авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

Миндалевидный комплекс мозга в системе регуляции репродуктивных функций организма

-- [ Страница 2 ] --

Иммуноцитохимическое выявление CART-пептида проводили на криостатных срезах головного мозга половозрелых самок крыс линии Вистар, которые были умерщвлены на стадиях эструса и метэструса эстрального цикла. После перфузии головной мозг обрабатывали 1М фосфатным буфером (РВ, рН=7,4) и 4% раствором параформальдегида на 0,1 М РВ на свободно плавающих фронтальных срезах одновременно для двух групп животных. После удаления эндогенной пероксидазы и выдерживания в блокировочном растворе, который содержал 3% бычий сывороточный альбумин (BSA; Sigma, США) и 1% козьий альбумин (GSA, Sigma, США), срезы инкубировали в растворе первичных антител, содержащих поликлональные rabbit-anti-CART (55-102) антитела (H-003-62, Phoenix Pharm., Incorp, Belmont, CA, CША) при +4 С0 в течение 48 часов. Потом срезы промывали и в течение двух часов инкубировали во вторичных goat-anti-rabbit антителах, конъюгированных с авидиновым комплексом (ABC-kit 689321, ICN Biomedicals Inc., США). После промывания срезов, их инкубировали со стрептавидин-пероксидазой (ABC-kit 689321, ICN Biomedicals Ins., CША). Перед заключением под стекло, срезы промывали и инкубировали с раствором 3,3-диаминобензидинтетрагидрохлорида (DAB, Sigma, США) на фосфатно-солевом буфере. Контрольные срезы обрабатывали в указанной выше последовательности без использования первичных антител. Измерение оптической плотности проводили в программе «ФОТО-М»

Электрофизиологическое исследование в эксперименте с моделированием эстрального цикла проведено на половозрелых самках крыс линии Вистар массой тела 280-330 г. Эксперимент включал в себя ряд этапов. На первом этапе изучали влагалищные мазки самок крыс линии Вистар, которые брали строго в определенное время (12 часов дня) для определения его регулярности. Исследование динамики эстральных циклов у самок линии Вистар показало, что самки этой линии (более 80 %) имеют регулярные циклы. Крысам было проведено вживление хронических электродов в переднее кортикальное и в дорсомедиальное ядро МК и через неделю после операции проведена запись фоновой ЭЭГ. На втором этапе самки с вживленными электродами в мозг были подвергнуты операции гонадэктомии (Кабак, 1969). Через месяц после гонадэктомии была повторно проведена запись ЭЭГ. Заместительная терапия гонадэктомированным крысам включала в себя введение инъекции 17 эстрадиола (в дозе 1 мкг/100г массы тела животного) один раз в сутки в течение двух дней, а затем (на третьи сутки) введение 17 эстрадиола с прогестероном (доза 5 мг/100г массы тела животного). Запись ЭЭГ проводилась после двух инъекций 17эстрадиола (на второй день, через три часа после инъекции) и на третий день через три часа после введение 17 эстрадиола с прогестероном.

Для регистрации фоновой электрической активности было произведено стереотаксическое вживление биполярных электродов в переднее кортикальное ядро переднего отдела и в дорсомедиальное ядро заднего отдела МК. После операции по вживлению электродов в течение экспериментального периода крыс содержали в индивидуальных клетках. Для регистрации ЭЭГ были использованы биполярные электроды из изолированной нихромовой проволоки поперечным сечением 0,1 мм. Использовали стереотаксический прибор Хорслея-Делла, предназначенный для кошек (тип ЭМИБ-1), заменив опору верхней челюсти, с учетом особенности строения черепа крысы и уменьшили диаметр кончиков ушных стержней по размерам наружных слуховых проходов у крыс.



Операции по вживлению электродов проводили в условиях, близких к стерильным, под общим эфирным наркозом. Имплантацию стерильных электродов проводили по координатам стереотаксического атласа мозга De Groot (1959).Для фиксации электродов использовали протакрил – М.

Регистрацию ЭЭГ проводили в условиях свободного поведения с помощью программно-управляемого комплекса, включающего четырехканальный полный усилитель УБФ4-03 и IBM PC совместимый компьютер с установленной платой аналого-цифрового и цифро-аналогового преобразователя (АЦП-ЦАП) марки DigiLine (DL-160). Специальная программа управления комплексам, разработанная для операционной системы МS-DOS в НИИ ВНД и НФ (автор Ю.Райгородцев), дает возможность задавать множество параметров эксперимента и первичного анализа данных. С помощью данного комплекса, сигнал, поступающий с аналогового входа, усиливается и подается на плату АЦП-ЦАП, где оцифровывается и затем отображается на мониторе компьютера в реальном режиме.

