авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:   || 2 | 3 |

Антимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диоксинор при респираторных болезнях поросят

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

НИКУЛИН АЛЕКСЕЙ ИВАНОВИЧ

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА ДИОКСИНОР ПРИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЯХ ПОРОСЯТ

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Воронеж – 2009

Работа выполнена в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии»

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН

Шахов Алексей Гаврилович

Официальные оппоненты: доктора ветеринарных наук

Скворцов Владимир Николаевич

доктора ветеринарных наук

Жуков Иван Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Защита состоится « » 2009 года в часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.02 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» по адресу:

394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии».

Автореферат разослан « » 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Близнецова Г.Н.

  1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из острых проблем крупных свиноводческих хозяйств являются респираторные болезни. Они широко распространены практически во всех странах мира с развитым свиноводством, занимают одно из ведущих мест в патологии свиней и наносят большой экономический ущерб (Р.Г. Хунн, 1970; Й.Гаммельгор, 1985; П. Щербаков, с соавт., 2002; И.В. Волков, 2004; А.Г. Шахов, 2005; Б.Г. Орлянкин, 2006; А.И. Ануфриев, с соавт., 2007; Т.С. Кузнецова, с соавт., 2008).

В последние годы наблюдается тенденция к снижению эффективности химиотерапии и химиопрофилактики при различных инфекционных болезнях животных, в том числе и при респираторных болезнях свиней. Циклические способы лечения одним и тем же препаратом ведут к возникновению затяжных форм болезни и формированию устойчивых к антимикробным средствам популяций возбудителей, которые становятся слабочувствительными вследствие адаптации к препарату, и в этиологии инфекционных процессов стали преобладать более устойчивые формы и виды патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (С.В. Шабунин, 1999; А.Г. Шахов, 2003).

Этим определяется актуальность представленной работы и ее перспективность в плане изучения эпизоотологии и этиологии респираторных болезней поросят и разработки высокоэффективных комплексных антимикробных препаратов.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение этиологии респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР и разработка комплексного антимикробного препарата для терапии больных поросят.



Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

  1. Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторным болезням свиней в трех крупных специализированных хозяйствах Воронежской, Липецкой и Орловской областей.
  2. Провести бактериологические, серологические и молекулярно-генетические исследования патологического материала от больных пневмонией свиней для определения этиологической структуры респираторных болезней свиней.
  3. Изучить in vitro и in vivo на моделях бактериальных инфекций белых мышей антимикробные свойства комплексного препарата диоксинор.
  4. Изучить лечебную и экономическую эффективность диоксинора при респираторных болезнях свиней.

Научная новизна. Впервые в возрастном аспекте изучены заболеваемость поросят респираторными болезнями в крупных специализированных хозяйствах ЦЧР, их этиологическая структура, антимикробные свойства нового комплексного препарата диоксинор, его лечебная и экономическая эффективность.

Практическая значимость и внедрение. Полученные результаты свидетельствуют о сложной эпизоотической ситуации и этиологической структуре массовых респираторных болезней свиней в крупных специализированных хозяйствах. Для терапии больных животных разработан новый высокоэффективный комплексный препарат диоксинор с широким спектром антимикробного действия, обладающий выраженными лечебными свойствами. Полученные результаты вошли в разработанную и утвержденную нормативно-техническую документацию на препарат диоксинор-АФ (СТО 10590965-0002-2006) и инструкцию, утвержденную заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за №ПВР-2-1.7/01921 от 18.04.2007г.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», протокол №2 от 01.02.2007 года; первом съезде ветеринарных фармакологов России, Воронеж 21-23 июня 2007 года; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» 17-19 сентября 2008 года, г. Воронеж.

