авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

Иммунобиологическая оценка состояния облученных животных и способы повышения радиорезистентности организма

-- [ Страница 2 ] --

В работе изучали наиболее информативные показатели, характеризующие степень лучевой патологии и эффективность применяемых радиозащитных средств.

Количество эритроцитов, тромбоцитов, ретикулоцитов, содержание гемоглобина, общий белок и его фракции в периферической крови определяли общепринятыми в гематологии методами исследования (Карпуть И.М., 1986). Морфологическое изучение периферической крови осуществляли путем подсчета общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного содержания базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов; лимфоцитарный индекс (ЛИ) и лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) - по методу, предложенному Я.Кальф-Калифом (Ронин В.С., Рабинович И.М., 1973). Общее количество клеток в костном мозге бедренной кости и подсчет абсолютного числа клеток различных генераций проводили по методу, предложенному П.Д.Горизонтовым, О.И. Белоусовой, М.И. Федотовой (1983). Количество Т- и В-лимфоцитов в периферической крови подопытных животных определяли, соответственно методами Е-PОK и ЕАС-РОК (Фримель Г., Краузе Х. и др., 1987).

Количественное определение иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Для постановки реакции использовали моноспецифические антисыворотки против IgG, IgМ, IgА, изготовленные научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии (Нижний Новгород).

Титры аутоантител к лизату собственных эритроцитов (ЛСЭ) определяли реакцией Уанье в модификации Н.Н.Клемпарсокй (1981). Количество бляшкообразующих клеток (БОК) в периферической крови, селезенке, печени, почках определяли реакцией Йерне в модификации Н.Н.Клемпарской и др. (1981).

Циркулирующие иммунные комплексы в сыворотке крови определяли по методу M. Digenon и др. (1987).

Содержание гормонов тироксина, трийодтиронина, инсулина определяли радиоиммунологическим методом, используя тест-наборы: РИА-Т3-ПГ, РИА-Т4-Г, РИА-ИНС-ПГ-125I. Принцип метода заключается во взаимодействии меченного и исследуемого гормона со специфически связывающим реагентом ограниченной емкости. Радиометрию результатов проводили на гамма-спектрометре РИА-ГАММА. Расчет концентрации гормонов осуществлялся автоматически на основании существующих стандартов. Общую активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) определяли с помощью тест наборов «Лахема». Интенсивность перекисного окисления липидов по накоплению малонового диальдегида (МДА) и состояние антиоксидантной системы по активности глутатионредуктазы (ГР) в печени крыс определяли методами, предложенными М.И.Прохоровой (1982), В.Н.Ореховичем (1987). В ткани печени контрольных и облученных животных определяли количество белка, холестерина, общих фосфолипидов. Экстракцию липидов про­водили по методу Фолча, разделяли липиды методом ТСХ на силикагеле/50 мк в системе гексан — эфир — уксусная кислота (73 : 25 : 2 по объему). Липидный фосфор определяли по методу Герлаха — Дойтике, холестерин и эфиры холе­стерина по реакции Либермана — Бурхарда, количество белка по методу Лоури. Все использованные методики приведены в работе И.К.Коломийцевой (1989).



Для повышения радиорезистентности организма животных использовали предварительное облучение в диапазоне доз 0,75 – 1,5 Гр за 28-30 дней до летального воздействия ионизирующих излучений в сочетании с природными адаптогенами - эракондом, флорентой и тимогеном.

Эраконд представляет собой экстракт люцерны посевной (Medicago sativa), полученный при гидробарометрической обработке наземной части растения с добавлением определенного набора микроэлементов. Препарат разработан в ТОО НВП «АПТ-Экология» (Екатеринбург). Густой экстракт люцерны, приготовленный в соответствии с ТУ 9337-004-12334249-97, представляет собой пластическую стерильную субстанцию темно-коричневого цвета, которая при высушивании твердеет. Вкус горьковатый, хорошо растворим в воде (допускается появление незначительного осадка).

Флорента – это экстракт зелени пихты сибирской выпускается во флаконах темного цвета 200 мл, по ТУ 8501-050-20680882-05. Изготовитель фирма «Биолит» г. Томск. В составе флоренты содержится комплекс растительных полифенолов, фитонцидные фракции, микроэлементы, витамины.

Тимоген субстанция – мононатриевая соль дипептида, состоящего из остатков глутаминовой кислоты и триптофана, выделенный методом высокоэффективной жидкостной хроматографии из тималина. Препарат представляет собой бесцветный прозрачный раствор без запаха, совместимый со всеми лекарственными средствами.

