальной терапии с группой психофармакологии ТНЦ СО РАМН НИИ фармакологии г.Томска под руководством профессора Суслова Н.И. На первых этапах скрининга потенциальных ноотропов важным прогностическим признаком является антигипоксический и адаптогенный эффект, поэтому были использованы тесты, отражающие указанные виды активности и тесты, выявляющие способность животных к обучению.

Эксперименты проводили на беспородных мышах-самцах с массой тела 20-22 г. Влияние на обучение и память изучали при выработке и воспроизведении УРПИ. Антигипоксический эффект оценивали в условиях гипоксии гермообъема и ориентировочно-исследовательского поведения на модели «открытое поле». Влияние на физическую работоспособность изучали в условиях методики принудительного плавания в бассейне с водой комфортной температуры с утяжеляющим грузом (10% от массы).





Исследования показали, что выраженной антигипоксической и наибольшей адаптогенной активностью обладает экстракт растения на 70% водном этаноле. Он же оказывает положительное влияние на память, на что указывает сохранность у животных УРПИ на 14 сутки эксперимента. При фракционировании указанного экстракта (хлороформом, этилацетатом и бутанолом) наблюдали диссоциацию эффектов, отражающих ноотропную активность: антигипоксические и адаптогенные свойства в максимальной степени присущи хлороформной фракции, а непосредственно ноотропной активностью обладает этилацетатная фракция.

Специфическую фармакологическую активность экстракта л.вязолистного на 70% водном этаноле изучали с помощью модели «Т-образный лабиринт» на белых крысах-самцах массой 250–350 г. При этом влияние экстракта растения на выработку и воспроизведение сложного условного питьевого рефлекса оценивали у здоровых животных и у животных на фоне кофеиновой интоксикации. Введение экстракта л.вязолистного животным на фоне кофеиновой интоксикации нормализовало показатели памяти животных и приближало их к интактному контролю.

На различных этапах изучения ноотропной активности используют ряд тестов, отражающих то или иное ее действие: антигипоксическое, адаптогенное, антиоксидантное. Более простым и не требующим большого количества вещества для исследования является тест на антиоксидантную активность. Кроме того, известно, что ноотропные фитопрепараты проявляют активность за счет присущих им антиоксидантных, антирадикальных и гемореологических свойств. Поэтому мы сочли целесообразным изучить антиоксидантную и антирадикальную активность экстрактов и фракций лабазника, для выявления возможного факта корреляции упомянутых видов активности с ноотропным действием.

В результате определения АОА экстрактов растения хемилюминисцентным методом, выявили, что экстракты на 70 и 95 % водном этаноле угнетают ХЛ более чем на 50%, что указывает на их выраженную АОА.

Для оценки АРА экстрактов использовали реакцию со свободным стабильным радикалом ДФПГ. В качестве характеристики АРА использовали процент интенсивности взаимодействия ДФПГ с соединениями, содержащимися в экстракте и время, за которое ДФПГ прореагирует на 50% (1/2). По АРА экстракты растения на 70 и 95 % этаноле (1/2 составило 5 и 3 минуты соответственно) приближаются к дигидрокверцетину (1/2 равно 2 мин) (рис. 1).

АОА фракций экстракта лабазника на 70% водном этаноле изучали методом катодной вольтамперометрии, основанном на реакции электровосстановления кислорода. В качестве фонового электролита использовали фосфатный буфер pH 6,86. Концентрация образца в ячейке составила 1·10-4 г/мл. АОА фракций оценивали по кинетическому критерию АОА (К (мкМ/л·мин)), который отражает количество прореагировавших с образцом кислородных форм. Полученные результаты показали, что ЭАФ приближается по силе АОА к природному антиоксиданту дигидрокверцетину, а ХЛФ к аскорбиновой кислоте (рис. 2).

Таким образом, в результате экспериментов выявили факт корреляции антиоксидантных свойств л.вязолистного с его ноотропной активностью.

