авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 |

Фитохимическое изучение экстрактов коровяка черного и возможности их использования в медицине

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

КАЛИНИНА СВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ КОРОВЯКА ЧЕРНОГО И ВОЗМОЖНОСТИ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В МЕДИЦИНЕ

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь – 2013

Диссертационная работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

Петриченко Василий Михайлович

Сыропятов Борис Яковлевич

доктор фармацевтических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Фурса Николай Сергеевич

доктор фармацевтических наук,

профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «ЯГМА» Минздрава России

Эвич Нина Ивановна

кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической химии ФДПО и ФЗО ГБОУ ВПО «ПГФА» Минздрава России

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится «11» июня 2013 г. в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.068.01 при государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2. Тел./факс (342)233-5501.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан « » 2013 г.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства образования и науки РФ http://www.mon.gov.ru « » апреля 2013 г. и на сайте ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России http://pfa.ru « » апреля 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.068.01, кандидат фармацевтических наук Н.В. Слепова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В настоящее время лекарственные средства растительного происхождения составляют около 20% от общего числа препаратов. Растительные препараты используются в комплексном лечении хронических заболеваний, так как они обеспечивают безопасность терапии при длительном курсовом лечении.

С целью создания высокоэффективных и безопасных лекарственных средств актуальным является выделение из растительного сырья индивидуальных компонентов и создание новых фитопрепаратов.

Основным источником для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. Широкое использование коровяка черного в народной медицине при лечении заболеваний сердечно-сосудистой, урогенитальной систем указывает на необходимость углубленного фитохимического анализа, исследования компонентного состава, определения групп соединений, проявляющих фармакологическую активность, и разработку препарата на его основе.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы являлось комплексное исследование химико-фармакологических свойств, технологии и стандартизация экстрактов коровяка черного и обоснование возможности их использования в медицине.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить качественный состав биологически активных веществ в экстрактах из травы и различных органов к. черного.

2. Провести хроматографическое разделение экстракта к. черного и выделить основные фракции БАВ и индивидуальные соединения.

3. Разработать методики количественного определения флавоноидов и иридоидов для изучения количественное содержание БАВ в исследуемых экстрактах к. черного.

4. Провести химико-технологические исследования по разработке оптимальной технологии экстракта травы к. черного сухого.

5. Обосновать методы стандартизации, показатели и нормы качества экстракта к. черного сухого.

6. Разработать НД на экстракт к. черного сухой.

7. Выявить и оценить фармакологическую активность, острую токсичность фракций и экстрактов к. черного.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые проведено комплексное фитохимическое исследование экстрактов из надземной части и различных органов к. черного.

Методом колоночной хроматографии из экстракта к. черного выделены фракции: полисахаридов, кумаринов, флавоноидов и фенолокислот; изучен их компонентный состав; впервые выделены и идентифицированы гесперидин, хлорогеновая и кофейная кислоты.

Разработана методика количественного определения флавоноидов в экстракте травы к. черного методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на гесперидин.

Методом математического моделирования разработана оптимальная технология экстракта травы к. черного сухого. Обоснованы методы стандартизации, показатели и нормы качества экстракта, включенные в проект Фармакопейной статьи предприятия (ФСП).

Впервые выявлено гипотензивное, антикоагулянтное и диуретическое действие экстрактов к. черного. Установлена связь между фармакологической активностью и количественным содержанием группы БАВ.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. В результате проведенных исследований выделены индивидуальные соединения – гесперидин, хлорогеновая и кофейная кислоты. Разработан способ получения экстракта травы к. черного сухого, установлены основные показатели подлинности и доброкачественности экстракта, которые легли в основу нормативной документации. Доказана гипотензивная, антикоагулянтная, диуретическая активности экстракта к. черного. Подана заявка на патент № 2011126730 от 29.06.2011.

СТЕПЕНЬ ВНЕДРЕНИЯ. Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Пермской государственной фармацевтической академии, кафедры фармакогнозии и ботаники фармацевтического факультета Новосибирского государственного медицинского университета, кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета, кафедры фармакогнозии и фармацевтической технологии Ярославской государственной медицинской академии. Подготовлен к рассмотрению проект ФСП «Экстракт коровяка черного сухой».

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

  1. Результаты фитохимического анализа компонентного состава и количественного содержания основных групп БАВ в экстрактах к. черного.
  2. Результаты хроматографического разделения экстракта к. черного и изучение компонентного состава фракций и выделение индивидуальных веществ.
  3. Результаты фармакологических исследований экстрактов к. черного.
  4. Обоснование методов стандартизации, показателей и норм качества экстракта надземной части к. черного сухого.