Послеубойный ветеринарно-санитарный осмотр туш и внутренних органов проводили по общепринятой методике «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», 1988.

Органолептические исследования свежего мяса выполняли в соответствии с ГОСТом 72-69-79. Для консервации мяса использовали две рецептуры №1 и №2, разработанные во ВНИИВСГиЭ (Сивохин П.А., Колякова В.Я., Захарова Л.Л., 1992).

Из физико-химических показателей определяли рН в фильтратах мышечной ткани, активность пероксидазы, количество бактерий и степень распада мышечной ткани путем микроскопирования мазков отпечатков по ГОСТу 23392-78. Определяли содержание аминоаммиачного азота, летучих жирных кислот (ЛЖК). Ставили реакцию с сернокислой медью. Содержание азота в исследуемых пробах мяса определяли фотометрическим методом по Къельдалю.

Исследование мяса на инфузории Tetrahimena piriformis проводили согласно «Методическим рекомендациям для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов», 1990. Каждая проба исследовалась трижды в три повторности для получения средних показателей. Оценка результатов велась путем подсчета выросших за четверо суток клеток инфузорий в десяти квадратах счетной камеры Фукса-Розенталя. Основным показателем явился коэффициент относительной биологической эффективности (ОБЦ) (Методические рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя сельскохозяйственных животных, 1977).

Дальнейшие исследования биологической полноценности мяса проводили на взрослых белых крысах и крысятах-отъемышах. Взрослые крысы-самцы содержались в течение 7 суток на рационе, белковая часть которого состояла полностью из исследуемого мяса, контролем служили крысы, содержавшиеся на общепринятом рационе. При определении коэффициента эффективности белка (КЭБ) тест-объектом служили крысята-самцы-отьемыши в возрасте 30 суток. Длительность опыта составлял 28 дней. Количество скармливаемого азота равнялось 180 мг на 1 голову в сутки. Безбелковая часть рациона состояла (%): сахар – 10,0; растительное масло – 8,0; клетчатка- 1,0, крахмал – 74,0; минеральная смесь -4,0; витаминная смесь – 1,0. Динамику раннего постнатального развития анализаторов слуха и зрения оценивали по времени отлипания ушной раковины с 1-х суток после рождения и открытия глаз с 13-х по 16-е сутки постнатальной жизни потомства. Взятие внутренних органов (печень, селезенка, сердце, почки, семенники) для определения веса и весовых коэффициентов проводили согласно «Методам биологической оценки продуктов животного происхождения», 1995. Для дальнейшего морфологического исследования сердце, печень и селезенку фиксировали в 10% формалине и 90% этиловом спирте.

Гистологические препараты готовили по общепринятой методике и окрашивали по Романовскому – Гимза. Для объективного суждения о реальности в степени достоверности результатов исследований цифровые данные подвергали статистической обработке по Стьюденту. Различия считали достоверными при уровне значимости Р<0,05. Набор и корректура текста, графические изображения выполнены с помощью программ Microsoft Word 6.0 и Microsoft Excel 5.0 в операционной оболочке Windows–XP. Распечатка произведена на принтере HP LaserJet1010.

Часть исследований выполнена на базе Всероссийского НИИ ветеринарной санитарии гигиены и экологии РАСХН.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Влияние пролонгированного внешнего воздействия малых доз ионизирующей радиации на иммунобиологическое состояние животных

Изучение влияния пролонгированного внешнего гамма-воздействия малых доз ионизирующей радиации низкой интенсивности (0,39-1,2 мГр/час) проведено на белых беспородных крысах и свиньях белой русской породы.

3.1.1 Опыты на крысах. При постановке опыта из крыс-самцов было сформировано пять групп по 20 штук в каждой. Первая группа – нахождение под облучением 30 суток: вторая – 60; третья – 90; четвертая – 120 суток; пятая группа облучению не подвергалась и служила биологическим контролем. Исходная масса тела крыс всех подопытных групп составляла 160-165 г. По истечению указанных сроков пролонгированного облучения крыс выводили из-под облучения и при убое проводили гематологические, морфологические, иммунологические, биохимические исследования. Суммарная доза составила 0,28; 0,56; 0,84 и 1,2 Гр, соответственно

Наблюдение за общим состоянием крыс, находившихся под непрерывным облучением в течение 30 (1 группа), 60 (2 группа), 90 (3 группа) и 120 суток (4 группа) велось в течение всего эксперимента. Животные выглядели клинически здоровыми, адекватно реагировали на внешние раздражители, охотно поедали корм. Гибели крыс в течение эксперимента в подопытных группах и в группе контроля не отмечалось. В течение всего времени крысы не отставали в массе от своих аналогов группы контроля. При этом масса внутренних органов - печени, почек, селезенки находилась также в пределах контроля. Осмотр внутренних органов животных опытных групп, при убое их сразу после прекращения облучения, не выявил видимых патологоанатомических изменений.