Перед началом регистрации устанавливали параметры записи. Использовали следующие параметры: частотный интервал пропускания 0,3-70 Гц, интервал дискретизации 10 мс, усиление на выходном усилителе 10, длина эпохи 10 секунд. Перед записью ЭЭГ сигнал центрировали по нулевой линии.

Проводили визуальный и частотно-спектральный анализы участков ЭЭГ, зарегистрированных в состоянии спокойного бодрствования. Визуальный анализ был направлен на определение характера ЭГ-активности. Также при помощи визуального анализа проводили исключение видимых артефактов. Спектральный анализ был направлен на определение спектра частот, составляющих тот или иной сигнал. Пользовались информативной и помехоустойчивой частотной характеристикой - относительной спектральной плотностью (ОСП) (Ронкин, Зенков, 1992; Зенков, 1996). Анализ представлял собой вычисление спектральных плотностей колебаний в следующих диапазонах: -диапазон (1-4 Гц), - диапазон (4-8 Гц), – диапазон (8-13 Гц), 1- диапазон (13-18 Гц) и 2- диапазон (18-32 Гц). Затем, на основании результатов спектрального анализа, в программе «Excel 8,0» производили вычисление ОСП колебаний в пяти диапазонах, определяемой как процентная доля спектральной плотности отдельного диапазона от суммы спектральных плотностей колебаний во всем анализируемом интервале 1-32 Гц. После окончания всех предусмотренных опытов на крысах с вживленными электродами, проводили морфологический контроль, для уверенности в правильном попадании электрода в пределы определенного анатомического образования.

Периодически на протяжении всего эксперимента проводили определение содержания в крови лютеинизирующего гормона (ЛГ). Анализ исследуемых сывороток крови на ЛГ проводили иммунорадиометрическим методом с использованием теста SPECTRIA LH IRMA [125I] фирмы ORION Diagnostica (Финдляндия).

Статистическую обработку осуществляли с помощью пакета программ «Statistica 5.5».

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Общая структурная организация переднего отдела миндалевидного комплекса мозга

Передний отдел миндалевидного комплекса (МК) крысы, на территории которого находятся изученные нами репродуктивные центры, имеет значительную ростро-каудальную протяженность и включает в себя большое количество гетероморфных структур. Это обстоятельство, а также существующая терминологическая неточность в их обозначении, продиктовали необходимость детального изучения их структурной организации с целью последующей классификации.

На ростральном уро вне отдела находится передняя амигдалярная область, которая занимает самое медиальное положение среди остальных структур МК, примыкая к супраоптическому ядру гипоталамуса медиально и ядру латерального обонятельного тракта латерально. При ее изучении видно, что нервные клетки располагаются дисперсно. Размеры перикарионов варьируют от мелких до крупных (8-10 и 20-25 мкм), различаясь по содержанию хроматофильной субстанции. Нейроны по своим характеристикам соответствуют длинноаксонным редковетвистым нейронам короткодендритного и ретикулярного типа. Впервые нами в составе этой области выявлены гигантские мультиполярные нейроны, которым приписывают функции интегративно-пусковых нейронов.

Латерально к передней амигдалярной области располагается ядро латерального обонятельного тракта. Название структуры "ядро" на первый взгляд, адекватно отражает наблюдаемую в препаратах картину, так как оно имеет характер очагового скопления нейронов, обладающего овальной конфигурацией. Однако, более детальное изучение цитоархитектоники обнаруживает наличие послойного расположения нейронов и их отростков, что отражает его принадлежность к формациям палеокортекса.

