Сравнительное фармакогностическое исследование долговегетирующих видов рода euphrasia l. флоры пермского края
В гексановых извлечениях, полученных из травы исследуемых видов рода Euphrasia, обнаружено 16 липофильных компонентов, доминирующими являются: высшие алканы (октадекан, нонадекан, гексакозан, октакозан, нонакозан, эйкозан), а так же фитостерин ( - ситостерол) и его предшественник (сквален). Содержание жирных кислот и их альдегидов незначительно (табл. 7).
Таблица 7
Состав гексановых извлечений из растений рода Euphrasia L.
| Соединение | Количественное содержание, %* | Степень совпадения с библиотечным масс-спектром, % | ||||||
| E. officinalis | E. tatarica | E. stricta | E. reuteri | E. murbeckii | E. brevipila | E. parviflora | ||
| Неофитадиен | ---** | --- | --- | --- | --- | 0,60 | --- | 99 |
| Октадекан | --- | --- | --- | 9,45 | --- | 1,11 | --- | 95 |
| Нонадекан | 9,82 | --- | 4,01 | --- | 7,78 | 6,89 | 7,34 | 90 |
| Эйкозан | --- | 6,62 | --- | --- | --- | 6,71 | 3,10 | 98 |
| Гексакозан | 6,68 | --- | 20,90 | --- | 38,49 | --- | 27,69 | 91 |
| Гептакозан | --- | --- | --- | 9,79 | --- | 7,08 | --- | 99 |
| Октакозан | 33,62 | --- | 6,28 | --- | 7,19 | 2,85 | 7,50 | 83 |
| Нонакозан | --- | 14,24 | --- | 21,47 | --- | 35,38 | --- | 97 |
| 2-Нонакозанон | --- | --- | 0,56 | --- | --- | --- | --- | 94 |
| Сквален | 1,96 | 1,48 | --- | 2,97 | --- | --- | --- | 92 |
| - Ситостерол | 1,56 | --- | 28,16 | 2,67 | 10,87 | 21,32 | 15,03 | 93 |
| Додекановый (лауриновый) альдегид | 2,05 | --- | --- | --- | 0,59 | --- | --- | 91 |
| Тетрадекановый (миристиновый) альдегид | 1,86 | --- | --- | --- | 0,42 | --- | --- | 95 |
| Гексадекановая (пальмитиновая) кислота | 2,81 | --- | 7,75 | 1,59 | 5,32 | --- | 10,05 | 93 |
| Октадекановая (стеариновая) кислота | --- | --- | 1,91 | --- | --- | --- | --- | 91 |
| 9,12-октадекадиеновая (линолевая) кислота | --- | --- | --- | --- | --- | --- | 1,91 | 99 |
| 9,12,15-Октадекатриеновая (линоленовая) кислота | --- | --- | 15,92 | --- | 6,04 | --- | 6,93 | 93 |
| 9-Октадеценовая (олеиновая) кислота | --- | --- | --- | --- | --- | --- | 2,91 | 86 |
| Тиомочевина | 4,22 | --- | --- | --- | --- | --- | --- | 80 |
| 6,10,14-триметил-2-пентадеканон (гексагидрофарнезил-ацетон) | --- | --- | 0,27 | --- | --- | 0,48 | --- | 97 |
| 1,2-Бензолдикарбоновая (фталевая) кислота | --- | --- | --- | --- | --- | 0,66 | --- | 97 |
| Фитол | --- | --- | --- | --- | --- | 1,24 | --- | 91 |
Примечание: * - содержание компонентов в нормировочных процентах от суммы площадей всех зарегистрированных пиков; ** - содержание соединения относительно суммы всех пиков менее 0,005% или его отсутствие.
Сравнительный анализ долговегетирующих видов показал, что компонентный состав липофильных веществ варьирует от трех (E. tatarica) до одиннадцати (E. brevipila) веществ, у E. officinalis, E. stricta и E. parviflora представлен девятью веществами.
Суммарное содержание идентифицированных липофильных компонентов в растениях рода Euphrasia убывает в ряду E. stricta > E. brevipila > E. murbeckii > E. parviflora > E. officinalis > E. reuteri > E. tatarica.
Фармакологические свойства растений рода Euphrasia
Проведена сравнительная оценка антикоагулянтной активности сухих водных и спиртовых экстрактов из долговегетирующих растений рода Euphrasia флоры Пермского края.
Наиболее высокая антикоагулянтная активность отмечена у спиртовых экстрактов из травы E. reuteri (22,5%) и E. stricta (21,3%), водного из E. murbeckii (23,5%), а так же водного и спиртового из E. parviflora (22,5 и 22,0% соответственно). Остальные экстракты проявляют активность в пределах от 15,3 до 19,1% (табл. 8).