АПРОБАЦИЯ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. Основные положения работы доложены и обобщены на научно-практических конференциях: VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006); 65-ой открытой научно-практической конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 2007); II международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 2007); Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования (ПГФА, Пермь, 2009 – 2012); ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2010); International conference «Renewable wood and plant resources: chemistry, technology, pharmacology, medicine» (Saint Petersburg, 2011); научной конференции «Curtin Health Innovation Research Institute (CHIRI) conference» (Австралия, Перт, 2012), научной конференции «The second International Conference and Exhibition, PharmaTech 2012 on Pharmaceutical, Nutraceutical and Cosmeceutical Technology» (Малайзия, Куала-Лумпур, 2012).

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМАМИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пермской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01.9.50 007426).

ЛИЧНОЕ УЧАСТИЕ АВТОРА. Автор непосредственно участвовал в проведении научных экспериментов, обработке и интерпретации экспериментальных данных, в апробации результатов исследования, подготовке публикаций по выполненной работе.

СООТВЕТСТВИЕ ДИССЕРТАЦИИ ПАСПОРТУ НАУЧНОЙ СПЕЦИАЛЬНОСТИ. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам исследования опубликовано 20 научных работ, из них 5 в изданиях, рекомендованных ВАК.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 204 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, четырех глав, отражающих результаты собственных исследований и выводов. Работа иллюстрирована 60 таблицами и 29 рисунками. Библиографический указатель включает 295 источников, из них 193 на иностранных языках.

Во введении изложена актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, обозначена новизна и практическая значимость проведенных исследований; описаны положения, выносимые на защиту.

Первая глава содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы: систематическое положение, распространение рода Verbascum L. и вида V. nigrum L. в Российской Федерации и за рубежом, ботаническое описание; химический состав и биологические свойства основных компонентов V. nigrum, данные о применении вида в народной медицине и экспериментальной фармакологии, обоснование перспективности изучения V. nigrum и разработки на его основе фитопрепаратов направленного действия.

Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования.

В третьей главе отражены результаты исследований качественного состава и количественного содержания БАВ экстракта к. черного. Определение состава фенольных и иридоидных соединений, идентификация хлорогеновой и кофейной кислот, гесперидина, кверцетина, лютеолина и аукубина. Методом колоночной хроматографии разделены фракции основных групп БАВ, выделены индивидуальные компоненты, при помощи УФ, ИК и ПМР спектроскопии доказана их структура. Приведена модификация методики количественного определения иридоидов фотоэлектроколориметрическим методом для экстракта. Определено количественное содержание фенольных соединений в экстрактах коровяка черного.

В четвертой главе изложена разработка технологии экстракта травы к. черного.

Пятая глава посвящена исследованию фармакологической активности экстрактов и БАВ к. черного.

В шестой главе приведена разработка нормативной документации на экстракт к. черного сухой.

В приложении представлены лабораторный регламент на технологию экстракта к. черного сухого, проект ФСП «Экстракт коровяка черного сухой», исследования микробиологической чистоты экстракта, результаты апробации методики количественного определения флавоноидов в пересчете на гесперидин, основные документы, отражающие внедрение результатов диссертационной работы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили экстракты водные и спиртовые сухие травы, стеблей, листьев, цветков, корней трех видов рода Verbascum – Коровяк (V. nigrim – к. черный, V. thapsus – к. обыкновенный, V. densiflorum – к. скипетровидный) и ряд фракций БАВ к. черного. Образцы растений рода Verbascum для получения экстрактов заготовлены на территории Пермского края, Удмуртской республики и Свердловской области и на интродукционном участке питомника ПГФА в период 2006–2011 гг.

Исследуемые экстракты и извлечения получены по четырем методикам:

Методика I: 50 г измельченного и просеянного сквозь сито 2 мм растительного материала (трава, листья, стебли, цветки, корни) помещали в круглодонную колбу, заливали 300 мл воды и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 2 ч (экстракцию повторяли 2 раза); извлечения охлаждали, процеживали и объединяли; сгущали на ротационном испарителе марки ИР-1 под вакуумом. Извлечение выдерживали в сушильном шкафу при температуре не более 60С в течение 6 ч, до полного удаления влаги.

Методика II: 50 г измельченного и просеянного сквозь сито 2 мм растительного материала (трава, листья, стебли, цветки, корни) помещали в круглодонную колбу, заливали 300 мл этанола 70% и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 2 ч; извлечение охлаждали, фильтровали через бумажный фильтр; сырье повторно заливали 300 мл этанола 40% и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником 2 ч; извлечения объединяли; сгущали на ротационном испарителе под вакуумом. Извлечение выдерживали в сушильном шкафу при температуре не более 60 С в течение 3 ч, до полного удаления экстрагента.