Переднее кортикальное ядро на ростральном уровне переднего отдела занимает небольшую площадь, но она возрастает на каудальном уровне переднего отдела и оно является самым массивным образованием среди структур переднего отдела. При этом общий план строения переднего кортикального ядра сохраняется таким же, что и на ростральном уровне. Особенности строения этого ядра, выявленные при изучении его цитоархитектоники, находят отражение и в особенностях нейронной организации. Эти особенности находят выражение в наличии трех зон. Поверхностная зона содержит скопление волокон с небольшим количеством нейронов, относящихся к длинноаксонным редковетвистым. В поверхностной клеточной зоне хорошо определяется дифференциация на медиальную и латеральную части. В латеральной части преобладают нейроны коркового типа в виде пирамидообразных, в то время как, в медиальной - пирамидообразные и веретенообразные нейроны единичны, и преобладающим типом клеток являются длинноаксонные редковетвистые нейроны короткодендритного класса. В глубокой зоне представлены длинноаксонные густоветвистые нейроны подкоркового типа.

Медиобазальный угол МК занят медиальным ядром, которое по цитоархитектонике имеет много общего с передним кортикальным ядром и отнесено нами к межуточным формациям. Изучение цитоархитектоники показывает, что его территория включает в себя поверхностную (выходящую на базальную поверхность мозга) бесклеточную зону и скопление нейронов, различные части которого отличаются плотностью упаковки нейронов. Нейронная организация медиального ядра характеризуется мономорфностью. Все нейроны медиального ядра относятся к длинноаксонным редковетвистым нейронам - короткодендритным и ретикулярным.

Дорсальнее медиального ядра находится центральное ядро, оно образовано очаговым скоплением преимущественно среднего размера нейронов, границы которого хорошо определяются в цитоархитектонических препаратах.

Среди структур переднего отдела хорошо дифференцируются множественные гнездные скопления малых нейронов, получившие название "вставочных масс". Все эти нейроны можно отнести к длинноаксонным редковетвистым нейронам короткодендритного типа или к длинноаксонным редковетвистым нейронам с признаками переходных от короткодендритных к ретикулярным.

В центральных зонах переднего отдела находятся большие по площади латеральное и базолатеральное ядра. Они образованы средними и крупными нервными клетками, перикарионы которых имеют преимущественно полигональную форму. Входящие в состав этого ядра нейроны обладают пирамидообразной формой.

Латеральнее переднего кортикального ядра располагается пириформноая кора. В составе этой структуры есть четкие слои. Первый слой - плексиформный, на пов ерхности мозга; II - густоклеточный, образован нейронами, которые располагаются с большой плотностью и упорядоченно; III слой – глубокий; большинство нейронов которого обладают характеристиками длинноаксонных густоветвистых нейронов.

Между указанными выше структурами располагаются переходные зоны. Во всех этих зонах определяется дисперсное расположение нейронов с примерно одинаковой плотностью. Все переходные зоны, располагающиеся между структурами МК, формируют своеобразный фон, на котором выделяются ядра и клеточные слои палеокортикальных формаций.

Приведенный выше обзор структурной организации переднего отдела показывает, что основную часть его территории занимают скопления нейронов, различающиеся по своей цитоархитектонике и нейронной организации. При этом вошедшие в употребление термины в отношении ряда структур не отражают особенностей их структурной организации. Это создает затруднения при организации экспериментальных работ и указывает на необходимость их классификации на основании двух основных принципов организации серого вещества нервной системы – ядерного и экранного.

При проведении их классификации мы опирались на учение Заварзина А.А. (1986) о ядерных и экранных центрах нервной системы. При этом оценка принадлежности экранных структур к формациям древней коры была выполнена на основе положений, разработанных Pigache (1971) и Калимуллиной Л.Б. (1989). Ядерными центрами на территории переднего отдела являются латеральное, базолатеральное, центральное, эндопириформное ядра и вставочные массы. Все эти образования имеют четкие границы с окружающими структурами, что позволяет корректно определить их количественные характеристики. Экранными центрами являются пириформная кора, ядро латерального обонятельного тракта, в цитоархитектонике которых группировки нейронов формируют четкие слои. При этом пириформная кора полностью отвечает критериям палеокортекса (Pigache,1971, Калимуллина,1989).





Промежуточное положение между экранными и ядерными центрами занимают межуточные формации (Филимонов, 1949), клеточные массы которых имеют тенденцию к расслоению, но еще не формируют четко дифференцирующихся слоев. Определяющим признаком в них является отсутствие сетчатых слоев, которые присутствуют в экранных центрах за счет переплетения отростков составляющих их нейронов. Это подтверждено нами с использованием метода Гольджи. К межуточным формациям относятся переднее кортикальное ядро, медиальное ядро и передняя амигдалярная область, для характеристики их гетероморфных частей нами использован термин «зона». Территория МК, свободная от ядерных, экранных и межуточных формаций, занята переходными зонами и волокнистыми прослойками.