Таблица 8
Антикоагулянтная активность сухих экстрактов
из растений рода Euphrasia L.
| № п/п | Вид | Экстрагент | Время свертывания, с | Изменение свертываемости, % | Р | |
| контроль | опыт | |||||
| 1 | E. brevipila | вода | 30,5±0,63 | 34,5±0,79 | – 16,6 | < 0,002 |
| спирт | 29,9±0,53 | 34,4±1,20 | – 15,3 | < 0,01 | ||
| 2 | E. reuteri | вода | 29,7±1,26 | 35,1±1,75 | – 18,3 | < 0,02 |
| спирт | 28,2±1,16 | 34,5±1,44 | – 22,5 | < 0,002 | ||
| 3 | E. parvifora | вода | 26,6±1,24 | 32,6±1,73 | – 22,5 | < 0,02 |
| спирт | 26,4±1,13 | 32,2±1,35 | – 22,0 | < 0,02 | ||
| 4 | E. officinalis | вода | 28,2±0,58 | 33,4±1,27 | – 18,5 | < 0,002 |
| спирт | 20,9±1,07 | 24,9±0,93 | – 19,1 | < 0,01 | ||
| 5 | E. tatarica | вода | 20,5±0,89 | 24,1±1,43 | – 17,7 | < 0,05 |
| спирт | 35,3±1,49 | 41,2±1,84 | – 16,7 | < 0,05 | ||
| 6 | E. murbeckii | вода | 22,6±1,21 | 27,9±0,94 | – 23,5 | < 0,01 |
| спирт | 22,7±1,17 | 26,8±0,15 | – 18,1 | < 0,02 | ||
| 7 | E. stricta | вода | 14,6±0,62 | 17,4±0,72 | – 18,8 | < 0,02 |
| спирт | 18,6±0,64 | 22,6±0,42 | – 21,3 | < 0,001 | ||
| 8 | Гепарин | --- | 29,9±0,48 | 36,6±1,82 | – 22,4 | < 0,01 |
Установлена антирадикальная активность (АРА) у исследуемых видов рода Euphrasia. Время полураспада стабильного радикала ДФПГ изменяется в пределах 0,5 – 27 мин. Наиболее высокую активность показали извлечения из E.murbeckii, E. brevipila, E. tatarica, E. stricta (0,5 – 6 мин). Низкая антирадикальная активность обнаружена у извлечений из E. reuteri, E. officinalis и E. parviflora (18 – 27 мин). Степень выраженности антирадикальной активности изученных видов зависит от содержания в них фенольных соединений и иридоидов (рис. 6). Коэффициент корреляции составляет - 0,841 и - 0,681, соответственно.
окисляемые вещества; флавоноиды; иридоиды; АРА, мин.
Рис. 6. Зависимость между АРА ( 1/2) и количественным содержанием БАВ в растениях рода Euphrasia L.
Наибольшей антирадикальной активностью обладают извлечения из генеративных органов - цветков и плодов (не более 0,5 мин). Низкую активность показали извлечения из корней и стеблей (45 мин). Антирадикальная активность травы составила 2 минуты, что объясняется большим удельным весом в массе растения листьев, цветков и плодов.
Сухие спиртовые экстракты всех исследуемых видов рода Euphrasia малотоксичны, ЛД50 при введении в желудок – более 5000 мг/кг.
Анализ результатов биологических испытаний подтверждает целесообразность использования растений рода Euphrasia в научной медицине и позволяет рекомендовать их для разработки фитопрепаратов с антикоагулянтной и антирадикальной активностью.
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
- Изучено морфолого-анатомическое строение четырех перспективных видов рода Euphrasia, произрастающих в Пермском крае: E. officinalis, E. tatarica, E. murbeckii и E. stricta. Методом сравнительного анализа с морфологически близкими ранее изученными видами (E. reuteri, E. brevipila, E. parviflora), определен комплекс низковариабельных признаков для диагностики цельного и измельченного сырья, включенный в проект изменения к ФС «Очанки трава».
- Установлено, что исследованные виды рода Euphrasia имеют близкий химический состав продуктов вторичного метаболизма, представленный флавоноидами, иридоидами и фенолкарбоновыми кислотами. С помощью аутентичных образцов доказано наличие цинарозида, хлорогеновой кислоты и аукубина. Данные вещества являются константными для рода Euphrasia и могут использоваться в фармацевтическом и хемосистематическом анализе.
Изучено количественное содержание основных групп БАВ, наибольшее количество накапливается в траве и органах E.murbeckii, а наименьшее в E. officinalis и E. stricta. Среднее содержание БАВ, установленное для рода составляет: флавоноидов – 6,11%; иридоидов – 0,33%; окисляемые вещества – 7,81% и сопоставимо с результатами, полученными ранее.
- Разработаны и включены в проект изменения к ФС «Очанки трава» числовые показатели, регламентирующие доброкачественность цельного и измельченного сырья (флавоноидов в пересчете на цинарозид не менее 2%; экстрактивных веществ, извлекаемых 40% спиртом, не менее 20%; и др.), с учетом дополнительных производящих растений: E. officinalis, E. tatarica, E. murbeckii, E. stricta.