Исследование БАВ лабазника вязолистного

Для проведения химических исследований из надземной части растения получали экстракт на 70% водном этаноле (выход 31,9%), который затем фракционировали рядом растворителей с возрастающей полярностью (хлороформом, этилацетатом, бутанолом-1). Химический состав полученных фракций исследовали качественными реакциями и хроматографией в тонком слое и на бумаге с достоверными образцами. В результате в активном экстракте обнаружили: простые фенольные соединения в ХЛФ и ЭАФ; флавоноиды и органические кислоты в ХЛФ, ЭАФ, БФ; кумарины в ЭАФ и БФ; дубильные вещества во всех фракциях, кроме хлороформной; сапонины в ЭАФ; аминокислоты в БФ и водном остатке.

Учитывая результаты фармакологического исследования, для выявления носителей активности углубленному химическому изучению подвергли хлороформную и этилацетатную фракции экстракта лабазника на 70% этаноле.

ХЛФ разделяли методом флэш-хроматографии, с последующей рехроматографией на колонках с силикагелем по схеме 1.

Схема 1 – Разделение хлороформной фракции лабазника вязолистного

После перекристаллизации фракции 3/1 из бензола получили кристаллы кремового цвета с фруктовым запахом (ЛАВ-1; выход 20 мг), возгоняющиеся при 177-178 оС. max 252 нм (MeOH). ИК-спектр (КВr), , см-1: 3443, 2916, 2965, 2848, 1603, 1463. По данным масс-спектра соединение имеет формулу С8Н8О3, М+152. В ПМР-спектре (DMSO-d6) вещества, записанном на спектрометре Bruker DRX-500 (рабочая частота 500, 13 МГц), наблюдались сигналы, , м.д.: 3,86 (с, 3Н), 6,94 (с, Н-3, Н-5), 8,05 (с Н-2, Н-6). На основании спектральных данных полученное вещество идентифицировано с анисовой кислотой (4-метоксибензойная кислота).

Фракция 2/2 (ЛАВ-3) представляет собой жидкость желтого цвета с медовым запахом (выход 115 мг), легко растворимую в хлороформе. Компонентный состав ее изучали методом ГЖХ-масс спектрометрии на приборе Trace DSQ (Thermoelectron corp., США), программное обеспечение Xcalibur 1.4. Условия анализа: колонка BPX5, 25м; Тисп = 2800С; Vг/н = 1 мл/мин; растворитель – хлороформ; Ттермостата от 40 до 3000С; скорость нагрева 10 0/мин; задержка хроматограммы 5 мин; сканирование 33 – 650 а.е.м. Компонентный состав фракции представлен преимущественно алифатическими кетонами, а так же ароматическими карбоновыми кислотами и их производными: гексаналь (0,23%, tr 8,12 мин), бензойная кислота (0,56%, tr 14,78 мин), салициловая кислота (2,5%, tr 16,83 мин), 4-метоксибензойная кислота (0,63%, tr 18,78 мин), 4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-2(4Н)-бензофуранон (1,3%, tr 20,69 мин), диэтилфталат (16,32%, 20,86 tr мин), 6,10,14-триметил-2-пентадеканон (1,55%, 23,39 tr мин), бис-(2-метилпропил)-фталевая кислота (0,52%, tr 23,85 мин), 2-гептадеканон (0,97%, tr 24,06 мин), метиловый эфир 14-метил-пентадекановой кислоты (0,97%, tr 24,23 мин), бутилоктиловый эфир фталевой кислоты (7,67%, tr 24,88 мин), 2-нонадеканон (1,43%, tr 26,05 мин), (4-метоксифенил)метиловый эфир бензолуксусной кислоты (1,17%, tr 26,36 мин), диизооктиловый эфир фталевой кислоты (64,22%, tr 30,32 мин) (рис.3).

 Из фракции 3/2 после-0

Из фракции 3/2 после перекристаллизации из метанола получили белый мелкокристаллический порошок (ЛАВ-4; выход 43 мг) с т.пл. 306 – 308 оС. Вещество хроматографически однородно и не обнаружило депрессии т.пл. в пробе смешения с достоверным образцом олеаноловой кислоты.

Аналогичная обработка фракции 4/2 привела к получению мелкокристаллического порошка (ЛАВ-5; выход 8 мг) с т.пл. 285 – 287 оС. На основании физико-химических свойств и сравнения с достоверным образцом вещество идентифицировано как урсоловая кислота.



Pages:   || 2 | 3 |
 

Похожие работы:







 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.