Публикация материалов исследований. Основные материалы диссертации изложены в 6 статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 2 в журналах, рекомендованном ВАК. В публикациях отражено основное содержание диссертации.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Эпизоотическая ситуация и этиологическая структура респираторных болезней свиней в крупных свиноводческих хозяйствах.
  2. Антимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диоксинор при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 184 источника, в том числе 83 на иностранных языках. Иллюстративный материал включает 4 рисунка и 20 таблиц.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Россельхозакадемии в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 2005-2008 гг. и в трех крупных специализированных свиноводческих хозяйствах Воронежской (СХА МХП «Николаевское»), Липецкой (ОАО «Русская АПК») и Орловской (ОАО Агрофирма «Ливенское мясо») областей, стационарно неблагополучных по респираторным болезням поросят.

Для определения эпизоотической ситуации в хозяйствах использовали данные отчетов ветеринарных служб и результатов собственных исследований.

При клиническом исследовании у животных измеряли температуру тела, определяли частоту пульса и дыхания, наличие одышки, кашля, носовых истечений в соответствии с принятыми в клинической диагностике методами.

Этиологическую структуру респираторных болезней изучали на основании эпизоотологического обследования хозяйств, результатов бактериологических, серологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала (легкие, средостенные лимфоузлы, печень, почки, селезенка, кровь из сердца) от павших и убитых с диагностической целью больных животных.

1. Бактериологические исследования проводили общепринятыми классическими методами согласно утвержденным наставлениям. При бактериологических исследованиях использовали пораженные участки легких на границе со здоровой тканью, средостенные лимфатические узлы, кровь из сердца, селезенку, почки, печень. Патологический материал исследовали не позднее 2 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), МПА с 5% крови барана, среду Эндо. Посевы инкубировали при температуре 37оС в течение 24 часов, после чего учитывали характер роста микроорганизмов. У выделенных чистых культур изучали тинкториальные, морфологические и культурально-биохимические свойства. Чувствительность выделенных культур к антибиотикам определяли методом индикаторных бумажных дисков. Оценку результатов проводили путем измерения величины зоны задержки роста культур. Патогенность выделенных микроорганизмов определяли с помощью постановки биопробы на белых мышах.

2. Молекулярно-генетические исследования выполняли методом ПЦР с применением соответствующих утвержденных тест-систем, амплификацию ДНК проводили в программируемом термостате «Терцик ТПЧ-ПЦР01». Для регистрации продуктов ПЦР использовали метод электрофоретического разделения продуктов амплификации в агарозном геле.

3. Серологические исследования проводили согласно утвержденным методикам и наставлениям к соответствующим диагностическим наборам в реакциях РТГА, РНГА и ИФА. Учет результатов иммуноферментного анализа осуществляли на спектрофотометре с вертикальным ходом луча «Униплан-ТМ».

4. Зоогигиенические и токсикологические показатели кормов, воды и воздуха оценивали согласно утвержденным методикам и ГОСТам.

5. Изучение антимикробной активности диоксинора и оптимального соотношения диоксидина и норфлоксацина в препарате проводили in vitro методом серийных разведений (Антонов Б.И. с соавт., 1986; Ковалев В.Ф. с соавт., 1988; Сидоров М.А. с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали музейные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов возбудителей респираторных и желудочно-кишечных болезней поросят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Оптимальное соотношение диоксидина и норфлоксацина определяли путем сравнения антимикробной активности изучаемых композиций с таковой у составляющих компонентов.

Минимальную бактериостатическую концентрацию определяли методом серийных разведений в МПБ, а минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы. В качестве контроля роста культуры использовали пробирку, не содержащую препарат. Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 500 тысяч. Посевы инкубировали при 370С в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Антимикробную активность диоксинора (in vivo) изучали на моделях пастереллезной, сальмонеллезной и стафилококкозной инфекций белых мышей массой 18-20 г. В предварительных опытах определяли минимальную летальную дозу (DLM) суточных культур.