- Изучен качественный состав и количественное содержание продуктов первичного метаболизма и пигментов в траве и органах семи видов рода Euphrasia: E. officinalis, E. tatarica, E. murbeckii, E. stricta, E. reuteri, E. brevipila и E. parviflora.
Установлено наличие 12 аминокислот, в том числе 3-х незаменимых. Из них идентифицированы: орнитин, аргинин, пролин, глутаминовая кислота, аланин, аспарагин, серин, валин, изолейцин. Количественное содержание свободных аминокислот в траве находится в пределах 0,82 – 1,64%.
Компонентный состав углеводов представлен шестью веществами, при этом глюкоза, галактоза, ксилоза, арабиноза и рамноза присутствуют как в свободном, так и в связанном состоянии. Содержание углеводов в траве находится в пределах от 3,91% до 8,65%, максимальное количество от общей суммы приходится на низкомолекулярные сахара.
Пигменты исследуемого рода представлены 11 веществами, три из которых идентифицированы как -каротин, хлорофилл а и b, девять веществ отнесены к производным каротина и ксантофилла. Суммарное содержание зеленых пигментов и продуктов их разрушения в траве в среднем составляет 5,01 мг/г. Содержание каротиноидов варьирует от 0,26 до 0,40 мг/г.
По органам исследуемые вещества распределены неравномерно, их максимальное количество установлено в генеративных органах (аминокислоты и углеводы) и листьях (пигменты), а минимальное – в корнях и стеблях.
В гексановых извлечениях обнаружено 16 липофильных компонентов, доминирующими являются: высшие алканы (октадекан, нонадекан, гексакозан, октакозан, нонакозан, эйкозан), а так же фитостерин ( - ситостерол) и его предшественник (сквален). Содержание жирных кислот и их альдегидов незначительно.
- Разработана методика количественного определения углеводов в сырье очанки, позволяющая проводить поэтапное определение содержания низкомолекулярных сахаров и полисахаридов, а также их суммы из одной навески. Относительная ошибка метода определения суммы полисахаридов и низкомолекулярных сахаров составляет ± 4,7%, а полисахаридов – ± 6,5%.
- Установлено, что растения рода Euphrasia перспективны для разработки фитопрепаратов с антикоагулянтной и антирадикальной активностью. В результате определения острой токсичности сухие спиртовые экстракты из исследуемых растений отнесены по общепринятой классификации к группе малоопасных.
Список опубликованных работ
- Абдуллина, Е. С. Сравнительный морфологический анализ Euphrasia hirtella и Euphrasia tatarica (Scrophulariaceae) // Е. С. Абдуллина, О. А. Кроткова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2006. – №1. – С. 92.
- Кроткова, О. А. Сравнительный анализ анатомического строения Euphrasia tatarica Fisch. и Euphrasia fennica Kihlm. (Scrophulariaceae) / О. А. Кроткова, Е. С. Абдуллина // Там же. – С. 244 - 246.
- Кроткова, О. А. Сравнительное исследование флавоноидов Euphrasia tatarica (Scrophulariaceae), произрастающей в Уральском регионе/ О. А. Кроткова, Т. В. Сухинина // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа: Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, 28 сентября – 3 октября 2009 г., Пермь, ГОУ ВПО ПГФА Росздрава, 2009. – С. 153 - 156.
- Петриченко, В. М. Биологические и химические свойства растений семейства норичниковые / В. М. Петриченко, … О. А. Кроткова и др. // Региональный конкурс РФФИ - Урал. Результаты научных исследований, полученные за 2007-2009 гг. Сб. статей. Ч. 2. Пермь: ПНЦ УрО РАН, 2010. – С. 113 - 117.
- Кроткова, О. А. Фенольные соединения Euphrasia officinalis / О. А. Кроткова, Т. В. Сухинина, В. М. Петриченко // Актуальные проблемы современной науки и образования. Биологические науки: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. Т. II. – Уфа: РИЦ БашГУ, 2010. – С. 418 - 422.
- Кроткова, О. А. Компонентный состав иридоидов некоторых видов рода очанка флоры Пермского края / О. А. Кроткова, Е. А. Булгакова, Е. А. Мальцева, Е. П. Смирнова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2010. – №6. – С. 211 - 213.
- Кроткова, О. А. Влияние места произрастания на содержание биологически активных веществ в очанке лекарственной / О. А. Кроткова, М. В. Мельник, Е. С. Солодникова, В. А. Захарова // Там же. – С. 213 - 216.
- Бомбела, Т. В. Подлинность и количественное определение действующих компонентов настойки очанки коротковолосистой / Т. В. Бомбела, … О. А. Кроткова и др. // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2010. – №7. – С. 28 -