В картине периферической крови отмечалась слабая эритропения, анемия и лейкопения в течение первых двух месяцев пребывания крыс под непрерывным облучением низкой интенсивности. Количество эритроцитов на 30 и 60 день составляло соответственно 86,1% и 80,5% к контролю; содержание гемоглобина - 87,8% и 86,7%, соответственно. К завершению хронического облучения, т.е. к 120 суткам, эти показатели приближались к контрольным величинам. Общее количество лейкоцитов через 30 дней уменьшалось на 19,8%, через 60 дней – на 18,6 % по отношению к биологическому контролю. На 90-й и 120-й день их количество достигало нижних границ физиологической нормы и составляло, соответственно, 84,7%, 91,4% к биологическому контролю. В лейкоцитарной формуле изменения среди гранулоцитов носили переменный характер. Появлялся невысокий процент юных клеток во всех подопытных группах. Процент палочкоядерных нейтрофилов был выше контрольного в первой и второй подопытных группах, но не достоверно. Увеличивался процент сегментоядерных нейтрофилов. Более заметное снижение лимфоцитов (8,5%) приходилось на 30 сутки после облучения.

Заметных изменений в содержании IgG, IgM, IgA в сыворотке крови подопытных крыс выявлено не было. Подобная особенность была характерна и для циркулирующих иммунных комплексов (табл.1).

Таблица 1 – Содержание иммуноглобулинов G, M, A и ЦИК в сыворотке крови крыс

Время под блучением, сутки Иммуноглобулины, г/л ЦИК, усл.ед.
G M A
30 контроль 6,40±0,70 6,90±0,80 0,40±0,80 0,47±0,08 0,65±0,09 0,59±0,08 39,8±1,21 41,4±1,22
60 контроль 6,80±0,03 7,00±0,04 0,47±0,04 0,47±0,07 0,64±0,03 0,64±0,04 38,2±0,84 39,1±0,32
90 контроль 6,80±0,31 6,90±0,80 0,58±0,01 0,47±0,09 0,67±0,01 0,59±0,08 39,0±0,24 41,3±0,32
120 контроль 6,72±0,04 6,92±0,22 0,42±0,08 0,44±0,01 0,58±0,08 0,60±0,08 36,8±0,24 37,9±0,42

Изменения наблюдались в соотношении Т- и В-лимфоцитов. На 30 день после облучения количество Т-лимфоцитов снижалось на 28,2 %; спустя 60 дней - на 27,8%; 90 дней - на 11, 6% по отношению к контролю. К 120 дню их содержание соответствовало значениям контрольных величин. В отличие от Т-клеток содержание В-лимфоцитов у подопытных крыс имело тенденцию к увеличению спустя 30, 60 и 90 дней. К 120 дню их количество находилось в пределах контроля. Таким образом, Т-лимфоциты периферической крови при низкоинтенсивном пролонгированном облучении крыс имели тенденцию к снижению, а В-лимфоцитов – к увеличению (рис.1).

  Изменение содержания Т- и-1

Рис.1 – Изменение содержания Т- и В-лимфоцитов у крыс при пролонгированном облучении

Титры аутоантител, со стороны антигенных субстанций собственных эритроцитов, селезенки, печени и почек, оценивались в 0,2-0,5 балла (реакция слабо положительная). Оценка в 0,5 балла, в большинстве случаев, была характерна для почек (табл.2).

Таблица 2 – Титры аутоантител (баллы) к аутологичным органам и тканям

Время облучения Дозы (Гр) ЛСЭ Селезенка Печень Почки
Пролонгированное облучение (0,39 мГр/час)
30 суток 0,28 0,3±0,01 0,3± 0,01 0,5± 0,05 0,5± 0,05
60 суток 0,56 0,3± 0,02 0,5± 0,05 0,3± 0,02 0,5± 0,06
90 суток 0,84 0,2± 0,01 0,3± 0,06 0,1± 0,01 0,5± 0,02
120 суток 1,12 0,4± 0,03 0,5± 0,03 0,1± 0,01 0,5± 0,05
Контроль нет следы следы следы следы






Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 

Похожие работы:








 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.