Определение терапевтической эффективности диоксинора проводили in vivo в модельных опытах при экспериментальном заражении белых мышей Staphylococcus aureus (2,25 млн. микробных клеток/мышь), Salmonella cholerae suis (100 тыс. микробных клеток/мышь), Pasteurella multocida (100 тыс. микробных клеток/мышь).

Заражение проводили смывом суточных агаровых культур возбудителей. Разведения культур делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности. Лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препарат вводили 1 раз в сутки внутримышечно.

Эксперименты проводили на половозрелых нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 18-20 г. Животных содержали в условиях вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии, при температуре воздуха 20-220С и влажности 40-60%.

Группы животных формировали по принципу парных аналогов по 10-20 мышей в каждой, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Животных контрольных групп лечению не подвергали. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 10 дней, учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом выделения исходных культур микроорганизмов из крови сердца, печени, селезенки павших мышей. Индекс защиты определяли по формуле В.Д. Белякова (1961). О терапевтической эффективности препарата судили также по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 10 дней после инфицирования.





6. Действие препарата на морфологические и иммунологические показатели крови и неспецифическую резистентность организма было изучено на больных пневмонией поросятах. Для оценки уровня неспецифической резистентности определяли гемолитическую активность комплемента у животных – по Г.Ф. Вагнеру (1963), бактерицидную активность сыворотки крови – по О.В. Смирновой и Т.А. Кузминой (1966), лизоцимную – по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс – по В.С. Гостеву (1950).

Количество иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (1965).

Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования крови - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005). Определение микроэлементов проводили на атомно-адсорбционном спекрофотометре – 6500.

Показатели, отражающие состояние системы ПОЛ-АОЗ: содержание малонового диальдегида, глутатионпероксидазы, глютатионредуктазы и каталазы оределяли по методу Бузламы В.С. с соавт. (1997), активность супероксиддисмутазы (Сирота Т.В., 1999) - на спекрофотометре «Specol-340».

7. Опыты по изучению лечебной эффективности диоксинора проведены на поросятах 2,5-3 месячного возраста в условиях двух хозяйств, стационарно неблагополучных по респираторной патологии: СХА МХП «Николаевское» Аннинского района Воронежской области и ОАО Агрофирма "Ливенское мясо" Ливенского района Орловской области. Опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т. Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий содержания и кормления животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты проведены в нескольких повторностях.

Экономическую эффективность применения препарата определяли согласно методическим рекомендациям Б.Т. Артемова с соавт. (1991).

Статистическая обработка полученных данных проведена с помощью программы «ExStat».

За помощь при проведении исследований выражаем искреннюю признательность сотрудникам отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии; физико-химических методов исследования; клинической биохимии; лаборатории экспериментальной фармакологии ГНУ ВНИВИПФиТ и специалистам свиноводческих хозяйств.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.Эпизоотическая ситуация и этиология респираторных болезней поросят

Изучение эпизоотической ситуации в крупных свиноводческих хозяйствах показало, что респираторные болезни регистрируются на протяжении всего технологического цикла. У поросят-сосунов в общей заболеваемости респираторная патология не превышала 0,5% - в 2004 и в 2005 году, 0,4% – в 2006 году. В период доращивания она резко возрастала и составила по годам соответственно 39,6 – 65,8%, 34,5 – 74,6% и 66,9 – 76,5%. У откормочного поголовья заболеваемость по годам несколько снижалась, но оставалась высокой: 44,5 – 65,0%, 43,6 – 71,1% и 39,7 – 59,5%.

На доращивании количество павших поросят от респираторных болезней, из общего числа падежа, составило соответственно 43,7-73,8%, 28,9-71,0% и 61,5-89,0%, на откорме – 36,1-54,0%, 12,0 – 31,3% и 32,2-42,0%.