Методика III: измельченную и просеянную сквозь сито 1 мм траву к. черного экстрагировали методом реперколяции с законченным циклом в батарее из трех перколяторов, имеющих различную емкость. В качестве экстрагента использовали этанол 60%. Сырье (100 объемных частей) в экстракторы загружали в убывающих количествах в соотношении 50:30:20. Концентрированную вытяжку сливали в объемных частях в возрастающем соотношении 20:30:50, в целом, получали 100 объемных частей концентрированной вытяжки; процеживали, сгущали на ротационном испарителе под вакуумом. Густой экстракт выдерживали в сушильном шкафу при температуре не более 60 С в течение 3 ч, до полного удаления экстрагента.

Методика IV: 400 г измельченной надземной части до размера частиц менее 5 мм помещали в круглодонную колбу и подвергали исчерпывающей экстракции: Сырье заливали 1,5 л этанола 70%, нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 5 ч; извлечение охлаждали, процеживали; затем заливали 800 мл этанола 40% нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 5 ч; извлечение охлаждали, процеживали; заливали 800 мл воды, нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 5 ч; извлечение охлаждали, процеживали. Полученные извлечения объединяли, сгущали на ротационном испарителе под вакуумом до объема 150 мл.

Качественный состав и количественное содержание БАВ исследовали с помощью современных методов фитохимического анализа: хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента, фотоэлектроколориметрия, УФ спектроскопия. Спектрофотометрическое исследование проводилось на приборе СФ-2000.

Разделение суммы основных групп веществ с целью получения фракций биологически активных соединений проводили методом колоночной хроматографии, в качестве сорбентов использовали полиамид (фракция 50-160 m, Германия «Fluka») и алюминия оксид (для хроматографии). Доказательство структуры выделенных соединений проводили с использованием физико-химических методов анализа: определение температуры плавления на приборе Gallenkamp, определение растворимости согласно методике ГФ XII, ИК спектры, выполнены на спектрометре UR-20 Spectrod в таблетках калия бромида (концентрация вещества 0,5%). 1H ЯМР спектры, выполнены на спектрометре Bruker Avance III (400 МГц), в качестве растворителя был использован ДМСО – d6, в качестве внутреннего стандарта применяли тетраметилсилан (TMS).

Гипотензивную активность исследовали на наркотизированных мединалом кошках (400 мг/кг). Для исследования одного экстракта использовали шесть животных. Все исходные экстракты и фракции БАВ вводили внутривенно в дозе 50 мг/кг, предварительно растворив в 5 мл изотонического раствора.

Антикоагуляционную активность определяли in vitro при помощи коагулометра «Minilab-701». Для опытов использовали цитратную кровь. Экстракты и фракции БАВ испытывали в концентрации 1 мг/мл крови. В качестве контроля использовали цитратную кровь с натрия хлоридом. Эталоном сравнения служил гепарин в концентрации 1 ЕД/мл крови. Для определения механизма антикоагулянтной активности методом центрифугирования получали плазму, обогащенную тромбоцитами, и безтромбоцитную.

Диуретическую активность изучали на крысах-самцах массой 250-300 г. Исследуемые экстракты вводили в дозе 50 мг/кг. Препараты сравнения готовили из травы хвоща полевого и листьев брусники. Экскрецию креатинина с мочой определяли унифицированным методом Поппера, основанном на реакции Яффе, с помощью стандартного набора реактивов. Концентрацию ионов натрия и калия в моче определяли методом фотометрии на пламенном фотометре JENWAYPSP7.

Изучение острой токсичности сухих экстрактов и фракций к. черного проводили на белых мышах при однократном пероральном введении.

Экспериментальные животные находились в стандартных условиях вивария на типовом рационе в соответствии с нормами, утвержденными Приказом Минздрава СССР № 1179 от 10.10.1983 г., свободном доступе к пище и воде при 12-14-часовом световом дне. Все манипуляции с экспериментальными животными выполнялись в соответствии с правилами гуманного отношения к животным, методическими рекомендациями по их выведению из опыта и эвтаназии, регламентированными «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР № 775 от 12.08.1977 г.).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программ статистической обработки данных «STAT – Статистика». Для выявления статистической значимости различий использовали параметрический критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение качественного и количественного состава БАВ

В результате фитохимического анализа в экстрактах к. черного установлено наличие основных групп биологически активных веществ: флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, иридоидов, кумаринов, полисахаридов и сапонинов; методами хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента по значению Rf, окраске реактивами и методом добавки идентифицированы: кверцетин, лютеолин, гесперидин, кофейная и хлорогеновая кислоты, аукубин и изокаталпол. В экстрактах к. черного доказано отсутствие сильнодействующих веществ, таких как алкалоиды и сердечные гликозиды.

Для изучения количественного содержания иридоидов и флавоноидов в экстрактах к. черного разработана методика количественного определения флавоноидов и модифицирована методика количественного определения иридоидов (табл. 1).

Таблица 1

Метрологические характеристики методик количественного определения иридоидов и флавоноидов в экстракте травы V. nigrum



Pages:   || 2 | 3 |
 





 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.