Анализ цитоархитектоники переднего отдела и нейронной организации входящих в его состав структур дал ключ к пониманию филогенетического возраста структур. Для филогенетически древних отделов мозга характерно преобладание длинноаксонных редковетвистых нейронов, а для филогенетически более молодых - преобладающим типом нейронов становятся длинноаксонные густоветвистые (Леонтович, 1978).

Приведенные выше сведения о нейронной организации структур переднего отдела МК показали, что его территория делится на две части. Медиальную (меньшую по величине), в которой преобладают длинноаксонные редковетвистые нейроны, и латеральную, где в большей степени представлены длинноаксонные густоветвистые нейроны. Среди последних в ряде ядер (базолатеральном и латеральном) есть немало длинноаксонных густоветвистых нейронов, обладающих характеристиками корковых нейронов.

Распределение длинноаксонных редковетвистых и длинноаксонных густоветвистых нейронов позволяет говорить о присутствии на территории МК двух нейронных систем – редковетвистой и густоветвистой (Леонтович, 1978). В состав редковетвистой нейронной системы МК входят медиальное ядро, передняя амигдалярная область, медиальная часть поверхностной клеточной зоны переднего кортикального ядра, медиальное субъядро центрального ядра и вставочные массы. Густоветвистая нейронная система включает в себя латеральное, базолатеральное, эндопириформные ядра и пириформную кору.

Репродуктивные центры переднего отдела МК, к которым относятся передняя амигдалярная область, медиальное и переднее кортикальное ядра, находятся на территории редковетвистой нейронной системы МК, что свидетельствует о том, что они появляются на ранних этапах филогенетического развития позвоночных. Это обстоятельство легко объяснимо с точки зрения их функции – свойство воспроизведения является самым важным свойством организмов, направленным на сохранение особей и вида в ходе эволюции.

Во всех репродуктивных центрах переднего отдела преобладающим классом нейронов являются длинноаксонные редковетвистые нейроны типа короткодендритных, которым приписывают участие в нейроэндокринных взаимоотношениях (Леонтович, 1978, Ахмадеев, Калимуллина, 2007). Ориентируясь на локализацию этих нейронов, мы определяли положение вводимых в мозг электродов в эксперименте по изучению ростро-каудального градиента в структурно-функциональной организации МК.

В работе приведены подробные данные анализа структурно-количественных характеристик (измерения абсолютных и удельных площадей) различных формаций переднего отдела, а также результаты математико-статистического анализа их формообразующих функций.

Полученные данные показали, что на ростральном уровне переднего отдела наибольшая площадь занята палеокортикальными и межуточными формациями. Полученные данные при использовании рангового показателя корреляции по Спирмену свидетельствуют о том, что определяется высокая степень корреляции между величинами общей площади и размерами площади, занятой как структурами палеокортекса, так и ядерными структурами. Это показывает, что ядерные и палеокортикальные структуры являются равноправными партнерами при формировании общей конструкции МК.

Результаты планиметрирования каудального уровня переднего отдела показали, общая площадь МК, составляющая 1517,91±61,6 ус.пл.ед.(5,706 мм2) распределяется между четырьмя категориями структур практически поровну. и можно говорить о практически «равноправном» их представительстве на территории МК. Величина рангового показателя корреляции по Спирмену свидетельствуют о том, что существуют тесная связь между общей площадью МК и площадью межуточных формаций, при отсутствии таковой с площадью ядерных, экранных структур и переходных зон. Обнаруженный факт указывает на наличие важных функций у межуточных формаций МК, включая и участие в регуляции репродуктивных процессов, которые рассматриваются в нашей работе.

Результаты структурно-количественного анализа переднего отдела показали соотношение представительства ядерных, экранных и межуточных формаций на его территории. Они подтвердили данные изучения нейронной организации и цитоархитектонического анализа переднего отдела, впервые показав, что передний отдел МК является ядерно-палеокортикальным компонентом мозга. Значительная часть площади МК занята репродуктивными центрами (переднее кортикальное ядро, передняя амигдалярная область), которые по своей структурной организации представляют собой межуточные формации и находятся на территории редковетвистой нейронной системы МК.

3.2 Цитологическая характеристика нейроэндокринных нейронов

репродуктивных центров переднего отдела МК



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 

Похожие работы:








 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.