При бактериологических и молекулярно-генетических исследованиях спектр возбудителей был представлен микоплазмами – в 37,8-64,5%, цирковирусом II типа – 44,0-63,6%, вирусом РРСС – 12,0-18,9%, хламидиями – 5,4-12,0%, Pasteurella multocida – 46,1-86,7%, Salmonella cholerae suis – 19,2-60,0%, Salmonella thyphimurium – 6,7-33,3%, Streptococcus pneumoniae – 3,3-20,0%, Actinobacillus pieuropneumoniae – 16,7%.

В значительной степени респираторные болезни были обусловлены ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей в различных сочетаниях: вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма – 37,1%, цирковирус II типа + микоплазма – 41,2%, вирус РРСС + микоплазмы – 28,5%, вирус РРСС + цирковирус II типа + микоплазма + хламидии – 8,7%. Во всех случаях вирусные инфекции осложнялись бактериальной микрофлорой. В 28,9% случаев патология была обусловлена ассоциацией бактерий, из них: Pasteurella multocida + Salmonella cholerae suis – 10,0-26,7%, Pasteurella multocida + Streptococcus – 13,3-23,1%, Salmonella cholerae suis + Salmonella thyphimurium – 6,7-26,7%.

При исследовании сыворотки крови поросят с респираторным синдромом выявлены антитела к вирусу РРСС в 31,3-52,2% (41,7%) случаев, цирковирусу II типа – 47,4-64,3% (53,9%), микоплазмам – в 26,1-53,3% (36,0%) и пастереллам – 57,1-100,0% (74,1%). У клинически здоровых животных сероконверсия к вирусу РРСС составила 25,0-42,9% (34,0%), цирковирусу II типа – 25,0-35,7% (30,4%), микоплазмам – 20,0-25,0% (22,5%) и пастереллам – 60,0-100,0% (80,0%).

При изучении чувствительности выделенных бактерий к антибактериальным препаратам установлено, что в свиноводческих хозяйствах циркулируют антибиотикоустойчивые штаммы микроорганизмов.

Таким образом, во всех изучаемых хозяйствах в возникновении и развитии респираторной патологии поросят принимают участие различные ассоциации возбудителей. Ассоциированные инфекции, вызванные вирусом РРСС, цирковирусом II типа, микоплазмами, протекают более тяжело, чем моноинфекции, вызываемые этими возбудителями. Это свидетельствует о синергизме между вирусом РРСС, цирковирусом II типа и другими возбудителями, которые принимают участие в респираторной патологии.

Широкая циркуляция среди свиней указанных вирусов и микоплазм свидетельствует об их активном участии в возникновении и развитии инфекционного процесса, при котором создаются условия для активации потенциально-патогенной бактериальной микрофлоры.

Установленная сероконверсия к указанным возбудителям у клинически здоровых животных свидетельствует об их инфицированности и, возможно, скрытом переболевании, что создает условия для стационарного неблагополучия хозяйств по инфекционным заболеваниям.

3.2. Факторы, предрасполагающие возникновению и распространению респираторных болезней поросят

При изучении микроклимата в свиноводческих помещениях ОАО «Русская АПК» и ОАО Агрофирмы «Ливенское мясо» было установлено, что температура воздуха была ниже нормы на 24,0 и 16,7%, а влажность воздуха выше нормы на 5,0 – 15,8% соответственно, общая бактериальная обсеменённость помещений составила 54 – 90 тыс. м.к. в 1м3 (допустимая микробная обсеменённость не должна превышать 50 – 60 тыс. м.к. в 1м3); были выделены культуры Escherichia coli (серотипы 0111, 02, 026, 041, 033), Salmonella cholerae suis и Salmonella typhimurium.

В помещении для откорма животных жидкими кормами общая бактериальная обсеменённость составила 70 – 80 тыс. м.к. в 1м3; выделены культуры Escherichia coli (серотипы 02, 01, 0111, 041, 033), в помещении для откорма животных сухими кормами общая бактериальная обсеменённость составила 80 – 90 тыс. м.к. в 1м3, выделена культура Proteus vulgaris.



Pages:   || 2 | 3 |
 

Похожие работы:







 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.